何曉梅，張　穎，許星云，史　珊，喬德亮

（1.皖西學(xué)院生物與制藥工程學(xué)院，安徽六安237012；2.植物細(xì)胞工程安徽省工程技術(shù)研究中心，安徽六安237012）

低檔綠茶多糖的酶法輔助提取及抗氧化活性研究

何曉梅1，2，張穎1，許星云1，史珊1，喬德亮1

（1.皖西學(xué)院生物與制藥工程學(xué)院，安徽六安237012；2.植物細(xì)胞工程安徽省工程技術(shù)研究中心，安徽六安237012）

以皖西低檔綠茶為原料，通過(guò)酶法輔助浸提茶多糖，然后對(duì)浸提液進(jìn)行醇沉、真空干燥得粗多糖，比較三種不同方法對(duì)粗多糖脫蛋白效果，并研究茶多糖的體外抗氧化活性。結(jié)果表明：酶法輔助浸提的最優(yōu)條件：料液比1∶30（g/mL）、酶解溫度45℃、酶解時(shí)間120min、纖維素酶添加量12mg/g，果膠酶添加量12mg/g、浸提1次，茶多糖得率達(dá)到5.414%。三氯乙酸法、sevage法、木瓜蛋白酶法對(duì)粗多糖中蛋白的最大脫除率分別為84.14%、69.45%、74.34%，多糖損失率分別為18.56%、24.01%、12.34%。相對(duì)而言，木瓜蛋白酶法條件溫和，更適合茶多糖脫蛋白。另外，茶多糖具有較強(qiáng)的還原能力以及對(duì)羥基自由基的清除能力，對(duì)亞硝基具有一定的清除作用。

茶多糖，纖維素酶，果膠酶，脫蛋白，抗氧化活性

皖西地區(qū)茶葉資源豐富，霍山、金寨、舒城、六安等地都是產(chǎn)茶大縣，茶葉是農(nóng)村經(jīng)濟(jì)的主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)之一。其中名優(yōu)茶產(chǎn)量只占茶葉總產(chǎn)量20%左右，占總產(chǎn)值的80%以上。夏秋茶和粗老茶滯銷，茶農(nóng)的收入受到極大的影響。茶葉中的主要生理活性物質(zhì)有茶多酚、茶多糖、茶氨酸、咖啡堿等，茶多糖是茶葉中繼茶多酚開(kāi)發(fā)之后的又一熱點(diǎn)課題。茶多糖是一種酸性糖蛋白，并結(jié)合有大量的礦質(zhì)元素，為水溶性復(fù)合物，易溶于熱水，不溶于高濃度的有機(jī)溶劑。目前，其功效的研究集中在降血糖［1-2］、降血脂［3］、抗氧化［4］、增強(qiáng)免疫力、治療心血管疾病等方面，近些年來(lái)發(fā)現(xiàn)茶多糖還具有治療糖尿病的功效［5］。研究表明，茶多糖在粗老茶中含量比嫩茶中含量高［6-7］。目前對(duì)皖西粗老低檔綠茶多糖的相關(guān)研究未見(jiàn)報(bào)道，若能從中提取茶多糖并進(jìn)行相關(guān)研究，發(fā)掘其中的價(jià)值，對(duì)于皖西粗老茶葉的綜合利用具有極大的意義。

本實(shí)驗(yàn)以皖西粗老低檔綠茶為原料，通過(guò)酶法輔助浸提茶多糖并進(jìn)行純化，初步研究茶多糖的體外抗氧化活性，為皖西粗老綠茶的深度開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

低檔綠茶市售；酶制劑：纖維素酶（≥30U/mg）、果膠酶（30U/mg）、木瓜蛋白酶（20U/mg）Ruibio分裝；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（≥98%） 貴州迪大科技有限責(zé)任公司；亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品北京萊耀生物科技有限公司；牛血清白蛋白上海生工生物工程有限公司；考馬斯亮藍(lán)G250、重蒸酚、石油醚、無(wú)水乙醇、三氯乙酸、氯仿、正丁醇、濃硫酸、鐵氰化鉀、三氯化鐵、對(duì)氨基苯磺酸、鹽酸萘乙二胺、水楊酸、過(guò)氧化氫、鄰苯三酚等試劑均為分析純；水蒸餾水。

