張炳麗 宋曉琳 懷清杰 唐道洲 梁 爽 王 宇 杜溪喬

哈爾濱市疾病預(yù)防控制中心，黑龍江哈爾濱 150056

2012年哈爾濱市手足口病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果分析

張炳麗 宋曉琳 懷清杰 唐道洲 梁 爽 王 宇 杜溪喬

哈爾濱市疾病預(yù)防控制中心，黑龍江哈爾濱 150056

目的 了解哈爾濱市2012年手足口病病原特點(diǎn)。 方法 采用Real time RT-PCR 對(duì)2012年采集的糞便、咽拭子、肛拭子等標(biāo)本檢測(cè)腸道病毒、CoxA16、EV71。 結(jié)果 共檢測(cè)手足口標(biāo)本1046份，腸道病毒陽(yáng)性676份（64.6%)，EV71陽(yáng)性83份（7.9%），CoxA16陽(yáng)性489份（46.7%），其他腸道病毒104份(15.3%)；陽(yáng)性標(biāo)本中，男性陽(yáng)性382份（56.5%），女性陽(yáng)性294份（43.5%）；全年6 ～ 7月份為高峰，腸道病毒感染主要集中于5歲以下兒童，占陽(yáng)性標(biāo)本的89.9%。 結(jié)論 5歲以下兒童是手足口病感染的主要人群，2012年哈爾濱市手足口主要流行株為CoxA16，而EV71和其他HEV也同時(shí)存在。

手足口??； 腸道病毒；CoxA16； EV71

手足口病是由多種腸道病毒引起的常見(jiàn)腸道傳染病，引起手足口病的腸道病毒有20多種（型），其中以腸道病毒71型（簡(jiǎn)稱(chēng)EV71）和柯薩奇A組16型（簡(jiǎn)稱(chēng)CA16）最為常見(jiàn)[1-2]。該病傳染性強(qiáng)，傳播途徑復(fù)雜，短時(shí)間內(nèi)已造成大流行，重癥患兒病情進(jìn)展快，病死率高，易引起社會(huì)恐慌[3]。本研究對(duì)2012年哈爾濱市各醫(yī)院診斷疑似手足口病例采集的1046份手足口病標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)將檢測(cè)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

所有病例均按照《手足口病預(yù)防控制指南（2009版）》[4]中診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行采樣，標(biāo)本主要來(lái)自哈爾濱市兒童醫(yī)院和哈爾濱市傳染病醫(yī)院及各區(qū)縣疾病預(yù)防控制中心送檢的疑似手足口病例的咽拭子、肛拭子、糞便等標(biāo)本。采集的1046份標(biāo)本均按指南要求采集運(yùn)輸及保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

1.2.1 檢測(cè)方法 采用Real time RT-PCR對(duì)采集的標(biāo)本進(jìn)行腸道病毒核酸檢測(cè)。咽拭子肛拭子標(biāo)本充分振蕩，糞便標(biāo)本加入PBS和氯仿劇烈震蕩混勻，然后各標(biāo)本3000rpm離心20min，吸取上清液待檢，病毒RNA的提取用德國(guó)QIAGEN公司生產(chǎn)的Rneasy Mini Kit試劑盒，提取RNA 50μL。用江蘇碩世生物科技有限公司生產(chǎn)的柯薩奇病毒A16型和腸道病毒71型+腸道病毒通用型核酸檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.2.2 儀器設(shè)備 ABI7500實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增儀（美國(guó)ABI公司）；QIAcube核酸蛋白純化儀（德國(guó)QIAGEN公司）。

2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果果分析

2012年1～12月共采集臨床診斷標(biāo)本1046份，腸道病毒陽(yáng)性標(biāo)本676份（64.6%）。其中EV71陽(yáng)性83份（8.9%），CA16陽(yáng)性489份（46.7%），其他HEV陽(yáng)性104份（9.9%）。

2.2 手足口陽(yáng)性標(biāo)本分布

2.2.1 年齡分布 在2012年采集標(biāo)本中，年齡在幾個(gè)月和44歲之間。676份腸道病毒陽(yáng)性標(biāo)本中，5歲以下的兒童共607份陽(yáng)性占89.7%，EV71型陽(yáng)性75份占EV71型陽(yáng)性90.3%，CA16型陽(yáng)性433份占CA16型陽(yáng)性88.5%。見(jiàn)表1。

2.2.2 季節(jié)分布 2012年全年對(duì)手足口病進(jìn)行監(jiān)測(cè)，5月份開(kāi)始上升，6～7月份為高峰，8月份開(kāi)始下降，6～7月占全年陽(yáng)性63.5%，10月份以后只有5份陽(yáng)性，均為CA16。見(jiàn)表2 。

