黃　鑫，郝寶成，高旭東，劉建枝，王保海，梁劍平

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所 農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室甘肅省新獸藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730050；2.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所）

疾病防控

速康解毒口服溶液對兔皮膚刺激性和過敏性的實(shí)驗(yàn)研究

黃鑫1，郝寶成1，高旭東1，劉建枝2，王保海2，梁劍平1

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所 農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室甘肅省新獸藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730050；2.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所）

試驗(yàn)旨在為評價(jià)動物瘋草中毒解毒治療藥物——速康解毒口服溶液的臨床前應(yīng)用安全性，為臨床推廣應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。用速康解毒口服溶液、賦形劑（蒸餾水）局部涂抹大白兔破損皮膚及完整皮膚，并逐日觀察癥狀表現(xiàn)，統(tǒng)計(jì)觀察結(jié)果。用速康解毒口服溶液或賦形劑、2，4-二硝基氯苯（DNCB）對大白兔多次致敏，并于2周后觀察大白兔的反應(yīng)。結(jié)果表明：速康解毒口服溶液對家兔完整皮膚刺激反應(yīng)的平均分值為零，屬于無刺激藥物，對破損皮膚也無明顯刺激；在過敏性實(shí)驗(yàn)中，給藥組5只家兔中1只有輕微的過敏現(xiàn)象，結(jié)合致敏反應(yīng)評價(jià)的分值法和致敏反應(yīng)發(fā)生率，速康解毒口服溶液對家兔皮膚過敏反應(yīng)的分值為0.2（1/5），致敏率為20%（1/5），具有弱致敏性。結(jié)論：速康解毒口服溶液對家兔皮膚無明顯刺激性，有輕微過敏現(xiàn)象，屬于臨床安全藥物。

速康解毒口服溶液；皮膚刺激性；皮膚過敏性；安全性

草地是畜牧業(yè)發(fā)展的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，也是農(nóng)牧民賴以生存的基本生產(chǎn)資料，更是重要的綠色生態(tài)屏障，對維護(hù)國家生態(tài)和食品安全，保護(hù)人類生存環(huán)境具有十分重要的意義。隨著畜牧業(yè)的發(fā)展，人們對草地自然資源的利用增加，利用方式也多樣化，對草地資源利用不當(dāng)致使瘋草等有毒植物迅速蔓延，加之瘋草等有毒植物的抗逆性相對較強(qiáng)，與優(yōu)良牧草產(chǎn)生激烈的生存競爭，造成優(yōu)良牧草的質(zhì)量、產(chǎn)量下降，從而破壞了生態(tài)平衡，加速草場的退化，阻礙了畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。瘋草主要分布于俄羅斯、西班牙、冰島、美國、加拿大、墨西哥及北非的摩洛哥和埃及等地，其中美國西部瘋草危害最嚴(yán)重［1］，種類包括絹毛棘豆、藍(lán)伯氏棘豆（O.lambertii）、斑莢黃芪、密柔毛黃芪（A.mollissimus）等［2］。在我國，瘋草主要分布在西南、華北、西北地區(qū)，如寧夏、青海、內(nèi)蒙古、陜西、甘肅、西藏、云南、新疆等省區(qū)。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，目前，我國瘋草面積已經(jīng)超過了1 100萬hm2，約占全國草場面積的2.8%，而且每年都有增加的趨勢［3］。我國瘋草有45種之多，其中棘豆屬23種、黃芪屬22種［4］。棘豆屬的黃花棘豆、甘肅棘豆、小花棘豆、毛瓣棘豆和冰川棘豆，黃芪屬的莖直黃芪和變異黃芪（A.variabilis）［5］都屬于危害較大的瘋草。

對于動物，瘋草最主要的危害是引起家畜瘋草中毒，出現(xiàn)精神沉郁、反應(yīng)遲鈍、被毛粗亂、神經(jīng)調(diào)節(jié)機(jī)能紊亂、母畜流產(chǎn)、公畜不育等［4，6-7］，嚴(yán)重者可導(dǎo)致家畜中毒死亡；病理變化主要為心臟右心室肥大，心肌纖維腫脹、斷裂、橫紋不清或消失，肝臟充血，神經(jīng)元、肝細(xì)胞、腎臟近曲小管上皮細(xì)胞以及腎上腺髓質(zhì)部的上皮細(xì)胞與皮質(zhì)部的球狀帶出現(xiàn)明顯的空泡變性等［4，8］。由于我國草原分布廣、面積大，很難使動物在放牧過程中不采食瘋草，因此，只能加強(qiáng)草原畜牧管理，通過防除和利用相結(jié)合的方法，才能有效控制家畜的瘋草中毒，減少損失。近年來，國內(nèi)外關(guān)于瘋草中毒的研究較多，但都主要集中在瘋草有毒成分、動物瘋草中毒的機(jī)理、瘋草中毒的防治等方面，雖然已研制出相應(yīng)的治療或預(yù)防藥物，但都存在應(yīng)用效果不盡人意的地方。西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院和中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所從動物瘋草中毒機(jī)理出發(fā)，經(jīng)過3年多的研究，研制出了具有良好作用效果的解毒治療藥物速康解毒口服溶液。本研究擬通過動物皮膚刺激實(shí)驗(yàn)和過敏實(shí)驗(yàn)，為科學(xué)評價(jià)其安全性提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1主要試劑