FA1004B電子分析天平新芝生物科技有限公司；HH-S4數(shù)顯控溫水浴鍋金壇市華龍實(shí)驗(yàn)儀器廠；DHG-9420B上?，槴{智能型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱上海嘉措儀器設(shè)備有限公司；TU-1901雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；SY-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、SHZ－D（Ⅲ）型循環(huán)水真空泵上海亞榮生化儀器廠；GL-21M高速冷凍離心機(jī)湖南長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司；VD23真空干燥箱上海摩億科貿(mào)有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1茶葉的預(yù)處理將新鮮的低檔茶葉除梗，粉碎，過(guò)篩得30～60目的粉末，用石油醚索氏提取2h，40℃烘干；再用70%乙醇于70℃浸提2h，抽濾，40℃烘干，保存進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2茶葉粗多糖的提取準(zhǔn)確稱取一定質(zhì)量的預(yù)處理茶葉粉末，按照一定的水茶比加入蒸餾水和一定質(zhì)量分?jǐn)?shù)的酶，于一定溫度下水浴提取一定時(shí)間后，升溫滅酶活10min，抽濾，離心得濾液，取出部分濾液測(cè)定浸提液中茶多糖含量，剩余濾液減壓濃縮為原體積的1/4，然后向濃縮液中加入95%的乙醇至乙醇終濃度為80%［8］，4℃過(guò)夜，離心，收集沉淀，真空干燥得粗多糖。

1.2.2.1單因素實(shí)驗(yàn)纖維素酶添加量的確定：分別準(zhǔn)確稱取5.000g經(jīng)預(yù)處理的茶葉粉末21份，按0、2、4、6、8、10、12、14mg/g的量加入纖維素酶（每個(gè)水平3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)），在料液比1∶30、酶解溫度50℃下酶解120min，升溫滅酶活10min，抽濾，離心得濾液，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

果膠酶添加量的確定：在纖維素酶添加量確定的基礎(chǔ)上取樣，按0、2、4、6、8、10、12、14mg/g的量加入果膠酶酶解浸提，確定果膠酶加入量。

酶解時(shí)間的確定：在纖維素酶加入量和果膠酶加入量確定的基礎(chǔ)上取樣，分別酶解提取40、60、80、100、120、140min，以確定酶解時(shí)間。

酶解溫度的確定：在纖維素酶加入量、果膠酶加入量和酶解時(shí)間確定的基礎(chǔ)上取樣，分別于35、40、45、50、55℃下酶解提取，以確定酶解溫度。

1.2.2.2正交實(shí)驗(yàn)在1.2.2.1單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以纖維素酶添加量（A）、果膠酶添加量（B）、酶解時(shí)間（C）和酶解溫度（D）為考察對(duì)象，以茶多糖得率為考察指標(biāo)，設(shè)計(jì)L9（34）正交實(shí)驗(yàn)（見(jiàn)表1），確定酶法輔助浸提茶多糖的最佳工藝條件。

表1　正交實(shí)驗(yàn)水平表Table 1　Orthogonal experiment level table

1.2.3茶葉粗多糖脫蛋白

1.2.3.1三氯乙酸法脫蛋白精確量取7份茶多糖溶液10mL，分別加入三氯乙酸晶體0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07g，快速混勻，4℃靜置過(guò)夜，然后按照5000r/min離心10min，丟棄沉淀，收集上清液，再次將其定容至10mL的容量瓶中，測(cè)定多糖的含量及蛋白質(zhì)含量。

1.2.3.2sevag法脫蛋白［9］將粗多糖研磨，用適量蒸餾水溶解，精確量取茶多糖樣品液30mL，sevage試劑（三氯甲烷∶正丁醇=4∶1）6mL，劇烈振搖30min，再在5000r/min的條件下離心10min，去除下層和沉淀部分，測(cè)定上清液中的多糖和蛋白質(zhì)含量。上清液按上述方法繼續(xù)進(jìn)行第二次脫蛋白，測(cè)定多糖與蛋白質(zhì)含量。如此重復(fù)上述步驟，脫蛋白進(jìn)行第三次、第四次、第五次、第六次，分別測(cè)定其上清液中多糖與蛋白質(zhì)含量。

