4種漱口液對白色念珠菌抑制效果的實(shí)驗(yàn)研究及臨床觀察

徐麗麗 ，王國權(quán) ，葛永勤 ，李雪芬 ，劉 敏 ，呂 亞 ，何 君

（1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫婦幼保健院，江蘇 無錫 214000；2.中國人民解放軍第307醫(yī)院，北京 100071；3.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 病原微生物安全國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100071）

【論 著】

4種漱口液對白色念珠菌抑制效果的實(shí)驗(yàn)研究及臨床觀察

徐麗麗1，王國權(quán)2，葛永勤1，李雪芬1，劉 敏1，呂 亞1，何 君3

（1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫婦幼保健院，江蘇 無錫 214000；2.中國人民解放軍第307醫(yī)院，北京 100071；3.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 病原微生物安全國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100071）

目的探討4種漱口液對白色念珠菌的抑菌效果；并觀察漱口液對放化療合并口腔白色念珠菌感染的腫瘤患者的臨床療效。方法實(shí)驗(yàn)以白色念珠菌為研究對象，實(shí)驗(yàn)組采用復(fù)方氯己定含漱液、0.02%醋酸氯己定溶液、0.5%聚維酮碘溶液、0.1%西吡氯銨含漱液，對照組采用生理鹽水，觀察4種漱口液的抑菌效果。選用抑菌效果最明顯的2種漱口液，用于放化療合并口腔白色念珠菌感染的60例腫瘤患者，并將其分成2組，每組各30例，觀察其臨床療效。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組的復(fù)方氯己定含漱液和0.5%聚維酮碘溶液的抑菌效果明顯高于0.02%醋酸氯己定溶液和0.1%西吡氯銨含漱液，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；復(fù)方氯己定含漱液與0.5%聚維酮碘溶液的抑菌效果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。臨床觀察：0.5%聚維酮碘溶液組患者在疼痛持續(xù)時(shí)間、平均愈合時(shí)間方面，與復(fù)方氯己定含漱液組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)說明，復(fù)方氯己定含漱液與0.5%聚維酮碘溶液和對白色念珠菌的抑菌效果最明顯。臨床試驗(yàn)的數(shù)據(jù)說明，0.5%聚維酮碘溶液組患者在疼痛持續(xù)時(shí)間、平均愈合時(shí)間方面優(yōu)于與復(fù)方氯己定含漱液組的患者。

漱口液；白色念珠菌；抑菌效果；臨床療效

白色念珠菌 （Candida albicans,即白假絲酵母菌），是口腔正常微生物群的組分之一，也是口腔中重要的條件致病真菌[1]。據(jù)報(bào)道，白色念珠菌現(xiàn)已經(jīng)成為惡性腫瘤患者口腔感染的重要致病菌之一，并有逐年上升的趨勢[2]，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量。因此，有效預(yù)防和治療口腔白色念珠菌感染和加強(qiáng)對此類患者的護(hù)理尤為重要。本次實(shí)驗(yàn)，是以白色念珠菌為研究對象，目的是探討臨床常用的4種漱口液，復(fù)方氯己定含漱液、0.02%醋酸氯己定溶液、0.5%聚維酮碘溶液、0.1%西吡氯銨含漱液，對白色念珠菌的抑菌效果。并選用抑菌效果最明顯的漱口液，應(yīng)用于放化療合并口腔白色念珠菌感染腫瘤患者，觀察其臨床療效，以提高口腔護(hù)理質(zhì)量。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 漱口液 （1）復(fù)方氯己定含漱液，規(guī)格為200 mL/瓶，批號為201211，pH=7，由深圳南粵藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。（2）0.02%醋酸氯己定溶液，規(guī)格為250 mL/瓶，批號為101001；pH=7，由北京麥迪海藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。（3）0.5%聚維酮碘溶液 （艾力克,口腔型）,規(guī)格為 200 mL/瓶,批號為 101201，pH=6，由成都永安制藥有限公司生產(chǎn)。（4）0.1%西吡氯銨含漱液，規(guī)格為 240 mL/瓶，批號為 110109，pH=6，由南京恒生制藥廠生產(chǎn)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)菌株 白色念珠菌菌株代碼為ATCC 10231，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物菌種保藏中心提供。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)儀器 胰蛋白胨，由日本大五榮營養(yǎng)化學(xué)株式公社生產(chǎn)。LP0011型號瓊脂粉及LP00211酵母粉，均由英國OXOID公司生產(chǎn)。氯化鈉注射液，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原微生物實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)。氯化鈉粉劑，由西隴化工股份有限公司生產(chǎn)。430-400E型生物安全柜，由NUAIR公司生產(chǎn)。1-13型離心機(jī)，由德國GSIGMA公司生產(chǎn)。比濁管，由中國藥品生物制品鑒定所生產(chǎn)。TOMOS微量移液器，為20-200 μL，由TOMOS公司生產(chǎn)。恒溫培養(yǎng)箱，由美國lab-line instruments,Inc公司生產(chǎn)。

