陳能橋，趙福葳，毛以智，朱大舉，李紅艷，冉 浴

（1.貴州省遵義市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 遵義 563000；2.遵義市綏陽(yáng)縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遵義 綏陽(yáng) 563300）

豬O型口蹄疫不同疫苗免疫抗體消長(zhǎng)規(guī)律研究

陳能橋1，趙福葳1，毛以智1，朱大舉2，李紅艷2，冉 浴2

（1.貴州省遵義市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 遵義 563000；2.遵義市綏陽(yáng)縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遵義 綏陽(yáng) 563300）

本試驗(yàn)隨機(jī)篩選出90頭口蹄疫母源抗體為陰性的53～73日齡仔豬為試驗(yàn)動(dòng)物，平均分成A、B、C3組，分別注射豬口蹄疫O型滅活疫苗2 mL、4 mL和合成肽疫苗1 mL，進(jìn)行免疫后不同時(shí)段的免疫抗體跟蹤監(jiān)測(cè)，探索豬口蹄疫O型不同疫苗和滅活疫苗不同免疫劑量免疫后免疫抗體的消長(zhǎng)規(guī)律。結(jié)果表明：A、B、C組的群體保護(hù)率都較好，其中C組的群體保護(hù)率穩(wěn)定時(shí)間長(zhǎng)，未見(jiàn)免疫副反應(yīng)，效果最好。

口蹄疫疫苗；豬；抗體消長(zhǎng)；規(guī)律

豬O型口蹄疫是由O型口蹄疫病毒引起的豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，該病傳播迅速，發(fā)病率高，是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定必須報(bào)告的傳染病之一，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病[1-2]。長(zhǎng)期以來(lái)，使用豬O型口蹄疫疫苗免疫接種是我國(guó)預(yù)防本病的重要措施[3-5]。為科學(xué)制定豬O型口蹄疫的免疫程序，合理使用豬口蹄疫O型滅活疫苗和合成肽疫苗，于2014年在我市綏陽(yáng)縣某種豬場(chǎng)，隨機(jī)篩選90頭53～73日齡仔豬分組進(jìn)行豬口蹄疫O型滅活疫苗和合成肽疫苗及豬口蹄疫O型滅活疫苗不同劑量免疫后副反應(yīng)調(diào)查、免疫抗體水平和抗體維持時(shí)間等相關(guān)工作的研究。

1 材料與方法

1．1 試驗(yàn)動(dòng)物

隨機(jī)選擇53～73日齡的仔豬若干頭，無(wú)菌前腔靜脈采血分離血清，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)口蹄疫母源抗體，篩選母源抗體陰性的仔豬90頭為試驗(yàn)動(dòng)物。將90頭仔豬隨機(jī)分成A、B、C 3組，每組30頭，對(duì)每頭仔豬進(jìn)行編號(hào)。

1．2 試驗(yàn)疫苗

上海某生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的豬口蹄疫O型合成肽疫苗（多肽2570+7309）；蘭州某生物科技股份有限公司生產(chǎn)的豬口蹄疫O型滅活疫苗（O/ MYA98/BY2010株）。

1．3 檢測(cè)試劑

A組和B組用豬口蹄疫病毒O型抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法），鄭州中道生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。C組用O型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，武漢科前生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

1．4 免疫劑量A組每頭仔豬耳根后肌肉注射豬口蹄疫O型滅活疫苗2 mL；B組每頭仔豬耳根后肌肉注射豬口蹄疫O型滅活疫苗4 mL；C組每頭仔豬耳根后肌肉深層注射豬口蹄疫O型合成肽疫苗1 mL。

1．5 免疫副反應(yīng)調(diào)查

免疫后72 h內(nèi)細(xì)心觀察試驗(yàn)仔豬是否出現(xiàn)采食減少、體溫升高甚至死亡等免疫副反應(yīng)。

1．6 采血時(shí)間

分別于免疫后第7 d、15 d、30 d、45 d、60 d、90 d、120 d、150 d和180 d，進(jìn)行無(wú)菌前腔靜脈采血并分離血清，4 ℃保存，次日檢測(cè)。

1．7 抗體檢測(cè)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。按檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書操作、判定。A組和B組：樣品OD450nm值≥Cut Off值時(shí)判為陽(yáng)性；樣品OD450nm值＜Cut Off值時(shí)判為陰性；C組：樣品OD630nm值≥0．4時(shí)判為陽(yáng)性；樣品OD630nm值＜0．4時(shí)判為陰性。

2 結(jié)果與分析

1)免疫副反應(yīng)調(diào)查結(jié)果見(jiàn)表1和圖1，本試驗(yàn)共有28頭豬出現(xiàn)了不同程度的免疫副反應(yīng)，表現(xiàn)為精神沉郁、體溫升高、嘔吐和腹瀉，其中A組6頭，B組22頭，C組未見(jiàn)免疫副反應(yīng)，28頭豬均在72 h內(nèi)自愈。