1.2.3.3木瓜蛋白酶法脫蛋白［10］精確量取6份10mL多糖樣品液于錐形瓶中，調(diào)節(jié)其pH至6.0，再分別向其中加入濃度為0.25%、0.50%、0.75%、1.00%、1.25%、1.50%的木瓜蛋白酶液10mL，將混合液于55℃的水浴鍋中保溫1.5h，然后于沸水浴中5min滅酶活，5000r/min離心10min，除去沉淀，得脫蛋白液，分別測(cè)定其中的多糖含量及蛋白質(zhì)含量。

1.2.4精制茶多糖的體外活性研究將脫蛋白的多糖溶液透析，減壓濃縮，加入95%乙醇醇沉過(guò)夜，離心，真空干燥得精制茶多糖。

1.2.4.1茶多糖還原力的測(cè)定根據(jù)文獻(xiàn)［11］，多糖還原力的測(cè)定采用普魯士藍(lán)法，量取1.0mL濃度為40、80、120、160、200μg/mL的多糖溶液于5支試管中，依次加入2.5mL pH6.6的磷酸鹽緩沖液和2.5mL 1.0%的鐵氰化鉀溶液，混勻后置于50℃水浴20min，然后加入2.5mL 10%的三氯乙酸溶液，混勻，反應(yīng)30min后，4000r/min離心10min。各移取2.5mL上清液于另一試管中，加入2.5mL蒸餾水及0.5mL 0.1%的三氯化鐵溶液，混勻，靜置10min后，測(cè)定OD700nm。以VC作陽(yáng)性對(duì)照。

1.2.4.2茶多糖對(duì)亞硝基（NO2-）清除能力的測(cè)定根據(jù)文獻(xiàn)［12-13］，茶多糖對(duì)NO2-清除能力的測(cè)定采用鹽酸萘乙二胺比色法。分別準(zhǔn)確吸取1mL濃度為40、80、120、160、200μg/mL的多糖溶液于5支具塞試管中，加入2mL 10μg/mL的NaNO2標(biāo)準(zhǔn)溶液、2mL pH3.0的檸檬酸緩沖液，搖勻后于37℃水浴中保溫1h。取出后加入2mL 4g/L對(duì)氨基苯磺酸，搖勻靜置5min，再加入lmL 2g/L鹽酸萘乙二胺，混勻靜置15min，以VC作陽(yáng)性對(duì)照，測(cè)定550nm處吸光度。

NO2-清除率（%）=［（A0-A）/A0］×100

式中：A0為空白對(duì)照吸光值；A為不同濃度反應(yīng)液（茶多糖或VC）吸光值。

1.2.4.3羥基自由基（·OH）清除能力的測(cè)定根據(jù)文獻(xiàn)［14］，采用Fenton反應(yīng)法測(cè)定茶多糖對(duì)·OH的清除能力。取編號(hào)的試管6支，依次分別加入1.0mL 6mmol/L FeSO4、2.0mL 6mmol/L水楊酸溶液和2.0mL濃度為0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL的茶多糖溶液，最后加入2.0mL 6mmol/L H2O2室溫下反應(yīng)1h，測(cè)定510nm處吸光度，計(jì)算清除率。其中以蒸餾水為空白對(duì)照，以VC作陽(yáng)性對(duì)照。

清除率（%）=（A0-A）/A0×100

式中：A0為空白對(duì)照液的吸光度；A為加入茶多糖或VC溶液后的吸光度。

1.2.5茶多糖及蛋白質(zhì)含量的測(cè)定茶多糖含量測(cè)定采用苯酚-硫酸法。根據(jù)吸光度值（0.2～0.8）與濃度值（＜100μg/mL）線性關(guān)系良好，以減小濃度的相對(duì)誤差，提高測(cè)定的準(zhǔn)確度，對(duì)文獻(xiàn)［15］葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度取值范圍略有修改，其葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y= 0.016x-0.018，R2=0.9995。