1.1.4 臨床試驗(yàn)資料 2012年9月—2014年6月，選取我院口腔白色念珠菌感染的腫瘤患者60例，建立入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)，入選標(biāo)準(zhǔn)為：有明確的使用化療藥物史和放療史，及口腔潰瘍表面分泌物培養(yǎng)為白色念珠菌感染者。排除標(biāo)準(zhǔn)為：（1）對漱口液過敏者；（2）伴有系統(tǒng)性疾病或其他嚴(yán)重全身感染者；（3）存在嚴(yán)重口腔疾病，如：口腔惡性腫瘤、牙根炎等；（4）帶狀皰疹病毒感染病史者；（5）影響療效判斷者，依從性差，具備上述之一者給予排除。將60例患者按照入院的先后順序，單數(shù)入復(fù)方氯己定含漱液組，雙數(shù)入0.5%聚維酮碘溶液組，2組患者年齡、文化、婚姻、疾病分型等差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 2組臨床試驗(yàn)患者一般臨床資料比較（例）

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)以白色念珠菌為研究對象，實(shí)驗(yàn)組采用復(fù)方氯己定含漱液、0.02%醋酸氯己定溶液、0.5%聚維酮碘溶液、0.1%西吡氯銨含漱液，對照組采用生理鹽水，觀察4種漱口液的抑菌效果。

1.2.1 菌懸液的制備 用生理鹽水洗下培養(yǎng)24 h的新鮮菌苔，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定為純培養(yǎng)物后，進(jìn)行細(xì)菌比濁，即向樣品管內(nèi)定量的加入菌懸液，與標(biāo)準(zhǔn)的比濁管在比濁圖片上目測、反復(fù)對比兩管的清晰度，直到樣品管和標(biāo)準(zhǔn)的比濁管在圖片的清晰度相等，配制成工作濃度為1×108cfu/mL的菌懸液即用。

1.2.2 抑菌試驗(yàn) 取1 mL上述菌懸液，10 000 rpm/min離心收集，棄上清以漱口液懸浮3 min后，生理鹽水洗滌2次，按照常規(guī)方法進(jìn)行10倍系列稀釋，依次取每個(gè)濃度的菌懸液0.1 mL涂布營養(yǎng)瓊脂平皿，每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行樣本[3]，同時(shí)設(shè)生理鹽水對照組，在37℃培養(yǎng)24 h，試驗(yàn)重復(fù)3次，采用平板記數(shù)法來測定平板上的存活菌落數(shù)。

1.2.3 臨床試驗(yàn)與評價(jià) 研究開始前，對參與研究的病區(qū)護(hù)理人員進(jìn)行培訓(xùn)并分工。2組在使用漱口液前全面評估潰瘍傷口的情況，并使用冷開水或淡鹽水進(jìn)行口腔清洗[4]，以提高漱口液的效果。漱口的方法，漱口液含漱時(shí)，讓患者充分鼓動(dòng)雙腮，用舌在齒、頰、腭面攪動(dòng)，反復(fù)沖擊，并使頭稍向后仰，使漱口液充分接觸口腔各部位，如患者口腔潰瘍嚴(yán)重，口腔疼痛張口困難時(shí) ，可用吸管吸入漱口液。而且，要反復(fù)多次含漱，時(shí)間要達(dá)到3 min，每次含漱量約5～10 mL，分別于早、中、晚餐前后、睡前進(jìn)行。用藥時(shí)間平均為7 d，疼痛評價(jià)采用數(shù)字評定量表進(jìn)行評估。在停藥24 h后進(jìn)行潰瘍表面分泌物細(xì)菌、真菌培養(yǎng)。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將收集的數(shù)據(jù)，采用SPSS 17.0進(jìn)行分析。由于菌落絕對數(shù)不成正態(tài)分布，因此，采用對數(shù)轉(zhuǎn)化法使之基本符合正態(tài)分布。不同處理組之間是否有差異，采用單因素方差分析，兩兩比較采用Games-Howell法，患者一般臨床資料比較采用χ2檢驗(yàn)；疼痛持續(xù)時(shí)間、平均愈合時(shí)間采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4種漱口液之間及與對照組的兩兩比較 經(jīng)單因素方差分析顯示，不同處理組的平均菌落計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （F=316.863，P=0.000），采用 Games-Howell法進(jìn)行兩兩比較，4種漱口液組分別與對照組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中復(fù)方氯己定含漱液組與0.5%聚維酮碘溶液組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但是此2種漱口液作用后的菌落計(jì)數(shù)明顯低于0.02%醋酸氯己定溶液組和0.1%西吡氯銨含漱液組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表 2。

