何永果，李果，李德生，李才武*

（中國(guó)保護(hù)大熊貓研究中心，四川 雅安 625000）

兩種抗凝劑對(duì)大熊貓血液生理指標(biāo)的影響

何永果，李果，李德生，李才武*

（中國(guó)保護(hù)大熊貓研究中心，四川 雅安 625000）

目的：比較分析兩種抗凝劑對(duì)大熊貓血液生理指標(biāo)的影響。方法：將60只成年大熊貓，分別用EDTA.K2和肝素鈉抗凝采血后，用麥道尼克（MEDONIC）CA620全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（瑞典原裝進(jìn)口）測(cè)定血液生理指標(biāo)。結(jié)果：使用不同的抗凝劑，同一樣本的血液生理指標(biāo)中：血小板數(shù)目（PLT）、平均血小板體積（MPV）、血小板壓積（PCT）、大血小板數(shù)（LPCR）、中值細(xì)胞（MID）、中值細(xì)胞百分比（MID%）、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值(LYM)、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值百分比（LYM）%、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）和平均紅細(xì)胞體積（MCV）10個(gè)指標(biāo)差異極顯著（P＜0.01）。結(jié)論：不同抗凝劑對(duì)大熊貓血小板和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)參數(shù)影響極顯著，進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)妥善選擇血液抗凝方式。

大熊貓；抗凝劑；血液生理指標(biāo)

大熊貓（Aluropod a melanoleuca）屬于我國(guó)特有的珍稀瀕危動(dòng)物，也是我國(guó)的國(guó)寶，具有極高的研究?jī)r(jià)值和觀賞價(jià)值。如何更好的保護(hù)好大熊貓，對(duì)大熊貓的健康狀況進(jìn)行監(jiān)測(cè)與評(píng)估，判斷大熊貓血液正常生理指標(biāo)，對(duì)大熊貓的健康監(jiān)測(cè)、疾病診斷和治療均具有重要意義。臨床檢驗(yàn)工作當(dāng)中一份標(biāo)本結(jié)果準(zhǔn)確性如何，與抗凝劑的選擇等有很大關(guān)系。國(guó)外對(duì)肝素和EDTA.K2在血液生化指標(biāo)，血常規(guī)及其他生物學(xué)特性的不同效應(yīng)都做了不少研究，但是對(duì)大熊貓血液生理的效應(yīng)研究目前國(guó)內(nèi)外還未見報(bào)道。

為了觀察抗凝劑的選擇對(duì)大熊貓血液生理指標(biāo)有何影響，我們將60份大熊貓血液樣本分別用肝素和EDTA.K2抗凝劑抗凝，用麥道尼克（MEDONIC）CA620全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（瑞典原裝進(jìn)口）測(cè)定，將其檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 研究方法

1.1 材料

大熊貓血液，一次性真空EDTA.K2、肝素抗凝采血管及注射器（江蘇康健醫(yī)療用品有限公司）。

1.2 主要儀器

麥道尼克（MEDONIC）CA620全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（瑞典原裝進(jìn)口）。試劑由儀器廠家提供原裝試劑，儀器質(zhì)控值均在靶值范圍內(nèi)。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

圈養(yǎng)成年大熊貓60只，所屬國(guó)家級(jí)臥龍自然保護(hù)區(qū)管理局，中國(guó)保護(hù)大熊貓研究中心。

1.4 方法

試驗(yàn)采集60只大熊貓取得60份大熊貓血液樣品，每份血液樣品分裝于一次性真空EDTA.K2抗凝采血管和肝素抗凝采血管各2mL，檢測(cè)以WBC、RBC、PLT、Hb為主的20項(xiàng)血液生理指標(biāo)，血液樣本保存在低于20℃的環(huán)境溫度下。

1.5 數(shù)據(jù)分析

將獲得的四組試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SSPS13.0軟件執(zhí)行統(tǒng)計(jì)分析，組間差異比較采用配對(duì)樣本T檢驗(yàn)，所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（Mean±SE）表示。

2 結(jié)果

2.1 大熊貓20項(xiàng)血液生理指標(biāo)中，血小板數(shù)目（PLT）、平均血小板體積（MPV）、血小板壓積（PCT）、大血小板數(shù)（LPCR）、中值細(xì)胞（MID）、中值細(xì)胞百分比（MID%）、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值（LYM）、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值百分比（LYM）%、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）、平均紅細(xì)胞體積(MCV)10項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果差異極顯著（P＜0.01），其它10項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。詳見表1。

表1 大熊貓血液用EDTA.K2、肝素抗凝檢測(cè)結(jié)果比較

3 討論

3.1 動(dòng)物血液生理指標(biāo)的重要性

動(dòng)物血液生理指標(biāo)是生物醫(yī)學(xué)研究中重要的指標(biāo)，是判斷健康動(dòng)物狀態(tài)和選擇合格動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)，是病理學(xué)、毒理學(xué)等研究的重要參考依據(jù)。動(dòng)物血液生理參數(shù)主要受動(dòng)物自身的遺傳因素和環(huán)境因素決定與控制。往往遺傳因素是決定動(dòng)物血液生理參數(shù)的內(nèi)在物質(zhì)基礎(chǔ)，環(huán)境因素是決定血液生理參數(shù)的外在條件。其中遺傳因素決定的大小，常常用遺傳度表示。某種動(dòng)物的血液生理生化參數(shù)都有特定的波動(dòng)范圍，這種范圍構(gòu)成了每種動(dòng)物特有的生物學(xué)特性參數(shù)。