茶多糖得率（%）［15］=［（C樣品×提取液總體積×換算因子）/（茶樣質(zhì)量×103）］×100

多糖損失率（%）=（脫蛋白前茶多糖含量-脫蛋白后茶多糖含量）/脫蛋白前茶多糖含量×100

蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用Bradford法，以牛血清蛋白做標(biāo)準(zhǔn)曲線。其標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=0.1646x-0.1739，R2=0.9992，蛋白質(zhì)濃度在10～100μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

蛋白脫除率（%）=（脫蛋白前蛋白質(zhì)含量-脫蛋白后蛋白質(zhì)含量）/脫蛋白前蛋白質(zhì)含量×100

2　結(jié)果與分析

2.1酶法輔助浸提單因素實(shí)驗(yàn)

2.1.1單一酶添加量對(duì)茶多糖得率的影響纖維素酶催化纖維素分解，果膠酶分解果膠質(zhì)，從而破壞茶葉細(xì)胞壁，使茶葉內(nèi)的成分更容易溶解、擴(kuò)散。由圖1可知，在酶實(shí)驗(yàn)添加量范圍內(nèi)，多糖的得率隨著酶添加量的增加而增加。纖維素酶添加量從6～10mg/g時(shí)茶多糖的得率增加比較明顯，但增加幅度比較平緩。果膠酶添加量從4～10mg/g時(shí)茶多糖的得率增加比較明顯。兩者都是隨著酶濃度的增加茶多糖得率趨于穩(wěn)定?？赡茉蚴敲噶窟^(guò)高，底物濃度不能對(duì)酶達(dá)到飽和，致使酶的作用受到抑制［16］。另外，相比于果膠酶，纖維素酶的加入對(duì)茶多糖得率影響大些。

2.1.2單一酶酶解時(shí)間對(duì)茶多糖得率的影響由圖2可知，茶多糖的得率隨酶解時(shí)間的增加而增加。酶解時(shí)間在40～60min時(shí)，茶多糖得率低且增加不明顯，可能原因是茶葉粉末仍處于溶脹階段；在60～120min時(shí)茶多糖得率增加明顯；酶解時(shí)間達(dá)到120min后茶多糖得率增加不明顯。長(zhǎng)時(shí)間的浸提往往導(dǎo)致大量雜質(zhì)溶出，另外耗費(fèi)能源也越多，故采用酶解時(shí)間120min。

圖1　酶添加量對(duì)茶多糖得率的影響Fig.1　Effect of enzymolysis concentration on extraction of tea polysaccharide

圖2　酶解時(shí)間對(duì)茶多糖得率的影響Fig.2　Effect of enzymolysis time on extraction of tea polysaccharide

2.1.3單一酶酶解溫度對(duì)茶多糖得率的影響由圖3可知，在35～55℃范圍內(nèi)，對(duì)于纖維素酶和果膠酶，隨酶解溫度的升高，茶多糖得率呈現(xiàn)出先增加后下降的趨勢(shì)，酶解溫度為45℃時(shí)，茶多糖的得率達(dá)到最高，與文獻(xiàn)［17］結(jié)果一致。這是由于開(kāi)始隨溫度升高，酶反應(yīng)速度加快，茶多糖得率增加，之后隨溫度進(jìn)一步升高，引起酶蛋白變性，酶活力降低，茶多糖得率降低。

圖3　酶解溫度對(duì)茶多糖得率的影響Fig.3　Effect of enzymolysis temperature on extraction of tea polysaccharide

2.1.4正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化茶多糖提取工藝按照表1的因素水平，進(jìn)行四因素三水平正交實(shí)驗(yàn)L9（34），正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果和極差分析見(jiàn)表2。由表2可知，各因素對(duì)綠茶粗多糖得率影響主次順序?yàn)椋篈＞C＞B＞D，即酶解溫度對(duì)綠茶粗多糖得率影響最大，依次是纖維素酶添加量，酶解時(shí)間，果膠酶添加量影響最小。雙酶作用下的得率比單酶作用下的得率有了明顯的提高，茶多糖提取的最佳工藝組合為A2B2C3D3，即酶解溫度45℃，酶解時(shí)間120min，纖維素酶添加量12mg/g，果膠酶添加量12mg/g。在此條件下進(jìn)行茶多糖提取的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，3組平行實(shí)驗(yàn)的結(jié)果分別是5.415%、5.420%、5.408%，平均得率為5.414%。

