齊莉莉，王 賀，梁文章，楊 帆，喬紅秀，張 楠

（1.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室，河北石家莊050017；2.河北中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院診斷學(xué)教研室，河北石家莊050200）

陳舊性鞭蟲封片標(biāo)本的制作及其形態(tài)學(xué)觀察

齊莉莉1，王 賀1，梁文章1，楊 帆1，喬紅秀2，張 楠2

（1.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室，河北石家莊050017；2.河北中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院診斷學(xué)教研室，河北石家莊050200）

鞭蟲屬；標(biāo)本制備；醫(yī)學(xué)檢驗科學(xué)

寄生蟲是一類致病性的低等真核生物，其所致寄生蟲病發(fā)病率和病死率均很高，嚴(yán)重影響著人類的健康，并制約著國家經(jīng)濟和社會的發(fā)展［1］。由于寄生蟲病的發(fā)病率已被認定為衡量一個地區(qū)社會經(jīng)濟文化發(fā)展的基本指標(biāo)之一，所以我國自新中國成立之初，即開展了寄生蟲病的普查和防治工作，效果顯著。經(jīng)過50多年的防治，至2008年底全國有血吸蟲流行的12個省市區(qū)中5個已阻斷傳播，全國血吸蟲病病例數(shù)已經(jīng)降至41.3萬；2007年經(jīng)過世界衛(wèi)生組織審核認可，中國成為全球第一個宣布消除絲蟲病的國家；我國計劃在2015年達到血吸蟲病的傳播控制或者傳播阻斷標(biāo)準(zhǔn)［2］。幾種重大寄生蟲病在我國得到了較大程度的控制，人體寄生蟲的感染率日趨下降，寄生蟲標(biāo)本的采集就變得較為困難。而目前，各醫(yī)學(xué)院校不斷擴大招生規(guī)模，導(dǎo)致寄生蟲學(xué)教研室用于實驗教學(xué)的封片標(biāo)本短缺現(xiàn)象日趨明顯，亟待補充。為解決這一矛盾，作者試圖用陳舊的寄生蟲大體標(biāo)本作為制備封片標(biāo)本的來源，現(xiàn)將保存于10%甲醛液中十余年的鞭蟲，制備成永久性封片的過程和效果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 河北醫(yī)科大學(xué)寄生蟲教學(xué)研室保存的鞭蟲大體標(biāo)本。

1.2 方法 軟化，取出固定于10%甲醛液中多年的鞭蟲，用蒸餾水沖洗數(shù)次后，放入甘油生理鹽水液中浸泡24 h；整壓，用細線扎牢蟲體兩端，蟲體前半部分重壓，再放入生理鹽水中繼續(xù)浸泡24 h；染色，將蟲體松綁，并用昆蟲針在蟲體表面不同部位扎數(shù)個小孔，再用蒸餾水反復(fù)沖洗，依次移至50%、60%、70%酒精中各30 min后，放入卡紅染液中染色12 h，取出蟲體放入1%鹽酸酒精中退色4～6 h，直至蟲體外觀呈粉紅色為止；脫水，依次經(jīng)80%、90%、95%、100%酒精，無水酒精與二甲苯1∶1溶液，脫水30 min；透明，放置于二甲苯培液中，透明10 min；封片，用中性樹膠封片并加蓋蓋玻片，顯微鏡下觀察。

2 結(jié) 果

經(jīng)過軟化、整壓、染色、脫水及封存標(biāo)本，蟲體平整，樹膠薄厚適度，外表美觀，呈粉紅色。低倍鏡下觀察蟲體形似馬鞭，前端細長，約占蟲體長的3／5，后端明顯粗大。表皮層無色透明，而內(nèi)部器官顏色鮮艷，結(jié)構(gòu)清晰?？梢姷郊氶L的咽管、包繞于咽管外的桿狀體（即呈串珠狀排列的桿細胞組成），消化管與生殖器官清晰可見且易于區(qū)分（圖1～3）。

