中藥治療再生障礙性貧血作用機制研究進展

覃 瑤 黃 暢 林圣云

中藥治療再生障礙性貧血作用機制研究進展

覃 瑤 黃 暢 林圣云

再生障礙性貧血；中藥治療；作用機制

目前認為再生障礙性貧血（以下簡稱再障）是由T淋巴細胞介導的以造血系統(tǒng)為靶器官的自身免疫性疾病，以造血功能衰竭和外周血全血細胞減少為特征。按臨床表現(xiàn)、血象、骨髓象及預后，可分為重型再障和非重型再障。國內(nèi)學者將再障分為慢性型再障和急性型再障。近年來國內(nèi)外學者對中藥治療再障的實驗研究及臨床治療表明，中醫(yī)藥治療再障有明顯療效，對中藥治療再障的作用機制的研究已深入到免疫學、分子生物學、細胞凋亡、酶學等水平，現(xiàn)就此綜述。

1 促進造血干細胞增殖

再障患者造血干、祖細胞的體外集落數(shù)量和形成能力均明顯降低，骨髓中能調(diào)控早期造血的CD34+細胞顯著減少且功能存在缺陷[1]。田晨等[2]研究證明補腎益髓生血方（熟地、山萸肉、補骨脂、阿膠、炙黃芪、何首烏等）能明顯改善再障大鼠貧血癥狀，顯著升高造血祖細胞CFU-GM、CFU-E、BFU-E數(shù)目及集落形成能力。袁氏等[3]研究發(fā)現(xiàn)雪蓮多糖能通過刺激CD34+細胞的成熟與分化促進造血。

2 調(diào)節(jié)細胞免疫功能平衡

再障發(fā)病過程中CD8+T細胞增加，CD4+T細胞減少，CD4+/CD8+T淋巴細胞比值降低[4]。Th1細胞功能亢進而Th2細胞因子下降，Th1/Th2失衡。朱氏等[5]發(fā)現(xiàn)天升元口服液（人參、何首烏、杏仁、青皮、厚樸、乳香等）能降低免疫介導的再障小鼠的CD8+T淋巴細胞、Th1細胞數(shù)量，提高CD4+/CD8+比值、Th2細胞及GM-CSF數(shù)量，說明天升元口服液能通過改善T淋巴細胞亞群平衡及促進定向祖細胞的增殖和分化恢復造血。

3 改善骨髓造血微環(huán)境

3.1 脂肪細胞 脂肪細胞所分泌的許多細胞因子有抑制骨髓造血作用，動物模型證實骨髓過度脂肪化可抑制造血，骨髓內(nèi)間充質(zhì)干細胞（BMSC）向脂肪細胞過度分化可能是再障發(fā)病新的病理學機制之一[6]。程志安等[7]等研究發(fā)現(xiàn)，補腎陰、補腎陽和補腎益氣填精代表方六味地黃丸（熟地黃、山藥、山萸肉、澤瀉、茯苓、牡丹皮）、金匱腎氣丸（干地黃、山藥、山萸肉、澤瀉、茯苓、牡丹皮、桂枝、附子）和健骨二仙丸（龜版、鹿角膠、黨參、枸杞子、續(xù)斷、山藥）對BMSCs來源的脂肪細胞向成骨分化過程相關(guān)基因表達具有調(diào)控作用，均能不同程度抑制成脂分化相關(guān)基因表達。閆金松等[8]觀察復方中藥祛脂素（五靈脂、槐花米、山楂）對12例再障患者BMSCs向脂肪細胞分化的干預效果發(fā)現(xiàn)祛脂素組脂肪細胞陽性率、細胞內(nèi)脂肪細胞特異性標志PPAR γ mRNA、PPAR γ蛋白水平均明顯下降，提示祛脂素對AA患者BMSCs脂肪分化具有抑制作用，通過減少脂肪細胞數(shù)量形成、降低脂肪細胞特異性標志PPAR γ的轉(zhuǎn)錄及蛋白表達，促進造血功能恢復。

3.2 骨髓基質(zhì)細胞成纖維細胞生長因子（FGF）的表達

3.2.1 成纖維細胞生長因子6（FGF-6） 于麗娜等[9]發(fā)現(xiàn)補腎活髓通絡(luò)顆粒（生地、熟地、菟絲子、枸杞子、雞血藤、女貞子、旱蓮草、當歸、地龍、馬錢子、阿膠）治療30例非重型再障患者總有效率為76.67%，對照組為63.93%，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（孕＜0.01）。治療組血三系明顯改善且變化優(yōu)于對照組，F(xiàn)GF-6 mRNA表達水平提高，提示該方可能通過調(diào)節(jié)骨髓基質(zhì)細胞中FGF-6mRNA的表達水平來影響造血。

