UPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定蔬菜中34種農(nóng)藥殘留

晏利芝，趙永彪，劉寧，宋薇

（譜尼測(cè)試科技股份有限公司，北京100080）

UPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定蔬菜中34種農(nóng)藥殘留

晏利芝，趙永彪，劉寧，宋薇

（譜尼測(cè)試科技股份有限公司，北京100080）

采用超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（UPLC-MS/MS）技術(shù)建立了同時(shí)檢測(cè)蔬菜中34種農(nóng)藥多殘留量的快速檢測(cè)方法。樣品經(jīng)乙腈提取，濃縮定容后用QuEChERS農(nóng)殘凈化管凈化，Acquity BEH-C18超高液相色譜柱分離，進(jìn)入電噴霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）分析，對(duì)液質(zhì)分離條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明34種農(nóng)藥在10ng/mL～200 ng/mL范圍內(nèi)線性良好（r≥0.993 6）。在10μg/kg～30μg/kg范圍內(nèi)，平均加標(biāo)回收率在68.7%～116.8%之間，RSD≤12%。該方法檢出限為0.001mg/kg～0.01mg/kg，測(cè)定結(jié)果滿足蔬菜樣品中多殘留農(nóng)藥的檢測(cè)要求。

多殘留檢測(cè)；QuEChERS農(nóng)殘凈化管；蔬菜；超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中為了防治病蟲害，提高蔬菜的產(chǎn)量，在蔬菜生長(zhǎng)的各個(gè)階段廣泛使用不同種類的農(nóng)藥，農(nóng)藥殘留危害日趨嚴(yán)重，從而給人們的身體健康帶來了危害。近年來，發(fā)達(dá)國(guó)家相繼建立了蔬菜中更低濃度的農(nóng)藥限定標(biāo)準(zhǔn)，如日本實(shí)行的《食品中農(nóng)用化學(xué)品殘留肯定列表制度》[1]；同時(shí)農(nóng)藥檢測(cè)種類也大幅增加，世界衛(wèi)生組織（WHO）和聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）制定的食品中農(nóng)藥的MRL標(biāo)準(zhǔn)則多達(dá)2510項(xiàng)[2]，國(guó)際食品法典委員會(huì)（CAC）對(duì)375種食品中176種農(nóng)藥和31種獸藥規(guī)定了2439條相關(guān)的最高殘留量（MRL）標(biāo)準(zhǔn)[3]。我國(guó)從20世紀(jì)90年代初開始研究農(nóng)藥的多殘留分析方法，并相繼推出了一系列國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法[4-6]。農(nóng)藥多殘留的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法（GC）[7-8]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）[9]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）[10]以及超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）[11]。本研究根據(jù)日本、美國(guó)等組織和國(guó)家的食品中有關(guān)農(nóng)藥殘留的檢驗(yàn)項(xiàng)目，結(jié)合農(nóng)殘的特性，引入QuEChERS農(nóng)殘凈化管凈化法，采用超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，建立了同時(shí)測(cè)定蔬菜中34種農(nóng)藥殘留的方法，該方法簡(jiǎn)便、快速，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，具有一定的實(shí)用價(jià)值。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

Waters UPLC-TQD液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有電噴霧離子源（ESI）。RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化有限公司）；渦旋混合器；安捷倫公司QuEChERS農(nóng)殘凈化管；氮吹儀。

氯化鈉，優(yōu)級(jí)純；乙酸、乙腈、甲醇，均為色譜純；水為超純水。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制

準(zhǔn)確稱取適量的乙酰甲胺磷、啶蟲脒、涕滅威、亞砜滅威等34種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制成質(zhì)量濃度為10mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，依據(jù)需要稀釋成適當(dāng)質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液，于4℃下保存。

1.3 色譜條件

色譜柱：Acquity BEH-C18（2.1mm×100mm，1.7μm）；柱溫：40℃；樣品室溫度：10℃；流速：0.45mL/min；進(jìn)樣量：10μL。梯度洗脫程序見表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序Table1 Gradient elution program

1.4 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源（ESI），正離子模式；毛細(xì)管電壓3.0 kV；去溶劑溫度：400℃；離子源溫度：110℃；去溶劑氣流速：400 L/h；碰撞氣體壓力：0.32Pa；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式（MRM）。其它質(zhì)譜參數(shù)見表2。

表2 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式（MRM）的部分質(zhì)譜參數(shù)Table 2 MRM conditions for the determination of seven carbamate pesticides

續(xù)表2 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式（MRM）的部分質(zhì)譜參數(shù)Continue table2 MRM conditions for the determination of seven carbamate pesticides

1.5 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取勻漿后的試樣3 g（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入乙腈10mL 1%乙酸-乙腈混合溶液、2.0 g氯化鈉渦旋混合1min，以10 000 r/min離心5min，取上層溶液加入到QuEChERS農(nóng)殘凈化管中，渦旋混合1min，以10 000 r/min離心5min，取上層液5m L于離心管中，用氮吹儀吹干，加20%甲醇定容至1mL，用0.22μm濾膜濾過，待測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 凈化方法的優(yōu)化

目前測(cè)定蔬菜樣品中農(nóng)藥殘留時(shí)，常使用氨基-碳黑固相萃取小柱對(duì)樣品液進(jìn)行凈化，但該方法需使用較多的有機(jī)試劑活化、淋洗及解吸，耗時(shí)長(zhǎng)，且操作不當(dāng)易使測(cè)定結(jié)果偏低等缺點(diǎn)，本文方法采用QuEChERS農(nóng)殘凈化管對(duì)樣品進(jìn)行凈化處理，方法穩(wěn)定性好、精密度高；溶劑使用量少，操作方便，價(jià)格低廉、污染??；處理時(shí)間短，工作效率大大提高。