表2 4種漱口液作用3 min后平均菌落計(jì)數(shù)的比較

2.2 4種漱口液作用后活菌數(shù)量的變化 實(shí)驗(yàn)組中0.5%聚維酮碘溶液與復(fù)方氯己定含漱液作用后的活菌數(shù)量明顯少于0.02%醋酸氯己定溶液和0.1%西吡氯銨含漱液，而對照組生理鹽水作用后的活菌數(shù)量布滿整個(gè)平皿，見圖1。

圖1 4種漱口液作用后活菌數(shù)量的變化

2.3 2組患者口腔潰瘍疼痛持續(xù)時(shí)間與平均愈合時(shí)間的比較 臨床試驗(yàn)表明，0.5%聚維酮碘溶液組患者在疼痛持續(xù)時(shí)間、平均愈合時(shí)間方面與復(fù)方氯己定含漱液組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 2組患者口腔潰瘍疼痛持續(xù)時(shí)間與平均愈合時(shí)間的比較（±S，d）

表3 2組患者口腔潰瘍疼痛持續(xù)時(shí)間與平均愈合時(shí)間的比較（±S，d）

組別 n 疼痛持續(xù)時(shí)間 愈合時(shí)間復(fù)方氯己定含漱液組 30 5.27±1.47 6.15±0.64 0.5%聚維酮碘溶液組 30 3.58±0.96 4.57±1.28 t 8.065 8.64 P 0.018 0.009

2.4 治療后口腔潰瘍表面真菌培養(yǎng)結(jié)果 停藥24 h后口腔潰瘍表面分泌物真菌培養(yǎng)結(jié)果表明0.5%聚維酮碘溶液組患者白色念珠菌陽性的構(gòu)成比少于復(fù)方氯己定含漱液組，然而，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表 4。

表4 2組患者治療7 d后口腔潰瘍表面真菌培養(yǎng)結(jié)果

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)菌種的選擇 本研究按照隨機(jī)、對照、重復(fù)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則和要求，進(jìn)行研究設(shè)計(jì)和實(shí)施。這樣可以最大限度地減少非處理因素的影響，減少實(shí)驗(yàn)誤差，使實(shí)驗(yàn)的結(jié)果具有科學(xué)的說服力。實(shí)驗(yàn)組與對照組同步進(jìn)行試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，可比性、重復(fù)性、科學(xué)性良好。實(shí)驗(yàn)菌種的選擇，同種細(xì)菌對不同的漱口液有著不同的耐受性,故試驗(yàn)所選擇的菌種應(yīng)是有代表性的標(biāo)準(zhǔn)菌株,或者是有實(shí)際意義的菌株。目前，國內(nèi)外實(shí)驗(yàn)對于口腔疾病或口腔黏膜感染所選擇的菌株，大多為混合菌液或是抵抗力不強(qiáng)的細(xì)菌，如放線菌、變形鏈球菌、金色葡萄球菌等。2010年6月—2012年6月，通過對我院194例放療或化療的惡性腫瘤患者，送檢的1 109份咽拭子標(biāo)本，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得出口腔白色念珠菌感染居于惡性腫瘤患者口腔感染的第1位，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[2]。因此，本研究所選用的細(xì)菌為白色念珠菌，也是院內(nèi)感染最常見的細(xì)菌，具有一定的代表性。

3.2 含漱液對白色念珠菌的抑菌效果 基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組中的復(fù)方氯己定含漱液和0.5%聚維酮碘溶液（艾力克，口腔型）的抑菌效果最明顯，優(yōu)于其他2種漱口液。多項(xiàng)國內(nèi)外研究結(jié)果表明采用氯己定進(jìn)行口腔護(hù)理具有較好的抑菌作用[5]。0.5%聚維酮碘溶液(PVP-I)是聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和碘形成的絡(luò)合物，具有很強(qiáng)的氧化作用，在接觸黏膜時(shí)能逐漸分解，氧化細(xì)菌原聚蛋白中的活性基因，并與蛋白的氨基結(jié)合使其變性，從而達(dá)到殺菌目的[6]。Driguez-Caballero等認(rèn)為口腔局部應(yīng)用聚維酮碘是預(yù)防或治療癌癥放化療患者口腔黏膜炎臨床常用的方法[7]。