圖1 毛首鞭形線蟲部分咽管（×100）

圖2 毛首鞭形線蟲部分消化系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)（×100）

圖3 毛首鞭形線蟲尾部（×100）

3 討 論

通常我們采用新鮮蟲體制作封片標(biāo)本［3］，經(jīng)過迅速清洗、整壓、固定、染色、脫水透明和封存等一系列制備過程。新鮮標(biāo)本組織具有彈性和韌性，在整壓過程中，不易損壞蟲體原有的形態(tài)結(jié)構(gòu)，可以把所要觀察某些結(jié)構(gòu)特征調(diào)整到理想狀態(tài)，蟲體也易于染色和脫水。而經(jīng)過甲醛液體固定的標(biāo)本則不同。

一般情況下，寄生蟲大體標(biāo)本保存于10%甲醛固定液內(nèi)，因甲醛是一種易變性、滲透力極強的還原劑，可使組織硬化，固定時間越久者越為明顯。鞭蟲雌蟲長35～50 mm，雄蟲長30～45 mm，是一種較小的線蟲，其前端細后端較粗，保存在甲醛中過久，蟲體變得既硬且脆，尤其是由細長的咽管構(gòu)成的蟲體前端，極易折斷。

在最初制作陳舊性鞭蟲封片標(biāo)本時，沒有經(jīng)過長時間浸泡、軟化及整壓，即直接進行染色，其結(jié)果往往出現(xiàn)脫水不徹底，蟲體內(nèi)部結(jié)構(gòu)模糊的現(xiàn)象，多見于蟲體前端。分析原因：①可能與鞭蟲自身形態(tài)結(jié)構(gòu)有關(guān)；②可能是因蟲體沒有經(jīng)過整壓，進而影響液體交換；③經(jīng)脫水、透明后蟲體變得更硬；④封片時，因蟲體不平整而使得樹膠過厚，影響觀察效果。經(jīng)過多次試驗，對于陳舊性蟲體進行永久性封片標(biāo)本制作時，需要經(jīng)過一定時間的浸泡，徹底清除甲醛殘留物，并在浸泡液中加入適量的甘油，使得蟲體組織充分軟化，不僅易于整壓，且易于染色和脫水，可收到與新鮮標(biāo)本同樣的效果。

人體寄生蟲學(xué)屬于病原生物學(xué)，是以形態(tài)學(xué)為主的醫(yī)學(xué)專業(yè)基礎(chǔ)課程，它是醫(yī)學(xué)生從基礎(chǔ)課學(xué)習(xí)過渡到臨床課學(xué)習(xí)的橋梁課程［4］，是一門理論和實踐聯(lián)系緊密的學(xué)科［5］。目前，傳統(tǒng)的寄生蟲學(xué)實驗教學(xué)主要通過觀察大體標(biāo)本和封片標(biāo)本識別寄生蟲的形態(tài)結(jié)構(gòu)，以加深和鞏固課堂所學(xué)內(nèi)容。利用本研究的試驗方法可以及時有效地準(zhǔn)備足夠的封片標(biāo)本，保證教學(xué)所需，同時可為學(xué)校節(jié)約購置標(biāo)本的費用，一舉兩得。

［1］ 高興鄭.醫(yī)學(xué)寄生蟲學(xué)［M］.3版.北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2008：3.

［2］ 沈繼龍，張進順.臨床寄生蟲學(xué)檢驗［M］.3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2012：2－15.

［3］ Ritchie AE.Simplified specimen preparation for electron microscopic studies of an intra-erythrocytic parasite，Anaplasma marginale［J］.Proc Soc Exp Biol Med，1962，110：532－545.

［4］ 楊樹國，李靜霞.談人體寄生蟲學(xué)實驗教學(xué)的整合與創(chuàng)新［J］.中國熱帶醫(yī)學(xué)，2009，9（6）：1176－1177.

［5］ 馬艷，汪琦，李娟蘭，等.人體寄生蟲學(xué)開放性實驗教學(xué)初探［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教育版，2010，12（2）：161－163.

（本文編輯：許卓文）

R383.14

B

1007-3205（2015）01-0097-03

2014－05－15；

2014－05－30

齊莉莉（1983－），女，河北保定人，河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院初級實驗師，醫(yī)學(xué)碩士，從事法醫(yī)昆蟲學(xué)研究。

10.3969／j.issn.1007-3205.2015.01.038