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

用針泵以20μL/min的流速注入2mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以正離子模式進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜圖全掃描，結(jié)果這些化合物的[M+H]+峰均比較強(qiáng)。確定各個(gè)化合物的分子離子后，分別以其分子離子作為母離子，進(jìn)行子離子掃描，選取豐度最強(qiáng)的碎片作為定量離子，次強(qiáng)的碎片離子作為定性離子。最后以選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)正離子模式，優(yōu)化錐孔電壓、碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)，優(yōu)化后的質(zhì)譜條件見表2。

2.3 線性關(guān)系

精密吸取適量34種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別稀釋成0.01、0.02、0.05、0.10、0.20μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，以待測(cè)物定量離子的峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以10S/N所對(duì)應(yīng)的化合物濃度為其方法檢出限。結(jié)果表明34種農(nóng)藥的相關(guān)系數(shù)為0.993 1～0.999 3，34種農(nóng)藥在0.01μg/mL～0.20μg/mL范圍內(nèi)具有較好的線性關(guān)系，方法檢出限在0.001mg/kg～0.01mg/kg以下。

2.4 方法準(zhǔn)確度

對(duì)34種農(nóng)藥分別用菠菜、黃瓜等2種蔬菜按0.02、0.05mg/kg添加水平進(jìn)行了加標(biāo)回收率試驗(yàn)，菠菜、黃瓜的回收率及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見表3。

表3 34種農(nóng)藥殘留的添加回收率（n=3）Table 3 The spiked recoveries of 34 kinds of pesticide residues（n=3）

續(xù)表3 34種農(nóng)藥殘留的添加回收率（n=3）Continue table 3 The spiked recoveries of 34 kinds of pesticide residues（n=3）

由表3可以看出：在2個(gè)添加水平上，34種農(nóng)藥的平均回收率在68.7%～116.8%之間，RSD≤12%。

2.5 樣品分析

采用本方法對(duì)所采蔬菜樣品分析，其中黃瓜樣品檢出吡蟲啉0.06mg/kg，其他樣品均未檢出。

3 結(jié)論

本方法采用采用QuEChERS農(nóng)殘凈化管前處理凈化，超高液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定，建立了蔬菜中34種農(nóng)藥殘留量測(cè)定方法。每個(gè)樣品分析時(shí)間僅為10min，與傳統(tǒng)液相色譜相比，極大地縮短了分析時(shí)間，方法簡(jiǎn)便、快捷，準(zhǔn)確，檢出限均能達(dá)到0.01mg/kg，可用于蔬菜中這34種農(nóng)藥殘留的確證檢驗(yàn)。所建立的農(nóng)藥多殘留檢測(cè)方法大大的提高了工作效率，降低了分析成本，對(duì)蔬菜的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了依據(jù)。

[1]葛志榮.日本肯定列表制度-食品中農(nóng)業(yè)化學(xué)品殘留限量·藥品卷[M]北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2006

[2]農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所.農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)匯編[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2001

[3]林維宣.各國(guó)食品中農(nóng)藥獸藥殘留限量規(guī)定[M].大連:大連海事大學(xué)出版社,2002

[4]中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 20769-2008水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008

[5]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.NY/T 1379-2007蔬菜中334種農(nóng)藥多殘留的測(cè)定氣相色譜質(zhì)譜法和液相色譜質(zhì)譜法[S].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2007

[6]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.NY/T 1453-2007蔬菜及水果中多菌靈等16種農(nóng)藥殘留測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[S].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2007

[7]姚青.分散固相萃取_氣相色譜法同時(shí)測(cè)定黃瓜中的多種農(nóng)藥殘留[J].質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督研究,2011,3:29

[8]普繼瓊,唐海彥,喬紹偉,等.果蔬中有機(jī)磷農(nóng)殘氣相色譜法檢測(cè)技術(shù)研究[J].云南農(nóng)業(yè),2013,10:37

[9]施家威,李繼革,王玉飛,等.分散固相萃取-氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜分析蔬菜中112中農(nóng)藥殘留[J].色譜,2012,30(6):602

[10]徐娟,陳捷,林峰,等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定八種食品中甲霜靈[J].食品科學(xué),2010,31(4):175

[11]孫濤,劉河疆,胡開峰,等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定蔬菜中7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].分析試驗(yàn)室,2010,29(4): 87

Simultaneous Determination of 34 Kinds of Pesticide Residues in Vegetables by UPLC-MS/MS

YAN Li-zhi，ZHAO Yong-biao，LIU Ning，SONG Wei
（Pony Testing Technology Co.，Ltd.，Beijing10008，China）

An ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric method（UPLC-MS/MS）has been developed for the simultaneous determination of 34 kinds of pesticide residues and the metabolites in vegetables.The samples were extracted by acetonitrile and purificated with QuE ChERS.The UPLC analyses were performed on an acquity UPLC C18 column with gradient eluation，combined withionization in positive mode（ESI+）and multiple react ion monitoring（MRM）mode.The linear range was10 ng/m L-200 ng/m L，and the correlation coefficients were more than 0.993 6.The average recoveries of 34 kinds of pesticidesin spiked vegetables（10 and 30μg/kg）ranged from 68.7%to 116.8%and the relative standard deviation were not more than 12%.The detection limits were 0.001mg/kg-0.01mg/kg.The mult-i residue analysis method canmeet the requirements for imultaneous determinationof mult-i pesticides residues in vegetables.

Mult-i residue analysis；solid phase extraction；vegetables；ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.03.025

2014-06-05

晏利芝（1981—），女（漢），工程師，碩士研究生，主要從事食品及農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)工作。