表2　正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及方差分析Table 2　Design and results of orthogonal experiment

2.2粗多糖不同脫蛋白方法比較

2.2.1三氯乙酸法脫蛋白效果由圖4可知，三氯乙酸添加量小于3×10-3g/mL時(shí)，其蛋白脫除率上升速度極快，特別是在添加量為（2～3）×10-3g/mL之間。當(dāng)三氯乙酸添加量為3‰時(shí)其對(duì)粗多糖蛋白脫除率達(dá)到78.02%，多糖損失率為9.45%。當(dāng)大于3×10-3g/mL時(shí)，蛋白脫除率幾乎處于平穩(wěn)趨勢(shì)，三氯乙酸添加量對(duì)蛋白的去除效果不明顯；然而隨著三氯乙酸添加量的增大，多糖損失率呈緩慢平穩(wěn)上升趨勢(shì)。三氯乙酸添加量達(dá)到7‰時(shí)，其對(duì)蛋白的脫除率為84.14%，其多糖損失率為18.56%。三氯乙酸與蛋白質(zhì)形成不可逆沉淀，反應(yīng)較為劇烈，濃度過(guò)高，多糖結(jié)構(gòu)也有可能被破壞［18］，繼而影響其活性。

圖4　TCA法脫蛋白效果Fig.4　Results of removal of protein from trichloroacetic acid method

2.2.2sevage法脫蛋白效果sevage法是根據(jù)蛋白質(zhì)在三氯甲烷溶劑中變性的特點(diǎn)來(lái)脫除蛋白的。由圖5可知，使用sevage法1次后其蛋白脫除率高達(dá)32.71%，多糖損失率為9.31%。第5次脫蛋白率達(dá)68.23%，多糖損失率達(dá)22.34%。其后，其脫蛋白效果不再呈現(xiàn)優(yōu)勢(shì)，逐漸趨于平穩(wěn)態(tài)。第7次蛋白脫除率為69.45%，而多糖損失率高達(dá)24.01%。與三氯乙酸法比較，三氯甲烷有毒，且其脫蛋白效果不及三氯乙酸，多糖損失率相對(duì)較高。

圖5　Sevage法脫蛋白效果Fig.5　Results of removal of protein from sevage

2.2.3木瓜蛋白酶法脫蛋白效果由圖6可知，隨著酶添加量的逐漸增加，蛋白質(zhì)脫除率及茶多糖的損失率都在逐漸增大。當(dāng)酶添加量小于5‰時(shí)，每增加一梯度，蛋白質(zhì)脫除率變化都比較明顯，尤其是（2.5～5.0）×10-3g/mL之間。在5.0×10-3g/mL酶添加量的情況下，其蛋白脫除率高達(dá)74.34%，多糖損失率為12.34%。當(dāng)酶添加量大于5.0×10-3g/mL后，蛋白脫除率變化呈現(xiàn)平穩(wěn)趨勢(shì)。相比與三氯乙酸法和Sevag法，酶法脫蛋白率高，多糖損失率低，無(wú)污染。

圖6　木瓜蛋白酶法脫蛋白效果Fig.6　Protein removal effect of papain method

2.3茶葉多糖的體外活性檢測(cè)

比較3種不同方法脫蛋白效果，選取木瓜蛋白酶法脫蛋白液透析，濃縮，醇沉，離心，真空干燥（40℃）制得精制茶多糖。

2.3.1茶葉多糖還原力的測(cè)定普魯士藍(lán)法測(cè)定原理表明：吸光度與多糖還原能力成正比。根據(jù)1.2.4.1方法，茶多糖和VC還原力測(cè)定結(jié)果如表3。

表3　茶多糖和VC還原力的測(cè)定Table 3　Determination of reducing power of tea polysaccharide and VC

由表3可以看出，隨著茶葉多糖濃度的增加，其還原力逐漸加強(qiáng)。茶葉多糖濃度在120～160μg/mL時(shí)，其還原力與50μg/mL的抗壞血酸還原力相當(dāng)。