速康解毒口服溶液（由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所提供）；硫化鈉（分析純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司），實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成濃度為8%的硫化鈉水溶劑，避光密封保存；2，4-二硝基氯苯（分析純，成都西亞試劑有限公司），實(shí)驗(yàn)時(shí)用分析純的丙酮配制成1%2，4-二硝基氯苯致敏態(tài)和0.1%2，4-二硝基氯苯激發(fā)態(tài)，避光密封保存；丙酮（分析純）；賦形劑：蒸餾水。

1.2實(shí)驗(yàn)動物

成年、健康日本大耳兔16只，被毛白色，普通級，體重2.0～2.5 kg，雌雄各8只，購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動物中心。

1.3家兔皮膚刺激實(shí)驗(yàn)

1.3.1動物分組及實(shí)驗(yàn)前處理取健康白色家兔16只，公母各半，實(shí)驗(yàn)前飼養(yǎng)5 d并觀察飲食和行為，若正常則按性別、體重隨機(jī)分為4組，每組4只。一組給藥前24 h將家兔背部脊柱兩側(cè)被毛剪去，隨后用8%硫化鋇脫毛，脫毛區(qū)皮膚以消毒針頭劃成小“#”形，至滲血為度，作為破損皮膚組，另一組為完整皮膚組，兩組都設(shè)賦形劑對照組。

1.3.2給藥方法兩組動物都在右側(cè)脫毛區(qū)涂以速康解毒口服溶液約5 mL，左側(cè)涂賦形劑約5 mL作對照。給藥后局部覆蓋紗布和保鮮薄膜，并以膠布固定，保持藥物與皮膚接觸4 h后去除紗布和保鮮薄膜，然后以溫水洗去殘留藥物。每天給藥1次，連續(xù)5 d。完整皮膚組以同樣方法給藥。每次去除藥物后1 h及再次給藥前觀察皮膚狀態(tài)。末次給藥及去除藥物后1、24、48和72 h再次觀察并記錄涂抹部位有無紅斑和水腫及恢復(fù)情況，其評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見表1、表2［9-12］。

表1　皮膚刺激反應(yīng)程度評分標(biāo)準(zhǔn)

表2　皮膚刺激強(qiáng)度評價(jià)

1.4家兔皮膚過敏實(shí)驗(yàn)

1.4.1動物分組及實(shí)驗(yàn)前處理取健康白色家兔15只，實(shí)驗(yàn)前飼養(yǎng)5 d并觀察飲食和行為，若正常則按性別、體重隨機(jī)分為3組，每組5只，并對每組實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行編號（標(biāo)記為1號、2號、3號、4號、5號），實(shí)驗(yàn)前24 h將家兔背部脊柱右側(cè)被毛剪去，然后用8%的硫化鈉水溶液脫毛，脫毛區(qū)面積約50 cm2，備用。

1.4.2致敏接觸脫毛次日，第1組涂以速康解毒口服溶液，5 mL/只；第2組在脫毛區(qū)涂以1%2，4－二硝基氯苯，2 mL/只；第3組在脫毛區(qū)涂上賦形劑（生理鹽水），5 mL/只；然后均以紗布和保鮮膜包敷，再用膠布固定，持續(xù)6 h后去除紗布和保鮮膜，用溫水擦試除去藥物。第7天和第14天各組分別用同樣方法重復(fù)給藥1次。

1.4.3激發(fā)接觸第14天（末次致敏后）在各只家兔左側(cè)背部脫毛約50 cm2，24 h后，第1、2、3組動物左側(cè)脫毛區(qū)分別涂以速康解毒口服溶液5 mL、0.1%2，4－二硝基氯苯2 mL和賦形劑5 mL，然后用紗布和保鮮膜覆蓋，并用醫(yī)藥膠布固定。6 h后去掉保鮮膜和紗布，再用溫水洗去藥物，即刻觀察，并于24、48、72 h再次觀察皮膚過敏反應(yīng)情況，同時(shí)觀察動物有無瘙癢、站立不穩(wěn)等全身性過敏反應(yīng)［13-15］，按照皮膚過敏反應(yīng)程度評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（見表3、表4）評價(jià)各組動物皮膚過敏反應(yīng)分值，并按照以下公式計(jì)算致敏反應(yīng)發(fā)生率及反應(yīng)平均值［10］。

致敏反應(yīng)發(fā)生率（%）＝出現(xiàn)紅斑和水腫的動物例數(shù)／受試動物總數(shù)×100%

反應(yīng)平均值=（紅斑形成總分＋水腫形成總分）／動物總數(shù)

表3　皮膚過敏反應(yīng)程度評分標(biāo)準(zhǔn)

表4　皮膚致敏性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

2　結(jié)果與分析

2.1家兔皮膚刺激實(shí)驗(yàn)