3.2 兩種抗凝劑對(duì)血液生理指標(biāo)的影響

分別用EDTA.K2和肝素抗凝的血液生理指標(biāo)，兩種抗凝劑對(duì)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響無(wú)差異，對(duì)平均紅細(xì)胞體積MCV和和平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度MCHC的影響差異顯著；對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)影響，但對(duì)白細(xì)胞分類的影響差異顯著；白細(xì)胞分類中，除了中性粒細(xì)胞外，對(duì)中值細(xì)胞（嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞）、淋巴細(xì)胞影響差異顯著。所以如果檢測(cè)項(xiàng)目中主要考察的目標(biāo)是白細(xì)胞分類的相關(guān)指標(biāo)，或者血小板相關(guān)參數(shù)，那么結(jié)果分析的時(shí)候一定要考慮到抗凝劑對(duì)相關(guān)指標(biāo)的影響。平時(shí)臨床上應(yīng)選用同一種抗凝劑，盡可能減少抗凝劑不同對(duì)血液生理指標(biāo)的影響。血液生理指標(biāo)在不同抗凝劑之間存在一定的差異，在一定程度上說(shuō)明血液生理值除了受遺傳基因控制外，抗凝劑的種類對(duì)血液生理指標(biāo)的影響巨大。

3.3 血常規(guī)檢測(cè)優(yōu)選EDTA.K2抗凝劑

麥道尼克（MEDONIC）CA620全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀是以電阻抗法為原理對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)細(xì)胞相對(duì)非導(dǎo)電性質(zhì)，懸浮在電解質(zhì)溶液中的細(xì)胞顆粒在通過(guò)計(jì)數(shù)小孔時(shí)可引起電阻的變化為基礎(chǔ)，對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行測(cè)定。肝素是一種含硫酸基團(tuán)的粘多糖，分子量為15000，帶有較多的負(fù)電荷，具有多方面抗凝作用，主要是對(duì)抗凝血酶及凝血酶的形成和活性，阻止血小板聚集，容易引起白細(xì)胞聚集。EDTA.K2抗凝劑對(duì)血細(xì)胞和血小板形態(tài)影響很小。

根據(jù)本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果，參考其他實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，大熊貓血液做血常規(guī)檢測(cè)采用EDTA.K2抗凝劑比較穩(wěn)定可靠。

（致謝：中國(guó)保護(hù)大熊貓研究中心動(dòng)管部同事在項(xiàng)目中提供的幫助。）

[1]張志和，等.2006.大熊貓遷地保護(hù)：理論與實(shí)踐[M].北京：科學(xué)出版社.460-461.

[2]楊曉丹，等.2010.常規(guī)標(biāo)本采集過(guò)程對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥.010.（7）：66.

[3]M.Mohri,et al.Effects of heparin，citrate，and EDTA on plasma biochemistry of sheep：Comparison with serum[J].Research in Veterinary Science，Volume 86,Issue 1，F(xiàn)ebruary 2009，Pages 111-114.

[4]José J.Cerón，et al.The effects of different anticoagulants on routine canine plasma biochemistry[J].The Veterinary Journal，Volume 167，Issue 3，May 2004，Pages 294-301.

[4]Michael Walther,et al.Bioactive TGF-β levels can be preserved in plasma samples collected into heparin but not EDTA.Cytokine,Volume 48,Issue 3,December 2009，Pages 267-272.

[5]J.C.Duvigneau,et al.Heparin and EDTA as anticoagulant differentially affect cytokine mRNA level of cultured porcine blood cells[J].Journal of Immunological Methods，Volume 324，Issues 1-2,31 July 2007,Pages 38-47.

[6]Giuseppe Lippi,et al.Measurement of Elecsys NT-proBNP in serum，K2 EDTA and heparin plasma[J].Clinical Biochemistry，Volume 40，Issues 9-10，June 2007，Pages 747-748.

[7]王洪，等.雌雄金黃地鼠血液生理生化指標(biāo)的比較分析[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2008，18（2）：35-42.

[8]趙毓梅，等.SD大鼠血常規(guī)、血液生化指標(biāo)、臟體比正常參考值范圍研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2002，12（2）：165-16.

[9]文興東.EDTA-K2抗凝劑引起血小板減少的結(jié)果探討[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué).2012，18（10）：51-52.

[10]韓志芳.抗凝劑在試驗(yàn)中的合理選擇和應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐.2002，15（4）：378-379.

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．10.007

何永果（1981～），工程師，從事大熊貓研究工作

李才武，工程師，獸醫(yī)碩士，主要從事大熊貓獸醫(yī)工作