2.3 性別分布

在2012年檢測(cè)的1046份病例中，男性病例數(shù)592例（56.6%），女性病例數(shù)454例（43.4%）。其中腸道病毒陽(yáng)性標(biāo)本男性382份（56.5%），女性294份（43.5%），腸道病毒陽(yáng)性標(biāo)本病例數(shù)男性與女性比例為1.3∶1。

表1 哈爾濱市2012年不同年齡手足口檢出情況

表2 哈爾濱市2012年不同月份手足口檢出情況

3 討論

手足口病是全球性傳染病，自2008年安徽阜陽(yáng)手足口病爆發(fā)以來(lái)，我國(guó)大陸地區(qū)手足口病大范圍流行，部分地區(qū)大規(guī)模爆發(fā)，且發(fā)病率和病死率逐年呈上升的趨勢(shì)，EV71感染易導(dǎo)致嚴(yán)重和死亡病例，造成巨大的社會(huì)負(fù)擔(dān)，手足口病已成為政府和社會(huì)高度關(guān)注的公共衛(wèi)生問(wèn)題。

近年來(lái)，哈爾濱市手足口防控形勢(shì)十分嚴(yán)峻，本文對(duì)2012年采集的1046標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果顯示；EV71陽(yáng)性率為7.9%，CA16陽(yáng)性率為46.7%，其它HEV陽(yáng)性率為9.9%，2012年哈爾濱市手足口優(yōu)勢(shì)流行株為CA16，而EV71和其他HEV也同時(shí)存在。

從季節(jié)分布來(lái)看，哈爾濱市手足口病呈明顯的的季節(jié)流行，5月份開(kāi)始上升，6～7月份為高峰，8月份開(kāi)始下降，全年呈單峰流行，而我國(guó)南方城市多以4～7月流行高峰及11～12月次高峰流行的雙峰流行模式不同[5-6]。這種流行模式的差異可能由于不同的地域氣候條件所導(dǎo)致。所以做好春夏季手足口病的防控工作，對(duì)于降低該病發(fā)病率具有重要意義。從性別分布來(lái)看男性陽(yáng)性病例明顯多于女性[7-9]可能與男孩更好動(dòng)，喜歡到戶(hù)外活動(dòng)，與外界接觸頻繁，導(dǎo)致感染機(jī)會(huì)較多。從年齡分布來(lái)看，5歲以下兒童為高危人群[10-11]，2～4歲為手足口多發(fā)人群，主要是由于這些人群中和抗體陽(yáng)性率低[12]，對(duì)腸道病毒感染抵抗力低，且衛(wèi)生意識(shí)相對(duì)較差，托幼機(jī)構(gòu)人員密集，發(fā)生交叉感染機(jī)會(huì)多有關(guān)。因此應(yīng)加強(qiáng)對(duì)5歲以下兒童手足口病病原的監(jiān)測(cè)。

本次研究初步掌握了哈爾濱市手足口病的病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷、人群分布、流行季節(jié)等特點(diǎn)，但未對(duì)104份其他腸道病毒進(jìn)行分型研究，今后要對(duì)其進(jìn)一步的檢測(cè)和測(cè)序分析，掌握手足口病的病原譜，了解手足口病相關(guān)病毒的變異及進(jìn)化狀態(tài)，為哈爾濱市的手足口防控措施的制定和調(diào)整提供科學(xué)依據(jù)。

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Clinical laboratory testing of hand foot mouth disease in 2012,harbin city

ZHANG Bingli SONG Xiaolin HUAI Qingjie TANG Daozhou LIANG Shuang WANG Yu DU Xiqiao
Harbin Center for Disease Control and Prevention , Harbin 150056,China

Objective To learn the pathogenic characters of hand-foot- mouth disease(HFMD) in harbin，2012。Methods Stool throal swab and rectal swab samples from patients diagnosed as HFMD were collected to detect pan-enterovirus ，CoxA16 and EV71 by using Real time RT-PCR. Results A total 1046 samples were collected to detect，676 pan-enterovirus positive samples were detected during 2012.Among them，83（7.9%）were EV71，489(46.7%）were CoxA16，and 104 were the other enterovirus.The positive rate of male was 56.5%，The positive rate of female was 43.5%.Enterovirus infection peaked in June to July.A peak age distribution of enterovirus infection was below five year-old(89.9%）. Conclusion The people who is below five year-old is a peak age distribution of enterovirus infection. CoxA16 is the main pathogen of HFMD in harbin in 2012，EV71 and the other enterovirus are existed at the same time.

HFMD; Enterovirus; CoxA16;EV71

R725.1

B

2095-0616（2015）07-208-03

2014-12-19）