通過實(shí)驗(yàn)給藥和觀察得知，完整皮膚組在每次去除藥物后1 h和再次給藥前以及末次給藥后1、24、48和72 h，肉眼觀察均無明顯紅斑、水腫等皮膚刺激反應(yīng)癥狀；破損皮膚組給藥后第1天給藥側(cè)和對照側(cè)均可見劃傷部位有輕微紅腫，至第4天完全恢復(fù)正常，其后每次去除藥物后1 h及再次給藥前以及末次給藥后1、24、48和72 h，肉眼觀察均無明顯紅斑、水腫等皮膚刺激性反應(yīng)癥狀（見表5）。

表5　家兔皮膚刺激實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2家兔皮膚過敏實(shí)驗(yàn)

速康解毒口服溶液和賦形劑在第1、7和14天給藥（致敏）后，第14天再次接觸此藥（激發(fā)），即刻觀察過敏情況后，在24、48、72 h再進(jìn)行觀察，結(jié)果陰性對照組家兔均無紅斑或水腫等過敏反應(yīng)，也無哮喘、站立不穩(wěn)等全身性過敏反應(yīng)癥狀，反應(yīng)平均值為0，致敏率為0；給藥組5只家兔只有1只出現(xiàn)輕微過敏反應(yīng)，致敏率20%，屬于無致敏性藥物；陽性致敏組24～72 h內(nèi)有不同程度的紅斑與水腫，反應(yīng)均值2～5，致敏率100%。表明速康解毒口服溶液經(jīng)皮膚給藥無致敏作用，見表6、表7。

表6　各組受試動物致敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=5）

表7　速康解毒口服溶液對家兔皮膚致敏率

3討論

在觀察期內(nèi)，速康解毒口服溶液對家兔完整及破損皮膚均未引起明顯的紅斑或水腫；速康解毒口服溶液組經(jīng)致敏、激發(fā)后無明顯過敏現(xiàn)象發(fā)生，與陽性對照組比較差異顯著，對家兔皮膚無致敏作用。表明速康解毒口服溶液臨床給藥有較好的安全性。

1）家兔皮膚刺激實(shí)驗(yàn)采用的給藥方法是每日給藥，為確保實(shí)驗(yàn)藥物與皮膚的接觸時(shí)間足夠，一次至少接觸4 h以上，不能過長，否則會影響家兔皮膚的透氣性，導(dǎo)致局部皮膚水腫。

2）破損皮膚組的受試動物去毛后，皮膚先用碘伏消毒，然后用無菌針頭劃“#”字，以輕度滲血為度。為了防止家兔撕扯抓撓給藥部位，使藥物不能與給藥部位充分接觸，給藥后要用無刺激性膠布和繃帶等固定，并分籠飼養(yǎng)。

3）家兔購回后置于恒溫、恒濕空調(diào)實(shí)驗(yàn)室分籠喂養(yǎng)，自由進(jìn)食、飲水、適應(yīng)環(huán)境5 d后方可用于實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)期間應(yīng)每日觀察家兔的活動情況。

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Skin Irritation and Allergy of Su Kang Detoxification Oral Liquid

HuangXin，HaoBaocheng，LiangJianping，et al
（KeyLaboratoryofNewAnimal DrugProject，Gansu Province/KeyLaboratoryof VeterinaryPharmaceutics Discovery，Ministry ofAgricultural/Lanzhou Institute ofHusbandryand Pharmaceutical Sciences of CAAS，Lanzhou 730050，China）

Toevaluate clinical application securityofdetoxification therapyfor the animal locoweed poisoning-SuKangdetoxification oral liquid，and provide the experimental basis for clinical application.The rabbits＇damaged skin and healthyskin were locally treated with SuKang detoxification oral liquid，excipient（distilled water），and their symptoms were observed day by day.SuKang detoxification oral liquid，excipient，or 2，4-dinitrochlorobenzene was repeatedlyused tosensitize rabbits＇skin.The rabbits＇reaction was observed on the 14th day.In the process of test observation，the complete skin irritation reaction of SuKang detoxification oral liquid on rabbits was less than zero on average，belongs to non stimulating drugs，there was no obvious stimulation to the broken skin；The incidence rates of allergic reaction of excipient，SuKang detoxification oral liquid，and 2，4-dinitrochlorobenzene were 0，20.0%，and 100.0%，respectively.Skin allergic reaction value of SuKang detoxification oral liquid on rabbit was 0.2.SuKang detoxification oral liquid on rabbit skin has a slight allergic phenomenon，without irritation，which belongs to the clinical drug safety.

Su Kangdetoxification oral liquid；skin irritation；skin allergy；security

S858.291

A

2095-3887（2015）01-0037-04

10.3969/j.issn.2095-3887.2015.01.012

2014-12-20

國家高新技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃（863計(jì)劃）（2011AA10A214）；西藏橫向委托項(xiàng)目“動物瘋草中毒解毒新制劑的中試生產(chǎn)”（2013-2014）

黃鑫（1989-），男，在讀碩士研究生。

梁劍平（1962-），男，博士生導(dǎo)師。