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      結(jié)核桿菌特異性抗原對(duì)結(jié)核病診斷價(jià)值研究

      2015-12-09 08:02:12孫麗娜孫京濤田永全
      中外醫(yī)療 2015年14期
      關(guān)鍵詞:符合率結(jié)核結(jié)核病

      孫麗娜,孫京濤,田永全

      1.廊坊市疾病預(yù)防控制中心,河北廊坊 065000;2.廊坊市人民醫(yī)院,河北廊坊 065000;3.廊坊市食品工程學(xué)校,河北廊坊 065000

      結(jié)核?。═uberculosis,TB)是一種結(jié)核分枝桿菌為病原菌的慢性傳染性疾病。TB 多見(jiàn)于青年人,可人際間接觸、體液、血液傳播,嚴(yán)重威脅人類生命健康,據(jù)WHO 統(tǒng)計(jì)年報(bào)表明全球每年約有20 億人感染結(jié)核分枝桿菌 (M.tuberculosis,MTB),TB年發(fā)病1000 萬(wàn)人、死亡300 萬(wàn)人[1-3]。目前,已有關(guān)于MTB 抗原血清學(xué)技術(shù)診斷TB 方法,具有操作簡(jiǎn)單、快捷、所需器材少等優(yōu)點(diǎn),在結(jié)核病快速篩查、診斷中具有無(wú)可比擬的技術(shù)優(yōu)勢(shì),應(yīng)用前景較好。該研究在2013年2月—2014年5月采用ELISA,評(píng)價(jià)結(jié)核桿菌特異性抗原單一、聯(lián)合診斷結(jié)核病效用,現(xiàn)報(bào)道如下。

      1 資料與方法

      1.1 一般資料

      以2013年2月—2014年5月,該地疾病預(yù)防控制中心結(jié)核病防治所提供實(shí)驗(yàn)用血清、陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品血清、陰性標(biāo)準(zhǔn)品血清。陽(yáng)性血清人群100例,其中男61例、女39例,年齡22~71 歲、平均(44.4±6.8)歲,以不同程度低熱、消瘦、乏力為癥狀表現(xiàn),咳血61例,肺結(jié)核91例、支氣管結(jié)核9例。陰性對(duì)照組血清均取自100例健康體檢者,其中男60例、女40例,年齡22~70 歲、平均(46.8±10.5)歲??贵w檢測(cè)采用美MP 公司產(chǎn)IgG 檢測(cè)試劑盒檢測(cè)。

      1.2 方法

      1.2.1 實(shí)驗(yàn) 確定最佳ELISA 條件:①采用棋盤滴定法,確定最佳抗原包被濃度和血清稀釋度[4];②分別用以上計(jì)算所得的最佳抗 原濃度包被ELISA 板,確定CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B、HspX 四種結(jié)核分枝桿菌特異性抗原二抗稀釋度;③以①-②確定的各類結(jié)核分枝桿菌特異性抗原最佳ELISA 條件,檢測(cè)100 份陽(yáng)性血清、100 份陰性血清。

      1.2.2 檢測(cè)性能評(píng)估 整理各抗原檢測(cè)結(jié)果,整理抗原組合列表,預(yù)測(cè)聯(lián)合診斷性能,選擇最佳抗原混合,比較各組合診斷效率,并進(jìn)行重復(fù)性、精密度實(shí)驗(yàn),評(píng)價(jià)方法穩(wěn)定性。

      1.3 統(tǒng)計(jì)方法

      以SPSS18.0 軟件包處理所獲數(shù)據(jù)資料,以n(%)表示計(jì)數(shù)資料,組間比較采用χ2檢驗(yàn),P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,計(jì)算各抗原組合診斷Cut-off 值。

      2 結(jié)果

      2.1 單一蛋白診斷

      單一蛋白診斷,38kDa 靈敏度最高,其次為CFP10-ESAT6,再次為HsPX,最次為Ag85B,38kDa 靈敏度高于Ag85B,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.86,P<0.05);Ag85B 特異度最高,其次為CFP10-ESAT6,再次為HspX,最次為38kDa,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.31,P>0.05);38kDa、HspX 符合率最高,其次為CFP10-ESAT6,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.02,P>0.05),見(jiàn)表1。

      表3 38kDa+CE+HspX 實(shí)際診斷[n(%)]

      表1 四種蛋白單一診斷效用對(duì)比[n(%)]

      2.2 聯(lián)合蛋白診斷預(yù)測(cè)