3.3 含漱液在口腔中的臨床療效 在放療或化療合并口腔感染的防治領(lǐng)域，我國尚缺乏將科研結(jié)論與臨床經(jīng)驗(yàn)相結(jié)合所獲取的最佳證據(jù)，缺乏將最佳證據(jù)，科學(xué)地應(yīng)用于臨床。本研究就是將基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的科研結(jié)論與臨床實(shí)踐相結(jié)合，通過基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)選用抑菌效果最明顯的漱口液，用于放療或化療合并口腔白色念珠菌感染的60例腫瘤患者，結(jié)果顯示，0.5%聚維酮碘溶液組患者在疼痛持續(xù)時(shí)間、平均愈合時(shí)間方面優(yōu)于復(fù)方氯己定含漱液組的患者。雖然，復(fù)方氯己定含漱液能夠抑制口腔內(nèi)細(xì)菌的黏附和生長，并能殺滅多種致病菌，但因其有刺激性氣味，吸收緩慢,易引起惡心嘔吐,患者治療依從性差[8]。停藥24 h后口腔潰瘍表面分泌物真菌培養(yǎng)結(jié)果表明，0.5%聚維酮碘溶液組患者白色念珠菌陽性的構(gòu)成比明顯少于復(fù)方氯己定含漱液組，從構(gòu)成比來看有臨床意義。然而，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能的原因是本研究因樣本量較少，檢出效能降低；在臨床中，不可控制的因素較多。Madan等[9]通過臨床試驗(yàn)證實(shí)，在減少口腔黏膜潰瘍的嚴(yán)重性及推遲它的發(fā)生方面，聚維酮碘明顯優(yōu)0.12%氯己定。

綜上所述，結(jié)合基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)與臨床試驗(yàn)的數(shù)據(jù)說明，復(fù)方氯己定含漱液與0.5%聚維酮碘溶液對白色念珠菌的抑菌效果最明顯。0.5%聚維酮碘溶液組患者在疼痛持續(xù)時(shí)間、平均愈合時(shí)間方面優(yōu)于復(fù)方氯己定含漱液組的患者。因此，根據(jù)本研究結(jié)果提示護(hù)理人員，對于放療或化療合并有口腔白色念珠菌感染的腫瘤患者，在口腔護(hù)理時(shí)，要有針對性地選擇漱口液，以達(dá)到更有效的口腔護(hù)理，提高口腔護(hù)理質(zhì)量。

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Clinical Observation on Bacteriostatic Effect of Four Kinds of Gargles on Candida Albicans

XU Li-li1,WANG Guo-quan2,GE Yong-qin1,LI Xue-fen1,LIU Min1,LV Ya1,HE Jun3
(1.Wuxi Women and Children’s Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Wuxi 214000,China;2.No.307 Hospital of PLA,Beijing 100071,China;3.National Key Laboratory of Pathogenic Microorganisms Safety,Academe of Military Medical Sciences,Beijing 100071,China)

ObjectiveTo investigate the bacteriostatic effect of four kinds of gargles on Candida albicans,and to observe clinical efficacy of gargles on cancer patients with oral Candida albicans infection undergoing chemoradiotherapy.MethodsFour kinds of gargles including compound chlorhexidine mouthwash,0.02%chlorhexidine acetate solution,0.5%povidone-iodine solution,and 0.1%cetylpyridinium chloride were applied in experiment group while physiological saline was applied in control group then the antibacterial effect of four gargles was observed.The antibacterial gargles with obvious effect were applied among two groups involving 60 cases of cancer patients with oral Candida albicans infection undergoing chemoradiotherapy.ResultsGood antibacterial effect was found in compound chlorhexidine mouthwash and 0.5%povidone-iodine solution when compared with that of 0.02%chlorhexidine acetate solution and 0.1%cetylpyridinium chloride and the difference was statistically significant(P＜0.05),but no statistical significance was found in the effect comparison between compound chlorhexidine mouthwash and 0.5%povidone-iodine solution (P＞0.05).Clinically,0.5%povidone-iodine solution group presented good effect in terms of duration of pain and average healing time when compared with compound chlorhexidine mouthwash, which indicated statistical significance (P＜0.05).ConclusionCompound chlorhexidine mouthwash and 0.5%povidone-iodine solution have good antibacterial effect while in terms of duration of pain and the average healing time,0.5%povidone-iodine solution performs even better.

mouthwash;candida albicans;bacteriostatic effect;clinical efficacy

R473.78；R97

A

10.16460/j.issn1008-9969.2015.17.006

2015-03-01

無錫市醫(yī)管中心護(hù)理科研基金（YGZXH1306）

徐麗麗（1981-），女，安徽阜陽人，主管護(hù)師，碩士。

葛永勤（1968-），女，江蘇無錫人，本科學(xué)歷，副主任護(hù)師，E-mail：gyq4099@163.com。

陳伶俐]