結(jié)核桿菌特異性抗原對(duì)結(jié)核病診斷價(jià)值研究

孫麗娜，孫京濤，田永全

1.廊坊市疾病預(yù)防控制中心，河北廊坊 065000；2.廊坊市人民醫(yī)院，河北廊坊 065000；3.廊坊市食品工程學(xué)校，河北廊坊 065000

結(jié)核?。═uberculosis，TB）是一種結(jié)核分枝桿菌為病原菌的慢性傳染性疾病。TB 多見(jiàn)于青年人，可人際間接觸、體液、血液傳播，嚴(yán)重威脅人類生命健康，據(jù)WHO 統(tǒng)計(jì)年報(bào)表明全球每年約有20 億人感染結(jié)核分枝桿菌 （M.tuberculosis，MTB），TB年發(fā)病1000 萬(wàn)人、死亡300 萬(wàn)人[1-3]。目前，已有關(guān)于MTB 抗原血清學(xué)技術(shù)診斷TB 方法，具有操作簡(jiǎn)單、快捷、所需器材少等優(yōu)點(diǎn)，在結(jié)核病快速篩查、診斷中具有無(wú)可比擬的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，應(yīng)用前景較好。該研究在2013年2月—2014年5月采用ELISA，評(píng)價(jià)結(jié)核桿菌特異性抗原單一、聯(lián)合診斷結(jié)核病效用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2013年2月—2014年5月，該地疾病預(yù)防控制中心結(jié)核病防治所提供實(shí)驗(yàn)用血清、陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品血清、陰性標(biāo)準(zhǔn)品血清。陽(yáng)性血清人群100例，其中男61例、女39例，年齡22～71 歲、平均（44.4±6.8）歲，以不同程度低熱、消瘦、乏力為癥狀表現(xiàn)，咳血61例，肺結(jié)核91例、支氣管結(jié)核9例。陰性對(duì)照組血清均取自100例健康體檢者，其中男60例、女40例，年齡22～70 歲、平均（46.8±10.5）歲?？贵w檢測(cè)采用美MP 公司產(chǎn)IgG 檢測(cè)試劑盒檢測(cè)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn) 確定最佳ELISA 條件：①采用棋盤滴定法，確定最佳抗原包被濃度和血清稀釋度[4]；②分別用以上計(jì)算所得的最佳抗 原濃度包被ELISA 板，確定CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B、HspX 四種結(jié)核分枝桿菌特異性抗原二抗稀釋度；③以①-②確定的各類結(jié)核分枝桿菌特異性抗原最佳ELISA 條件，檢測(cè)100 份陽(yáng)性血清、100 份陰性血清。

1.2.2 檢測(cè)性能評(píng)估 整理各抗原檢測(cè)結(jié)果，整理抗原組合列表，預(yù)測(cè)聯(lián)合診斷性能，選擇最佳抗原混合，比較各組合診斷效率，并進(jìn)行重復(fù)性、精密度實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)方法穩(wěn)定性。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

以SPSS18.0 軟件包處理所獲數(shù)據(jù)資料，以n（%）表示計(jì)數(shù)資料，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，計(jì)算各抗原組合診斷Cut-off 值。

2 結(jié)果

2.1 單一蛋白診斷

單一蛋白診斷，38kDa 靈敏度最高，其次為CFP10-ESAT6，再次為HsPX，最次為Ag85B，38kDa 靈敏度高于Ag85B，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.86，P＜0.05）；Ag85B 特異度最高，其次為CFP10-ESAT6，再次為HspX，最次為38kDa，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.31，P＞0.05）；38kDa、HspX 符合率最高，其次為CFP10-ESAT6，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.02，P＞0.05），見(jiàn)表1。

表3 38kDa＋CE＋HspX 實(shí)際診斷[n(%)]

表1 四種蛋白單一診斷效用對(duì)比[n(%)]

2.2 聯(lián)合蛋白診斷預(yù)測(cè)

篩選Youden 指 數(shù)＞0.5 組合主要包括：38KDa＋CE、38kDa＋HspX、38kDa＋CE＋HspX，靈敏度（χ2=1.52）、特異度（χ2=1.52）、符合率（χ2=0.76）均在72%以上，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 三種聯(lián)合蛋白診斷效率較好蛋白組合[n(%)]

2.3 ELISA 檢驗(yàn)與重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

38kDa＋CE＋HspX 聯(lián)合檢查Youden 指數(shù)最高為0.445，擬作為診斷組合。

2.4 實(shí)際診斷

以38kDa＋CE＋HspX 組合診斷2014年1月—2014年10月，收治的疑似肺結(jié)核患者，結(jié)果顯示任意蛋白DTH 陽(yáng)性診斷肺結(jié)核敏感度達(dá)80.39%，特異度18.99%，可滿足需要，見(jiàn)表3。

3 討論

目前，TB 診斷主要方法包括痰涂片抗酸染色法、 痰結(jié)核菌培養(yǎng)法，但前者假陰性與假陽(yáng)性率高，后者耗時(shí)長(zhǎng)、操作相對(duì)繁瑣，不利于大規(guī)模推廣應(yīng)用，兩者均不適用于TB 潛伏期患者篩查、診斷[5]。

CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B、HspX 是目前發(fā)現(xiàn)時(shí)間較早、研究時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)、提取較方便的四種結(jié)核桿菌特異性抗原，部分已被應(yīng)用于臨床診斷[6]。研究結(jié)果顯示，四種蛋白單一或聯(lián)合均可應(yīng)用于TB 診斷，靈敏度略高于痰涂片，不同抗原靈敏度、特異度、符合率存在一定差異，38kDa 靈敏度、符合率均居首位。值得注意的是，三類組合中均有38KDa，這與38kDa 靈敏度、符合率均居首位有關(guān)。ELISA 檢驗(yàn)與重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，三種組合診斷效用不受混合方式影響，且穩(wěn)定性較好，其中38kDa＋CE＋HspX 聯(lián)合檢查Youden 指數(shù)最高為0.445，可作為聯(lián)合診斷組合。實(shí)測(cè)結(jié)果顯示，以任意蛋白DTH 陽(yáng)性作為診斷標(biāo)準(zhǔn)，診斷TB敏感度達(dá)80.39%、特異度81.01%、符合率80.077%，高于痰涂片、PPD 皮試、X 線診斷。此外還應(yīng)注意的是，聯(lián)合診斷與X 線片結(jié)合空洞影一致性較好，敏感度達(dá)到97.06%，有助于提高X 線應(yīng)用水平，與Davidow 研究發(fā)現(xiàn)一致[7]。

結(jié)核桿菌特異性抗原診斷結(jié)核病是當(dāng)前研究熱點(diǎn)，如Deng[8]等以38ku＋16ku＋LAM 共同檢測(cè)MTB，敏感度高達(dá)96.1%，但尚無(wú)診斷TB 結(jié)果。目前，許多學(xué)者致力于構(gòu)建融合蛋白，進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，彌補(bǔ)單一蛋白無(wú)法檢測(cè)所有抗體的弊端，也是今后該領(lǐng)域研究的重要發(fā)展方向。

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[3]全國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查技術(shù)指導(dǎo)組.第四次全國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查報(bào)告[J].中華結(jié)核和呼吸雜志,2002,25（1）:3-7.

[4]中國(guó)防癆協(xié)會(huì)基礎(chǔ)專業(yè)委員會(huì).結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程[M].北京:中國(guó)教育文化出版社，2006.

[5]王橋霞.結(jié)核桿菌特異性抗原對(duì)結(jié)核病診斷價(jià)值研究[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2009，9(11):2085-2087.

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