2)各組免疫后不同時(shí)間抗體的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2、圖2和圖3。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程因其他原因?qū)е?頭豬死亡， 其中A組2頭，即 45 d和150 d各死亡1頭；B組于45 d死亡1頭；C組3頭，即15 d死亡1頭、45 d死亡2頭。從表2、圖2和圖3可知， A組7 d時(shí)免疫抗體陽(yáng)性率即群體保護(hù)率為20．00%，15～150 d群體保護(hù)率均＞70%； B組和C組免疫第7天時(shí)群體保護(hù)率分 別 為 76．67%、73．33%，150 d時(shí)3組的群體保護(hù)率分別為71．43%、75．86%和77．78%。3個(gè)試驗(yàn)組免疫后150 d豬的群體保護(hù)率均達(dá)到農(nóng)業(yè)部規(guī)定≥70%的標(biāo)準(zhǔn)。由表2知，接種豬口蹄疫O型滅活疫苗2 mL后，15～150 d免疫豬群體的群體保護(hù)率＞70%，所以生產(chǎn)中遵照疫苗使用說(shuō)明書規(guī)范操作，就可獲得較好的免疫效果。

表1 免疫豬群副反應(yīng)調(diào)查結(jié)果

圖1 免疫豬群副反應(yīng)調(diào)查結(jié)果

表2 不同時(shí)間免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3 結(jié)論與討論

1）接種豬口蹄疫O型滅活疫苗72 h內(nèi)，試驗(yàn)豬出現(xiàn)免疫副反應(yīng)的頭數(shù)是：A組6頭，B組22頭，分別為免疫數(shù)的20．00%和73．33%（6/30、22/30）。由此可知，生產(chǎn)實(shí)踐中不應(yīng)隨意加大免疫劑量，避免對(duì)動(dòng)物機(jī)體造成傷害。免疫后150 d，3個(gè)試驗(yàn)組群體保護(hù)率分別為71．42%、75．86%和77．77%；到180 d時(shí)，C組（合成肽組）的群體保護(hù)率為22．22%，A、B 2組因試驗(yàn)豬銷售未能檢測(cè)，根據(jù)120～150 d A、B 2組抗體OD值下降的幅度可以看出，180 d時(shí)這2組豬的群體保護(hù)率都將低于70%。由此可知，接種豬口蹄疫O型滅活疫苗和豬口蹄疫O型合成肽疫苗后的群體有效保護(hù)期（免疫期）為150 d左右（圖3）。

2)對(duì)豬口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗體消長(zhǎng)變化的研究表明，豬口蹄疫O型合成肽疫苗免疫一次，即可確保高效價(jià)抗體維持至150 d。豬口蹄疫O型合成肽疫苗具備免疫原性高，生物安全性好，免疫副反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)，在生產(chǎn)實(shí)踐中值得普及推廣。由于有1頭豬接種豬口蹄疫O型滅活疫苗后（B組，4 mL），7～150 d的檢測(cè)結(jié)果均為陰性，表明該頭豬未產(chǎn)生免疫抗體，其原因是否為加倍劑量免疫導(dǎo)致免疫不應(yīng)答（免疫耐受）有待進(jìn)一步探討。

3)在本試驗(yàn)中，B組即加倍劑量注射豬口蹄疫O型滅活疫苗后，豬群提前7 d達(dá)到群體保護(hù)水平，但免疫副反應(yīng)也隨之大幅度增加(為免疫數(shù)的73．33%)，主要表現(xiàn)為體溫升高、精神沉郁嘔吐和腹瀉，因此只有在緊急免疫情況下，才建議使用該種免疫方法進(jìn)行免疫。C組即接種口蹄疫O型合成肽疫苗后，未見(jiàn)豬群出現(xiàn)以上副反應(yīng)；通過(guò)表2、圖2和圖3可知，接種口蹄疫O型合成肽疫苗后豬群的群體保護(hù)率均較好，且抗體水平和群體保護(hù)率的時(shí)間較穩(wěn)定，說(shuō)明接種該疫苗效果最好。

圖2 免疫豬群O型口蹄疫抗體動(dòng)態(tài)檢測(cè)OD值

圖3 免疫后不同時(shí)間群體保護(hù)率

[1] 謝慶閣．口蹄疫[M]．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2004：16-27．

[2] 易悅，王利娜，徐志文，等．豬口蹄疫疫苗的研究進(jìn)展及其應(yīng)用[J]．豬業(yè)科學(xué)，2011，28（2）：44-48．

[3] 周小紅．豬口蹄疫免疫抗體合格率影響因素研究[J]．北京農(nóng)業(yè)，2012(12)：21-22．

[4] 鐘小艷，凌洪權(quán)，黎朝燕．豬口蹄疫免疫抗體檢測(cè)方法比較[J]．中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘，2011，27(6)：50-51．

[5] Sellers R， Gloster J． Footandmouth disease： A review of intranasal infection of cattle，sheep and pigs[J]．The Veterinary Journal，2008，177(2)：159-168．

2015-07-24）

省市科技合作專項(xiàng)資金項(xiàng)目，合同號(hào)：[省市科合（2013）35號(hào)]

趙福葳，女（1963-），貴州遵義人，大學(xué)學(xué)歷，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病防控及畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣工作，E-mail:1148638815@qq.com