HPLC法測(cè)定克霉唑陰道片含量的方法研究

歷娜,于紅燕,姜愛(ài)霞

(山東藥品食品職業(yè)學(xué)院，山東 威海 264210)

摘要：目的建立克霉唑陰道片含量的高效液相色譜測(cè)定方法。方法采用大連依利C18色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-磷酸緩沖液(取磷酸5 mL，加50%甲醇溶液稀釋至1 000 mL，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.8)(40∶60)，流速：1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，進(jìn)樣量為10 μL。結(jié)果在該色譜條件下，克霉唑在濃度為0.025～0.2 mg·mL-1范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，回歸方程為：A=30 397C-3.353 83，r=0.999 9，重復(fù)性試驗(yàn)RSD為1.35%，平均回收率為96.67%(RSD=1.33%)。結(jié)論本法靈敏、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，能有效控制克霉唑陰道片的含量。

關(guān)鍵詞：克霉唑陰道片；高效液相色譜法；含量

作者簡(jiǎn)介：歷娜，女，研究方向：藥品質(zhì)量控制，E-mail:wjlinan@126.com

中圖分類(lèi)號(hào)：R927.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

StudyondeterminationofClotrimazoleVaginalTabletsbyHPLC

LI Na,YU Hong-yan,JIANG Ai-xia

(Shandong Drug and Food Vocational College,Weihai 264210,China)

Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of Clotrimazole Vaginal Tablets.MethodsDalian C18 chromatographic column was adopted with methanol-phosphate buffer (phosphate from 5 mL and 50% methanol solution was diluted to 1 000 mL，with three procedures for adjusting the pH value to 3.8)(40∶60) as mobile phase，and the flow rate was 1.0 mL·min-1，the detection wavelength was 230 nm，the injection volume was 10 μL.ResultsUnder the chromatographic conditions,the linear range of clotrimazole was 0.025～ 0.2 mg·mL-1，the regression equation was A=30 397C-3.353 83，r=0.999 9.The RSD of repeatability test was 1.35%，the average recovery rate was 96.67%(RSD=1.33%).ConclusionThis method was sensitive，simple，accurate，reproducible，and can effectively control the content of Clotrimazole Vaginal Tablets.

Keywords:ClotrimazoleVaginalTablets;HPLCmethod;Content

女性婦科炎癥發(fā)病率很高，且容易反復(fù)感染，因此婦科藥品市場(chǎng)的發(fā)展前景廣闊[1]。據(jù)衛(wèi)生部調(diào)查統(tǒng)計(jì)顯示，婦科病發(fā)病率高達(dá)75%，2010年我國(guó)婦科藥銷(xiāo)售額已突破100億元人民幣，預(yù)計(jì)今后將繼續(xù)呈增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)[2]?？嗣惯蚴且环N廣譜抗菌藥，對(duì)于多種真菌尤其是白色念珠菌具有較好抗菌作用，克霉唑陰道片最早是在1971年在德國(guó)首次上市，由德國(guó)的拜耳公司生產(chǎn)，目前國(guó)內(nèi)有19家企業(yè)獲得該藥品的批準(zhǔn)文號(hào)[3]。本課題主要研究采用高效液相色譜法對(duì)克霉唑陰道片進(jìn)行含量控制[4]。

1儀器與試藥

高效液相色譜儀；超聲波清洗器；MettlerAE240電子天平；甲醇為色譜純；水為純化水；其他試劑為分析純。

2溶液配制

2.1對(duì)照液的配制精取克霉唑?qū)φ掌芳s10mg，將其放置在100mL的量瓶中，再向量瓶中加入約30mL的甲醇，放在超聲波清洗器中超聲大約10min使對(duì)照液溶解后，再向量瓶中加流動(dòng)相定容至刻度，搖勻[5，6]。

2.2供試液的配制取20片，精密稱(chēng)定重量后，放在研缽中研細(xì)，再精稱(chēng)細(xì)粉適量(約相當(dāng)于克霉唑50mg)，按”2.1”項(xiàng)下方法制成100mL溶液，濾過(guò)后再精量續(xù)濾液2mL用流動(dòng)相稀釋至10mL，搖勻。

3方法學(xué)考察

3.1色譜條件固定相：C18柱，流動(dòng)相：甲醇-磷酸緩沖液(40∶60)，流速：1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)230nm，進(jìn)樣量為10μL[7]。

