溶痰液在抗酸桿菌檢測中的應(yīng)用及其方法學評價

吳建耀 周桂生 龔 萍 余淑芳

昆山周市人民醫(yī)院檢驗科，江蘇昆山 215314

溶痰液在抗酸桿菌檢測中的應(yīng)用及其方法學評價

吳建耀 周桂生 龔 萍 余淑芳

昆山周市人民醫(yī)院檢驗科，江蘇昆山 215314

目的 探究溶痰液涂片法在痰液的抗酸桿菌檢測中的意義和價值。方法 收集2011年6月—2013年6月期間于該院檢驗科痰液檢查者的痰標本共計1100份，將每一份樣本同時進行直接涂片法和溶痰液涂片法來檢測痰標本中的抗酸桿菌，檢測兩種方法對抗酸桿菌的陽性檢測率。結(jié)果 溶痰液涂片法的陽性率為3.09%，直接涂片法陽性率為1.36%，前者明顯高于后者，其差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。并且各種痰液的檢出率和陽性等級都高于直接涂片法。 結(jié)論 在結(jié)核病的抗酸桿菌的檢測方法中，溶痰液涂片法陽性檢測率明顯優(yōu)于直接涂片法，可以作為快速診斷結(jié)核病的方法和手段，值得在臨床上推廣應(yīng)用。

直接涂片法；溶痰液涂片法；抗酸桿菌

結(jié)核病是指由于結(jié)核桿菌引起的慢性感染性疾病，主要的傳播途徑是呼吸道、消化道、皮膚以及子宮，其中最主要是通過呼吸道，主要的臨床表現(xiàn)是午后低熱、乏力。現(xiàn)今結(jié)核病仍舊嚴重地危害著人類的健康[1]。當前對肺結(jié)核患者進行細菌學檢查是發(fā)現(xiàn)和檢測傳染源最主要的途徑，這也是肺結(jié)核患者在確定診斷和治療方案的重要依據(jù)[2]。該研究通過回顧性分析2011年6月—2013年6月期間該院住院以及門診肺結(jié)核患者痰液通過直接涂片法和溶痰液涂片法檢測結(jié)果的差異，從而探究溶痰液在抗酸桿菌檢測中的意義和價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

來該院檢查患者在不同時間段（晨痰、即時痰和夜間痰）以及不同性質(zhì)（唾液痰、黏液痰、血痰和膿性痰）的痰標本共計1100份。

1．2方法與儀器

直接涂片法:將合格的痰液標本3 mL左右置于標本盒或者廣口容器內(nèi)，將其中0.1 mL左右的膿樣痰液、干酪樣的痰液用竹簽挑取，放置在一塊干凈的載玻片中央，均勻地涂抹為2×2.5 cm大小的卵圓形痰膜。痰液自然干燥、固定、染色以后進行鏡檢。

溶痰劑涂片法:將合格的痰液標本10 mL左右置于消毒后的廣口容器內(nèi)，加入5倍的無菌蒸餾水，121 MPa高壓蒸汽滅菌20 min后，將痰檢體和BASO溶痰劑以1：2或者1：3的比例混合均勻，靜置10～20 min，待檢體完全融化后，于10 000轉(zhuǎn)/min下離心，除去上清液，取沉淀涂片染色后進行鏡檢。該研究所采用的染色方法為最常用的Ziehl-Neelsen抗酸染色法[3]；經(jīng)過染色以后抗酸桿菌為紅色，其他細菌和背景則被染成了藍色。

1．3 觀察指標

根據(jù)《中國結(jié)核病防治規(guī)劃實施工作指南》[4]中有關(guān)鏡檢和報告標準進行報告，具體如下：(1)鏡下計數(shù)一百個視野，并且觀察的時間不能低于4 min，沒有發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌，繼續(xù)觀察連續(xù)三百個視野，仍然沒有發(fā)現(xiàn)有抗酸桿菌，則報告為抗酸桿菌陰性，用“-”來表示。(2)鏡檢100～300個視野，若發(fā)現(xiàn)有1～2條抗酸桿菌，則記錄下所發(fā)現(xiàn)的抗酸桿菌的條數(shù)以及觀察的的視野數(shù)，報告為抗酸桿菌可疑（±）。并且對標本進行復查，重新涂片。(3)鏡檢小于100個視野，發(fā)現(xiàn)有3～9條AFB，則記錄下100個視野內(nèi)抗酸桿菌的數(shù)目，報告為抗酸桿菌陽性（1+）。(4)鏡檢小于10個視野發(fā)現(xiàn)有1～9條抗酸桿菌則報告為抗酸桿菌陽性（2+）。(5)若鏡檢每個視野都發(fā)現(xiàn)有1～9條抗酸桿菌則報告為抗酸桿菌陽陽性（3+）。(6)若鏡檢每個視野發(fā)現(xiàn)的抗酸桿菌數(shù)量都大于9條，則報告為抗酸桿菌陽性（4+）[5]。