2.3.2茶葉多糖對(duì)亞硝基的清除作用人或動(dòng)物攝取的食物中含有或多或少的亞硝酸鹽，亞硝酸鹽在酸性環(huán)境（人或動(dòng)物的胃）中容易合成亞硝胺，亞硝胺是一類化學(xué)致癌物，清除亞硝酸鹽是減少致癌的有效途徑［19］。茶葉多糖對(duì)NO2-的清除作用見(jiàn)圖7，在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，隨著茶多糖濃度的增加，其清除NO2-的能力逐漸增強(qiáng)，但比同濃度VC的清除作用弱。

圖7　茶多糖和VC對(duì)NO2-的清除作用Fig.7　Scavenging effect of tea polysaccharides and VCon NO2-

2.3.3茶葉多糖對(duì)羥基自由基（·OH）的清除能力由圖8可知，茶多糖對(duì)羥自由基具有較好的清除作用，濃度達(dá)到0.2mg/mL時(shí)，其清除率達(dá)到約75%，其后基本保持不變，而VC濃度達(dá)到0.6mg/mL時(shí)，其清除率達(dá)到約75%。雖然隨著濃度的增加，茶多糖對(duì)·OH的清除率低于VC，但較其他天然提取物仍具有優(yōu)勢(shì)［20-21］。

圖8　茶多糖和VC對(duì)·OH的清除作用Fig.8　Scavenging effect of tea polysaccharides and VCon·OH

3　結(jié)論

3.1以皖西粗老低檔綠茶為原料，通過(guò)單因素和正交實(shí)驗(yàn)，確定酶輔助浸提茶多糖的最佳工藝條件為：酶解溫度45℃，酶解時(shí)間120min，纖維素酶添加量12mg/g，果膠酶添加量12mg/g，茶水比1∶30（g/mL），浸提1次，茶多糖得率達(dá)到5.414%。

3.2比較三氯乙酸法、sevage法、木瓜蛋白酶法對(duì)粗多糖脫蛋白效果：木瓜蛋白酶法更適合茶多糖脫蛋白，條件溫和，蛋白脫除率高，且多糖損失率低。

3.3茶多糖體外抗氧化活性表明：其具有較強(qiáng)的還原能力以及對(duì)羥基自由基的清除能力，對(duì)亞硝基具有一定的清除作用。

［1］陳建國(guó).茶多糖的提取及其藥理作用研究概況［J］.中草藥，2000，31（7）：6-7.

［2］陳萍，朱麗云，金暉.茶多糖的分離制備及其對(duì)ALX模型小鼠的降糖作用研究［J］.食品科技，2013，38（5）：194-196.

［3］韋璐，秦小明，林華娟，等.金花茶多糖的降血脂功能研究［J］.食品科技，2008（7）：247-249.

［4］聶少平，謝明勇，羅珍.茶葉多糖的抗氧化活性研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2005，17（5）：549-552.

［5］潘見(jiàn)，陳彥，方偉，等.具有抗氧化活性茶多糖TPS-Ⅱ的分離純化及其性質(zhì)研究［J］.食品科學(xué)，2009，30（3）：25-28.

［6］陳建國(guó)，胡欣，梅松.茶葉中茶多糖的提取和測(cè)定方法［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2004，14（4）：432-433.

［7］汪東風(fēng)，謝曉鳳，王澤農(nóng)，等.粗老茶中的多糖含量及其保健作用［J］.茶葉科學(xué)，1994，14（1）：73-74.

［8］陳義勇，竇祥龍，黃友如，等.響應(yīng)面法優(yōu)化超聲-微波協(xié)同輔助提取茶多糖工藝［J］.食品科學(xué)，2012，33（4）：100-103.

［9］王傳名，董祺，管從勝.日照綠茶粗多糖脫蛋白工藝研究［J］.食品工業(yè)科技，2010，31（8）：274-276.

［10］梁軍，夏永剛，楊炳有.麻黃多糖中蛋白含量測(cè)定及脫蛋白方法的比較［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2011，39（2）：73-75.