3.2線(xiàn)性關(guān)系試驗(yàn)精取對(duì)照品25mg，放置于50mL容量瓶中，加入約30mL的甲醇，放在超聲波清洗器中超聲使其溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。分別取上述溶液制得不同濃度的線(xiàn)性溶液進(jìn)行測(cè)定，求得回歸方程為：A=30 397C-3.353 83(n=5，r=0.999 9)。結(jié)論：克霉唑在濃度為0.025～0.2mg·mL-1范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

3.3精密度試驗(yàn)精取線(xiàn)性中間濃度的溶液10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積結(jié)果RSD=0.96%。結(jié)論：連續(xù)進(jìn)行6次測(cè)定，測(cè)得峰面積計(jì)算RSD值為0.96%。表明儀器精密度良好。

3.4溶液的穩(wěn)定性取分別供試液各10μL，注入色譜儀，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD=1.72%。結(jié)論：以室溫8h內(nèi)測(cè)得峰面積計(jì)算RSD值為1.72%。表明溶液穩(wěn)定性良好。

3.5加樣回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取克霉唑?qū)φ掌芳s10、12.5、15mg各3份，分別置25mL量瓶中，按處方比例分別加入輔料適量后，加甲醇適量，超聲使溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2mL置10mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。照“3.1”項(xiàng)下條件測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)論：采用本法測(cè)定含量，方法準(zhǔn)確可靠，回收率良好。

3.6重復(fù)性試驗(yàn)取本品30片，按“2.2”項(xiàng)下操作，各級(jí)取10 μL注入液相色譜儀，測(cè)定克霉唑含量，結(jié)果克霉唑平均含量為97.44%,RSD=1.35%。結(jié)論：結(jié)果表明試驗(yàn)操作重復(fù)性良好，該方法對(duì)本品進(jìn)行含量測(cè)定是可行的。

3.7檢測(cè)限[8，9]精密量取對(duì)照品溶液1 mL，至100 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，再依次逐級(jí)稀釋?zhuān)?0 μL注入液相色譜儀，當(dāng)其信噪比(S/N)為3∶1→5∶1時(shí)，克霉唑的最低檢測(cè)深度為0.07 ng·μL-1，即：最小檢出量為1.4 ng。

3.8含量測(cè)定分別精取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖(見(jiàn)圖1)。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

圖1　供試品色譜圖

批號(hào)上市樣品樣1樣2樣3含量(%)100.699.8100.1100.4

結(jié)論：結(jié)果表明本公司試制的3批克霉唑陰道片樣品含克霉唑均為標(biāo)示量的93.0%～107.0%，與上市樣品一致。

4討論

4.1采用本研究得到的配方，試制的藥品與上市樣品的含量一致，結(jié)果穩(wěn)定可靠，產(chǎn)品質(zhì)量合格。表明該配方可行，能生產(chǎn)出質(zhì)量符合要求的產(chǎn)品。

4.2采用C18色譜柱，甲醇-磷酸緩沖液(40∶60)為流動(dòng)相，試驗(yàn)結(jié)果表明本法建立的色譜條件系統(tǒng)適用性良好，可以快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)克霉唑陰道片的含量，方法準(zhǔn)確靈敏，簡(jiǎn)便易行，能很好地控制本品的質(zhì)量，同時(shí)也適用于本品中有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。

參考文獻(xiàn)：

[1] 楊寶麗，馬博，李少華.念珠菌性陰道炎的研究進(jìn)展[J].牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，26(1):55-59.

[2] 雷曉紅.念珠菌性陰道炎的病因及防治進(jìn)展[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2005，21(13):1664-1665.

[3] 黃艷芳.克霉唑?qū)θ焉锲谀钪榫躁幍姥椎呐R床研究[J].健康必讀雜志，2011，11(11):28.

[4] 袁玉和.高效液相色譜法克霉唑及其栓劑的含量[J].中國(guó)醫(yī)藥前沿，2013，8(4):83-84.

[5] 高松田，徐舉亞，周泉.硝酸益康唑克霉唑乳膏的制備及質(zhì)量控制[J].實(shí)用藥物與臨床，2014，17(1):74-76.

[6] 趙德勝，楊玉忠.HPLC法測(cè)定復(fù)方克霉唑軟膏中克霉唑的含量[J].中國(guó)藥業(yè)，1999，8(9):26.

[7] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版(二部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.

[8] 陸巖，王俊秋，余立.國(guó)內(nèi)外克霉唑陰道片質(zhì)量考察[J].首都醫(yī)藥，2010，17(12):68.

[9] 吳雨川，李桂紅，蘇德龍.紫外分光光度法測(cè)定克霉唑陰道片的含量[J].中國(guó)科技縱橫，2014，3:204.