3.2.2 堿性成纖維細胞生長因子（bFGF） 施氏等[10]用補腎活髓顆粒（熟地黃、山茱萸、枸杞子、淫羊藿、巴戟天、鹿茸、人參、黃芪、丹參、雞血藤、白花蛇舌草、豬苓組成）治療61例慢性型再障患者后檢測發(fā)現(xiàn)試驗組總有效率75.0%，明顯優(yōu)于對照組58.7%，骨髓基質(zhì)細胞bFGF及bFGFR mRNA表達水平較正常對照組明顯升高，提示補腎活髓顆粒具有較好的臨床療效，通過對bFGF與bFGFR mRNA表達水平調(diào)節(jié)作用調(diào)控慢性型再障骨髓基質(zhì)細胞的增殖和定向分化。

3.3 成骨生長肽（OGP） OGP能促進造血細胞、骨髓間充質(zhì)干細胞增殖。于氏等[11]用補腎活髓通絡(luò)顆粒（生地、熟地、菟絲子、枸杞子、雞血藤、地龍、女貞子、旱蓮草、當歸、制馬錢子）隨證加減治療36例非重型再障患者，6個月后發(fā)現(xiàn)觀察組血清OGP表達水平治療前后分別為（43.12±35.49）pg/mL和（97.56±73.81）pg/mL，治療后OGP顯著升高，說明該顆粒通過提高OGP表達水平影響造血微環(huán)境。

3.4 骨髓間充質(zhì)干細胞（MSC） MSC是造血微環(huán)境的主要組成部分，參與造血過程。黃進、張進、徐世紅等[12-18]研究中藥單體、有效成分及含藥血清對細胞因子表達的影響，通過二苯乙烯苷、巴戟天多糖、10%黃芪多糖含藥血清、何首烏含藥血清、黃精含藥血清、菟絲子含藥血清誘導培養(yǎng)MSCs72h后，均可促進MSCs增殖，同時發(fā)現(xiàn)二苯乙烯苷和何首烏含藥血清明顯促進膜結(jié)合型與可溶性兩種SCF蛋白表達，促進可溶性SCF蛋白的分泌，與空白組、空白血清組相比有顯著性差異。研究提示二苯乙烯苷、巴戟天多糖、10%黃芪多糖含藥血清、何首烏含藥血清、黃精含藥血清、菟絲子含藥血清促進MSCs增殖，可能與促進細胞SCF mRNA、膜結(jié)合型與可溶性兩種SCF蛋白表達有關(guān)。徐世紅等[18]實驗發(fā)現(xiàn)桃紅四物湯含藥血清能明顯促進外源性MSCs增殖。

4 調(diào)節(jié)細胞因子及轉(zhuǎn)錄因子

4.1 正向調(diào)控因子 侯展文等[19]觀察益腎化瘀方（熟地、阿膠、菟絲子、淫羊藿、補骨脂、丹參、桃仁、仙鶴草、三七、炙甘草）對再障大鼠治療后發(fā)現(xiàn)，大鼠骨髓病理組織學改變較對照組有明顯改善，外周血5-羥色胺濃度、CD4+細胞亞群、CD4+/CD8+比值較對照組有所升高，提示該方藥可能通過促進外周血5-羥色胺分泌水平改善造血功能。秦蘭等[20]實驗證明補腎填精方（鹿角膠、熟地黃、肉蓯蓉、當歸、牛膝、陳皮）能明顯改善再障大鼠外周血血三系數(shù)量，并升高細胞因子IL-11及血清中EPO含量，提示補腎填精方通過刺激正向造血調(diào)控因子促進造血恢復。

