人參固本丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

北京同仁堂股份有限公司科學(xué)研究所（100079）彭鵬

人參固本丸[1]收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》第一冊，由人參、地黃、熟地黃、山茱萸（酒炙）、山藥、澤瀉、牡丹皮、茯苓、麥冬、天冬等十味藥組成。該方主要功效是滋陰益氣，固本培元，用于陰虛氣弱，虛勞咳嗽，心悸氣短，骨蒸潮熱，腰酸耳鳴，遺精盜汗，大便干燥。原標(biāo)準(zhǔn)只收載了茯苓、山藥、人參、熟地黃、山茱萸、澤瀉、牡丹皮的顯微鑒別，不足以對本方進(jìn)行質(zhì)量控制，本研究增加了人參[2]、山茱萸[2]、麥冬[2]的薄層鑒別，同時采用高效液相色譜法測定山茱萸中馬錢苷的含量。通過研究，該方法簡便易行，準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與材料

①儀器：島津LC-10AVP高效液相色譜儀。色譜柱：ZORBAX SB-C18 （5μm 150mm×4.6mm）。②材料：人參固本丸樣品由北京同仁堂天然藥物有限公司提供，批號：3012999、4012002、5012995、5012996。馬錢苷（批號為：111640-200503）、人參皂苷Rg1（110703-200425）、人參皂苷Re（110754-200421）、熊果酸（批號742-200212）、丹皮酚（110708-200506），麥冬（批號：121013-200506），均購自中國藥品生物制品檢定所。實驗所用試劑均為分析純，液相色譜所用試劑均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

附圖1 人參的薄層色譜圖

附圖2 山茱萸的薄層色譜圖

附圖3 麥冬的薄層色譜圖

2.1.1 人參的薄層鑒別 取本品15g，剪碎，加硅藻土5g，研勻，加乙醚40ml，超聲處理10分鐘，濾過，棄去乙醚液，藥渣揮干乙醚，加水飽和的正丁醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液加1%氫氧化鈉溶液洗滌兩次，每次15ml，棄去堿液，再加正丁醇飽和的水洗至中性，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液；照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述供試品溶液6μl、對照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果見附圖1。

2.1.2 山茱萸的薄層鑒別 取本品20g，剪碎，加硅藻土10g，研勻，加乙醚60ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液揮干乙醚，殘渣加丙酮1ml使溶解，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取對照品溶液及供試品溶液各6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸(20∶4∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

附圖4 人參固本丸中馬錢苷高效液相色譜圖

2.1.3 麥冬的薄層鑒別 取本品10g ，剪碎，加水飽和的正丁醇40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml溶解，再加鹽酸3ml，置沸水浴上加熱回流1小時，放冷，用三氯甲烷提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取麥冬對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.2 含量測定 ①色譜條件 色譜柱：ZORBAX SB-C18（5μm 150mm×4.6mm）色譜柱；流動相：乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（8∶4∶88）；檢測波長：240nm；柱溫：40℃；流速：0.8ml/min；理論板數(shù)按馬錢苷峰計算應(yīng)不低于5000。②對照品溶液的制備 取馬錢苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。③供試品溶液的制備 取重量差異檢查項下的本品，剪碎，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）15分鐘使溶散，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10ml，置中性氧化鋁柱（100目～200目，4g，內(nèi)徑1cm，干法裝柱）上，用40%甲醇50ml洗脫，收集流出液及洗脫液，蒸干，殘渣加50%甲醇適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。④空白試驗 按處方中藥味比例，自配不含山茱萸的群藥，按標(biāo)準(zhǔn)中制法制成空白制劑，照供試品溶液制備方法制樣，測定，結(jié)果陰性對照樣品在與馬錢苷相同保留時間處，未見色譜峰，故認(rèn)為無干擾。

⑤線性關(guān)系考察 精密吸取濃度為0.02452mg/ml的馬錢苷對照品溶液3、6、9、12、15、20ul，及濃度為0.1226 mg/ml的馬錢苷對照品溶液6、8、10、12 ul注入液相色譜儀，照上述色譜條件測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，馬錢苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y= 2057008.79 x + 12650.04 r=0.9999結(jié)果表明，馬錢苷在0.07356～1.4712μg范圍內(nèi)具良好的線性關(guān)系。⑥精密度試驗 取同一供試品溶液（5012996批）連續(xù)進(jìn)樣6次，觀察儀器的精密度，測得馬錢苷含量的平均值為0.2189mg/g，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.45%。⑦穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液（5012996批），分別于配制后0、2、4、8、12、24小時，依法測定，馬錢苷平均總量為0.2156mg/g，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.30%（n=6），試驗結(jié)果表明，供試品溶液制備后24小時內(nèi)基本穩(wěn)定。⑧重復(fù)性試驗 取同批（5012996）樣品，平行制樣6份，測定，求得馬錢苷平均含量為0.2112mg/g，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為RSD=0.89%（n=6）。⑨回收率試驗 采用加樣回收法，精密稱取已知含量的同批（5012996，馬錢苷含量0.2112mg/g）樣品1g，分別精密加入馬錢苷對照品（0.28198mg），照2.2.3項下方法操作，平行制樣6份，測定，按下式計算回收率，結(jié)果表明本方法具有良好的準(zhǔn)確度。測得馬錢苷的平均回收率為101.56%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.31%（n=6）。⑩馬錢苷對照品純度測定 精密稱取馬錢苷對照品10mg，置50mL棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取對照品溶液5μL注入液相色譜儀中，歸一化法測定含量，馬錢苷含量為100%。11樣品測定結(jié)果 分別取4批樣品，依上述色譜條件進(jìn)行測定，每批樣品測定2次，測定結(jié)果見附表2。

3 討論

本次研究增加了人參、山茱萸、麥冬的薄層鑒別，通過對多批樣品的鑒別，結(jié)果表明薄層色譜鑒別方法良好，陰性無干擾，可以作為人參固本丸的質(zhì)量控制方法之一。

含量測定的供試品溶液制備中，根據(jù)馬錢苷的性質(zhì)，參考《中國藥典》2010版一部山茱萸項下含量測定項，在30、60、90分鐘不同回流時間進(jìn)行了比較，結(jié)果表明提取60分鐘后馬錢苷的含量不再增加，因此確定提取時間為60分鐘。比較了加入提取溶劑的量對馬錢苷含量的影響，通過比較，在加入10ml、25ml、50ml時，用25ml與50ml溶劑提取的馬錢苷含量相近，故選擇25ml溶劑進(jìn)行提取。

附表1 馬錢苷回收率試驗成果

附表2 樣品中馬錢苷測定結(jié)果（n=2）

由于處理方法中有過中性氧化鋁柱的步驟，為保證洗脫完全，在50ml洗脫液流盡后再加入10ml洗脫液，收集后測定含量，通過測定，后續(xù)的10ml樣品液中馬錢苷的含量為0，結(jié)果表明50ml洗脫液已將樣品完全洗凈。

檢測波長的選擇：取馬錢苷對照品，加50%甲醇溶解，在200～400nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在240nm處有最大吸收，故選擇240nm作為檢測波長。

通過本次研究，完善了人參固本丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增加了薄層鑒別及含量測定項，與原來僅有顯微鑒別的標(biāo)準(zhǔn)相比，提高了質(zhì)量控制水平，有利于保證藥品的質(zhì)量。