      篩選Youden 指 數(shù)>0.5 組合主要包括:38KDa+CE、38kDa+HspX、38kDa+CE+HspX,靈敏度(χ2=1.52)、特異度(χ2=1.52)、符合率(χ2=0.76)均在72%以上,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表2。

      表2 三種聯(lián)合蛋白診斷效率較好蛋白組合[n(%)]

      2.3 ELISA 檢驗(yàn)與重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

      38kDa+CE+HspX 聯(lián)合檢查Youden 指數(shù)最高為0.445,擬作為診斷組合。

      2.4 實(shí)際診斷

      以38kDa+CE+HspX 組合診斷2014年1月—2014年10月,收治的疑似肺結(jié)核患者,結(jié)果顯示任意蛋白DTH 陽(yáng)性診斷肺結(jié)核敏感度達(dá)80.39%,特異度18.99%,可滿足需要,見(jiàn)表3。

      3 討論

      目前,TB 診斷主要方法包括痰涂片抗酸染色法、 痰結(jié)核菌培養(yǎng)法,但前者假陰性與假陽(yáng)性率高,后者耗時(shí)長(zhǎng)、操作相對(duì)繁瑣,不利于大規(guī)模推廣應(yīng)用,兩者均不適用于TB 潛伏期患者篩查、診斷[5]。

      CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B、HspX 是目前發(fā)現(xiàn)時(shí)間較早、研究時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)、提取較方便的四種結(jié)核桿菌特異性抗原,部分已被應(yīng)用于臨床診斷[6]。研究結(jié)果顯示,四種蛋白單一或聯(lián)合均可應(yīng)用于TB 診斷,靈敏度略高于痰涂片,不同抗原靈敏度、特異度、符合率存在一定差異,38kDa 靈敏度、符合率均居首位。值得注意的是,三類組合中均有38KDa,這與38kDa 靈敏度、符合率均居首位有關(guān)。ELISA 檢驗(yàn)與重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,三種組合診斷效用不受混合方式影響,且穩(wěn)定性較好,其中38kDa+CE+HspX 聯(lián)合檢查Youden 指數(shù)最高為0.445,可作為聯(lián)合診斷組合。實(shí)測(cè)結(jié)果顯示,以任意蛋白DTH 陽(yáng)性作為診斷標(biāo)準(zhǔn),診斷TB敏感度達(dá)80.39%、特異度81.01%、符合率80.077%,高于痰涂片、PPD 皮試、X 線診斷。此外還應(yīng)注意的是,聯(lián)合診斷與X 線片結(jié)合空洞影一致性較好,敏感度達(dá)到97.06%,有助于提高X 線應(yīng)用水平,與Davidow 研究發(fā)現(xiàn)一致[7]。

      結(jié)核桿菌特異性抗原診斷結(jié)核病是當(dāng)前研究熱點(diǎn),如Deng[8]等以38ku+16ku+LAM 共同檢測(cè)MTB,敏感度高達(dá)96.1%,但尚無(wú)診斷TB 結(jié)果。目前,許多學(xué)者致力于構(gòu)建融合蛋白,進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè),彌補(bǔ)單一蛋白無(wú)法檢測(cè)所有抗體的弊端,也是今后該領(lǐng)域研究的重要發(fā)展方向。

      [1]王蕓.云南省2000、2010年結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查分析[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇,2014,20(1):11-19.

      [2]馬均.結(jié)核病[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2006.

      [3]全國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查技術(shù)指導(dǎo)組.第四次全國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查報(bào)告[J].中華結(jié)核和呼吸雜志,2002,25(1):3-7.

      [4]中國(guó)防癆協(xié)會(huì)基礎(chǔ)專業(yè)委員會(huì).結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程[M].北京:中國(guó)教育文化出版社,2006.

      [5]王橋霞.結(jié)核桿菌特異性抗原對(duì)結(jié)核病診斷價(jià)值研究[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué),2009,9(11):2085-2087.

      [6]聶恒.結(jié)核分枝桿菌特異性蛋白抗原研究進(jìn)展及其應(yīng)用策略探討[J].中國(guó)病原生物學(xué)雜志,2014,9(2):180-181.

      [7]孫艷.肺結(jié)核患者涂陽(yáng)率及其影響因素的研究[J].臨床肺科雜志,2012,17(9):1619-1621.

      [8]Deng S,Yuan Y,Xia J,et al.Clinical utility of combination of lipoarb inomannan,38-kDa antigens as a diagonsis tool for tuberculosis[J].Diagn Microbiol Infect Dis,2011,71(1):46-50.

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