4.2 負向調(diào)控因子 曾英堅[21]對18例慢性型再障患者在對照組的基礎(chǔ)上加用愈障生血湯（淫羊藿、補骨脂、鹿角膠、龜板膠、黃精、黃芪、雞血藤、當歸、砂仁、黨參、炒白術(shù)、三七、甘草），6個月后發(fā)現(xiàn)治療組總有效率88.9%，與對照組60.0%有顯著差異，治療組貧血癥狀明顯改善，血小板輸注總量及轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）明顯降低，提示該方可通過降低負性調(diào)控因子TGF-β1水平促進造血恢復，減少輸血依賴。劉江等[22]給予再障大鼠補腎填精中藥（鹿角膠、熟地黃、肉蓯蓉、當歸、懷牛膝、陳皮等）灌胃，4周后檢測發(fā)現(xiàn)中藥組外周血白細胞、血小板、網(wǎng)織紅細胞明顯升高，IL-2、TNF-α含量降低，說明補腎填精方可能通過拮抗造血負調(diào)控因子釋放改善骨髓造血功能。翟春燕等[23]實驗觀察發(fā)現(xiàn)再障患者經(jīng)不同濃度馬錢子堿治療后T淋巴細胞分泌TNF-α、IFN-γ水平均明顯降低，且呈劑量關(guān)系。

5 調(diào)節(jié)信號通路

5.1 EPO/EPOR信號途徑 董玢等[24]予再障模型小鼠補腎生血解毒方（龜板膠、鹿角膠、人參、枸杞子、黃芪、當歸、黃連）灌胃，檢測發(fā)現(xiàn)該方可明顯提高小鼠外周血細胞參數(shù)，緩解貧血癥狀，明顯增加外周血EPO含量和骨髓細胞中紅細胞生成素受體（EPOR）基因的表達，提示該方可能通過提高EPO活性，激活EPO/EPOR信號途徑，誘導相關(guān)基因表達恢復骨髓造血功能。

5.2 MAPK/ERK信號傳導途徑 Wang等[25]觀察補髓生血顆粒（地黃、山萸肉、枸杞子、淫羊藿、巴戟天、鹿茸、人參、黃芪、丹參、雞血藤、白花蛇舌草、豬苓）對30例非重型再障患者的臨床療效和研究，6個月后檢測酶在MAPK/ERK信號傳導途徑的表達，與健康者對比發(fā)現(xiàn)治療組患者有效率為80%，WBCs、HB顯著升高，ERK1/2、ERK2、p-ERK5蛋白表達明顯升高，血清中與信號轉(zhuǎn)導通路有關(guān)的酶的表達有不同程度的改變。

6 調(diào)節(jié)端粒酶活性

約1/3再障患者存在端粒縮短，一些患者端?？s短與端粒酶RNA（TERC）和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（TERT）突變有關(guān)，這些突變能降低端粒酶活性、加快端?？s短并降低造血干細胞的增殖能力[26]。王氏等[27]發(fā)現(xiàn)，腎陽虛型患者TERT mRNA表達水平較腎陰虛型、腎陰陽兩虛型患者明顯升高。腎陽虛型患者經(jīng)用溫補腎陽藥（鹿角膠、淫羊藿、巴戟天、菟絲子等）后，癥狀迅速減輕，血象、骨髓象也隨之明顯好轉(zhuǎn)，溫補腎陽中藥有類雄激素的作用，雄激素在體內(nèi)可芳香化轉(zhuǎn)化為雌激素，與端粒酶基因啟動子上的TERT啟動因子受體相結(jié)合發(fā)生作用，從而增加端粒酶活性，提高TERT基因的表達，恢復骨髓造血和外周血細胞數(shù)，提示溫腎壯陽中藥可能通過增加端粒酶活性來刺激造血[28]。Lu等[29]用多種中草藥提取液天升元1號（人參、何首烏、杏仁、青皮、厚樸、乳香等）研究證明，天升元1號刺激增加了端粒酶的活性和端粒的長度，且顯著增加紅細胞、血紅蛋白、血小板、CD34+細胞計數(shù)，減少脂肪浸潤，呈劑量依賴性，提示該提取液通過提高端?；盍Γ黾佣肆ｉL度發(fā)揮功能，刺激造血干細胞增殖。

7 結(jié)語

中醫(yī)藥對治療再障，提高再障患者的生存質(zhì)量、緩解率均具良好療效。存在問題:中藥成分復雜，其有效機制、作用具體靶點及靶點之間的相互影響尚不明確；研究中藥復方居多，單味中藥研究較少見，從常用方藥中提取中藥有效成分進行治療值得探索；實驗造模方法各有不同，動物造模時間長，方法復雜，實驗樣本量較少，可重復性差，影響研究結(jié)果的可信度及論證強度，如何進行更方便簡單的造模方法及提供多樣本的研究值得研究；關(guān)于針灸、穴位治療再障機制及中藥治療對器官的影響，副作用等尚無深入研究。

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（收稿:2015-12-07 修回:2016-05-04）

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