［11］陳欣，龔蘭，劉冠卉.食用真菌多糖提取條件的優(yōu)化及其還原力的比較［J］.食品科學(xué)，2010，31（14）：140-144.

［12］李莉梅，李恒，朱苗，等.野生仙人掌多糖對(duì)DPPH·、NO2-的清除能力及其還原力研究［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013（15）：121-123.

［13］陳莉華，龍進(jìn)國(guó)，譚林艷，等.紅果參多糖的提取純化及抗氧化活性研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2013（25）：170-173.

［14］周向軍，高義霞，袁毅君.烏龍茶多糖提取工藝及抗氧化作用研究［J］.中國(guó)釀造，2011（8）：80-84.

［15］何曉梅，沈濤濤，陳壯壯，等.響應(yīng)面法優(yōu)化皖西粗老綠茶茶多糖提取工藝［J］.皖西學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，30（2）：76-79.

［16］程雅芳，楊洋，溫富雄.響應(yīng)面分析法優(yōu)化酶提取甜茶茶多酚工藝［J］.食品科學(xué)，2012，33（10）：10-15.

［17］楊蓉生，陳煉紅，唐俊妮，等.復(fù)合酶法提取紅雪茶粗多糖工藝優(yōu)化研究［J］.食品工業(yè)科技，2012，33（12）：285-288.

［18］朱美靜，童群義.猴頭多糖脫蛋白方法的研究［J］.河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2005，26（4）：25-27.

［19］李佳穎，韓照祥，顧宏新.洋蔥提取液對(duì)亞硝酸鹽清除作用的研究［J］.化學(xué)工程與裝備，2012（4）：25-27.

［20］李朝陽(yáng)，劉魁，韓忠宵，等.大蒜多糖的酶法提取及其抗氧化性研究［J］.食品科學(xué)，2008，29（1）：117-120.

［21］徐勝龍，楊建雄.柿子醇提取物的體外抗氧化研究［J］.食品科學(xué)，2008，29（4）：131-134.

Enzymatic-assisted extraction process and antioxidant activities of tea polysaccharide from low quality green tea

HE Xiao-mei1，2，ZHANG Ying1，XU Xing-yun1，SHI Shan1，QIAO De-liang1
（1.College of Biology and Pharmaceutical Engineering，West Anhui University，Liu’an 237012，China；2.Engineering Technology Research Center of Plant Cell Engineering，Liu’an 237012，China）

Low quality green tea as material and enzymatic extraction as assisted method for extraction，the research extracted alcohol precipitation，vacuum dried crude tea polysaccharides，and compared the three methods of removing protein from crude tea polysaccharides，as well as studied vitro antioxidant activities of the tea polysaccharides.The result showed that optimal conditions of enzymatic assisted extraction:ratio for water and material was 1∶30（g/mL），enzymatic temperature 45℃，enzymatic time 120min，cellulose enzyme loadings 12mg/g，pectinase loadings 12mg/g，and extraction time once.Tea polysaccharides extraction ratio could be 5.414%.Maximum removal rate for crude polysaccharides deproteinization through trichloroacetic acid method，sevage method，and papain method was 84.14%，69.45%，and 74.34%respectively.Polysaccharides loss rate was 18.56%，24.01%，and 12.34%respectively.Comparatively papain method was with a mild condition and best fits for tea polysaccharides deproteinization.In addition，tea polysaccharides had better reducing capacity and free radical scavenging ability of·OH，as well as certain reducing ability to NO2-.

tea polysaccharides；cellulose enzyme；pectinase；deproteinization；vitro antioxidant activities

TS272

A

1002-0306（2015）10-0153-06

10.13386/j.issn1002-0306.2015.10.023

2014-06-06

何曉梅（1974-），女，碩士研究生，講師，研究方向：天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)。

安徽省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（KJ2013B341）；省級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項(xiàng)目（AH201310376027）；國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31271853）；六安市定向委托項(xiàng)目（2012LWA011）；皖西學(xué)院黨建創(chuàng)新活動(dòng)項(xiàng)目（WXXYDJ12003）；皖西學(xué)院“生物質(zhì)煉制”科技創(chuàng)新平臺(tái)項(xiàng)目（004013010）。