1．4 統(tǒng)計方法

該研究采用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件對所得的數(shù)據(jù)進行整理分析，計量資料均數(shù)±標準差（）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗。檢驗標準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 痰標本檢測結(jié)果

2011年6月—2013年6月期間來該院檢查患者的痰標本共計1100份，不同的去痰時間段以及標本性質(zhì)檢測，見表1。

表1 1100份痰標本檢測結(jié)果（份）

2.2 兩種不同涂片方法對1100份痰液標鏡檢結(jié)果

直接涂片法對1100份痰液鏡檢陽性率為1.36%（15/1100）,而溶痰液涂片法進行鏡檢陽性率為3.09%（35/1100）,溶痰液涂片法的陽性率要明顯高于直接涂片法，兩種方法陽性檢測率差異有統(tǒng)計學意義（χ2=16.432，P＜0.05），見表2；即時痰、夜間痰、晨痰痰液標本利用直接涂片法其陽性檢測率分別為0.75%、1.30%、2.69%，而利用溶痰劑涂片法其鏡檢陽性檢測率分別為1.5%、2.60%、6.15%。溶痰液涂片法對不同性質(zhì)的痰液標本鏡檢陽性率要明顯高于直接涂片法,差異有統(tǒng)計學意義（χ2=16.432，P＜0.05），見表3。

表2 不同性質(zhì)的痰液標本兩種不同涂片方法鏡檢結(jié)果

表3 不同時間段的痰液標本兩種不同涂片方法鏡檢結(jié)果

3 討論

直接涂片法由上個世紀開始廣泛應(yīng)用，到目前為止仍然是檢測結(jié)核病菌的主要方法之一。直接涂片法用于檢測抗酸桿菌得優(yōu)點有報告時間短、成本低廉、技術(shù)相對簡單、特異性高[6]，但是直接涂片法所使用的檢體大多都沒有經(jīng)過處理，而是直接做成抹片，進行染色工作，因此準確性較低，而未經(jīng)過處理的痰液檢體在烘干的過程中，陽性患者痰液中殘存的肺結(jié)核菌很容易被蒸發(fā)到空氣中，這樣就可能會造成周圍人員以及操作者的感染。而Baso溶痰劑能夠迅速地溶解痰液中的上皮細胞、粘液，而且也可以滅活非分支桿菌，這樣能夠減少鏡檢時的干擾，顯著地提高陽性檢測率，降低偽陽性的發(fā)生率[7-8]。

該研究結(jié)果表明，雖然規(guī)定唾液是不合格的標本，應(yīng)該要求病人重新送檢黏液痰、膿性痰標本，但是通過檢測發(fā)現(xiàn)口水和唾液中存在著抗酸桿菌，所以在工作者對于少痰或者確實無痰的正常體檢人員和患者，為了臨床診斷的需要以及避免矛盾，也可以接受唾液痰，此外在必要時可以采取超聲霧化取痰[9-10]。直接涂片法共檢測出15份抗酸菌陽性標本，陽性率為1.36%，而溶痰劑涂片法共檢測出34份抗酸菌標本，陽性率為3.09%。溶痰液涂片法的陽性率要明顯高于直接涂片法，并且陽性等級也要高于直接涂片法。直接涂片法和溶痰液法對血痰、膿性痰、黏液痰、唾液痰痰液標本進行檢測其陽性率分別為：（3.06%vs 9.18%）、（2.63%vs 4.61%）、（1.18%vs 1.85%）、（0.78%vs 2.74%）；直接涂片法和溶痰液法對即時痰、夜間痰、晨痰痰液標本進行檢測其陽性率分別為 （0.75%vs 1.5%）、（1.30 vs 2.60%）、（2.69%vs 6.15%）。這表明對于不同性質(zhì)的痰液標本以及不同時間段的痰液標本，溶痰液涂片法陽性檢查率均要優(yōu)于直接涂片法。

綜上所述，在結(jié)核病的抗酸桿菌的檢測方法中，溶痰液涂片法陽性檢測率明顯優(yōu)于直接涂片法，可以作為快速診斷結(jié)核病的方法和工具，值得在臨床上推廣應(yīng)用。

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A

1674-0742（2015）01（b）－0180-02

2014-10-15）

吳建耀（1977-），男，江蘇泗陽人，本科，主管檢驗師，研究方向:臨床生化。