張立恩，劉海林

（1.河南省衛(wèi)輝市畜牧局，河南 新鄉(xiāng) 453100；2.河南省新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 新鄉(xiāng) 453003）

豬場(chǎng)圓環(huán)病毒與副豬嗜血桿菌混合感染的診療

張立恩1，劉海林2

（1.河南省衛(wèi)輝市畜牧局，河南 新鄉(xiāng) 453100；2.河南省新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 新鄉(xiāng) 453003）

豬圓環(huán)病毒病可以導(dǎo)致免疫抑制，使豬的體質(zhì)下降，豬感染圓環(huán)病毒后，一些平時(shí)很難侵入豬體的細(xì)菌便會(huì)乘虛而入，引起豬發(fā)病。最近，一中小型豬場(chǎng)的保育豬發(fā)生了豬圓環(huán)病毒病與副豬嗜血桿菌病混合感染，發(fā)病后，保育豬死亡嚴(yán)重，經(jīng)過半月的治療，目前豬群已經(jīng)穩(wěn)定，現(xiàn)將診療情況報(bào)告如下：

1 流行情況及臨床癥狀

該豬場(chǎng)存欄母豬200頭，最近未引進(jìn)過種豬，也未購(gòu)買過仔豬。半月前，剛轉(zhuǎn)到保育舍的300頭仔豬開始發(fā)病。發(fā)病后使用磺胺藥拌料，未見效果。死亡115頭。病豬主要表現(xiàn)為體溫高達(dá)41～42℃，發(fā)病后采食量明顯下降。精神不好，腹式呼吸，且呼吸急促，個(gè)別豬拉稀，消瘦，皮膚黃染。倒提仔豬，發(fā)現(xiàn)腹股溝淋巴結(jié)腫大明顯。經(jīng)調(diào)查得知，該場(chǎng)保育豬已經(jīng)防疫過豬瘟疫苗、偽狂犬病病毒基因缺失疫苗和藍(lán)耳病經(jīng)典毒株疫苗，未防疫過高致病性藍(lán)耳病疫苗和圓環(huán)病毒疫苗。

2 剖檢病理變化

病死豬剖檢后喉頭和會(huì)厭軟骨呈現(xiàn)明顯的黃染。心包積液，心冠脂肪黃染。肺臟與胸腔粘連，肺臟表面有一層黃白色的纖維素樣物質(zhì)。脾臟和肝臟表面也有纖維素樣物質(zhì)附著。腎臟土黃色，表面有數(shù)量不等的圓形白色梗死灶。腸道充血、出血，腸粘膜脫落，回盲口未見潰瘍。腹股溝淋巴結(jié)腫大為正常淋巴結(jié)的4～5倍，顏色蒼白。

圖1 圓環(huán)病毒電泳結(jié)果

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 PCR檢測(cè)

無菌操作采集病死豬的淋巴結(jié)、肺臟等組織進(jìn)行核酸提取，然后將核酸提取物加入到反應(yīng)體系中，放PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳，然后放凝膠成像系統(tǒng)中觀察是否有目的條帶出現(xiàn)。圓環(huán)病毒PCR試劑盒購(gòu)自北京世紀(jì)元亨公司。

3.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)及生化鑒定

3.2.1 采集肺臟，無菌操作取深層肺組織涂布TSA平板。置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h后觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)。挑取大小約為0.5～1mm左右的灰白色或半透明的疑似菌落進(jìn)行革蘭氏染色并鏡檢。挑取革蘭氏陰性、細(xì)絲狀或桿狀的菌落接種于新的TSA培養(yǎng)基進(jìn)行純化培養(yǎng)，直到菌落形態(tài)、大小、色澤一致為止。

3.2.2 在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上均勻涂布所分離的菌株，并做2條平行線狀接種金黃色葡萄球菌，37℃條件下培養(yǎng)24～48h，看是否有“衛(wèi)星現(xiàn)象”出現(xiàn)，同時(shí)觀察是否有溶血的現(xiàn)象。

3.2.3 取在副豬嗜血桿菌培養(yǎng)基上48h后的疑似菌落，分別接種生化鑒定管，生化鑒定管中同時(shí)加入5μL 0.01%的NAD，置于37℃5%的CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24～48h，觀察生化反應(yīng)的結(jié)果。

4 結(jié)果

4.1 如圖，1號(hào)為被檢樣品，2號(hào)為陰性對(duì)照，3號(hào)PCV-Ⅱ陽(yáng)性對(duì)照，4號(hào)為PCV-Ⅰ陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果顯示被檢樣品與PCV-Ⅱ陽(yáng)性對(duì)照處于同一水平位置，被檢樣品為PCV-Ⅱ陽(yáng)性，詳見圖1。

4.2 在含NAD的TSA平板、鮮血瓊脂平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。在含NAD的TSA固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h后的疑似菌落呈現(xiàn)針尖狀的圓形、灰白色半透明大小為0.5～1mm。

4.3 挑取可疑菌落在鮮血瓊脂平板上出現(xiàn)明顯的“衛(wèi)星現(xiàn)象”。即在有葡萄球菌菌苔的附近待測(cè)菌落生長(zhǎng)較大，而遠(yuǎn)側(cè)沒有菌落生長(zhǎng)。且無溶血現(xiàn)象

4.4 將HPS菌株接種于微量生化鑒定管后，結(jié)果顯示吲哚試驗(yàn)陰性，接觸酶試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)陽(yáng)性，并可以發(fā)酵麥芽糖、葡萄糖、鹿糖、果糖等碳水化合物。

5 防治

5.1 首先封場(chǎng)，禁止車輛和人員隨意出入，并對(duì)發(fā)病豬與健康豬群進(jìn)行隔離，發(fā)病豬與健康豬由不同的飼養(yǎng)人員進(jìn)行飼養(yǎng)，避免人員流動(dòng)造成感染。對(duì)豬場(chǎng)所有圈舍和用具等進(jìn)行嚴(yán)格的消毒。

5.2 對(duì)發(fā)病豬進(jìn)行治療，聯(lián)合使用板藍(lán)根注射液和氟苯尼考注射液，頸部肌肉注射，兩側(cè)各一針，連用3～5d。

5.3 對(duì)豬場(chǎng)15日齡以上健康豬群，進(jìn)行豬圓環(huán)病毒滅活疫苗的緊急免疫接種，同時(shí)，健康豬群使用氟苯尼考拌料，預(yù)防副豬嗜血桿菌的傳播和感染。

6 結(jié)果和討論

6.1 豬場(chǎng)按照上述措施進(jìn)行了科學(xué)的防控，半月后進(jìn)行回訪，了解到目前該豬場(chǎng)疫情已經(jīng)停止發(fā)展，豬群正處在康復(fù)階段。

6.2 經(jīng)走訪調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)最近兩年我市中小型豬場(chǎng)圓環(huán)病毒發(fā)病率非常高，今后一段時(shí)間豬場(chǎng)應(yīng)當(dāng)加大對(duì)于圓環(huán)病毒的免疫和監(jiān)測(cè)力度，科學(xué)的評(píng)估該病在豬場(chǎng)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，積極采取預(yù)防措施，降低因圓環(huán)病毒而引起的損失。

6.3 圓環(huán)病毒病是一種免疫抑制性疾病，豬感染圓環(huán)病毒后體質(zhì)下降，導(dǎo)致其他一些細(xì)菌和病毒也會(huì)乘虛而入，因此，豬感染圓環(huán)病毒后還要注意控制細(xì)菌的繼發(fā)感染。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．10.047