柿葉藥材的鑒別及總黃酮提取工藝探索

陳 吼， 龍鳳來， 李黔蜀

(楊凌職業(yè)技術(shù)學院， 陜西 楊凌 712100)

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柿葉藥材的鑒別及總黃酮提取工藝探索

陳 吼， 龍鳳來， 李黔蜀

(楊凌職業(yè)技術(shù)學院， 陜西 楊凌 712100)

摘要：目的：優(yōu)選柿葉總黃酮的提取工藝。方法：采用乙醇加熱回流提取法進行正交試驗。結(jié)果：確定柿葉中總黃酮 的最佳提取條件為乙醇濃度為70%，料液比為1∶40，回流提取時間為1 h，提取兩次。結(jié)論：A3B2C2D2條件下柿葉總黃酮提取效果理想，為柿葉藥材的臨床應(yīng)用及市場開發(fā)提供了實驗基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：柿葉； 總黃酮； 提取

柿葉入藥始見于明《滇南本草》記載“經(jīng)霜葉敷臁瘡”,《本草再新》記載用于“治咳嗽吐血,止渴生津”。主要用于止血、降壓、治療冠心病、心絞痛及胃潰瘍出血、肺結(jié)核出血、功能性子宮出血等內(nèi)臟出血病癥[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明,柿葉還具有抗氧化、抑制特異性皮炎、增強免疫功能、減肥降脂、抗癌、抗菌等作用[2]。柿葉化學成分較復(fù)雜,主要含有黃酮、三萜、酚類等化合物[3]。國內(nèi)外研究表明,以柿葉為原料制取的柿葉制劑、柿葉茶、柿葉提取物及柿葉黃酮苷具有清熱解毒、清血利尿、抑菌、止血、降血脂、降低膽固醇、抑制腫瘤生長等多方面的生理功能[4-6]。

查閱相關(guān)文獻資料，柿葉的主要有效成分是黃酮類化合物。本實驗經(jīng)過單因素考察和正交試驗分析，最終得到柿葉的總黃酮可行提取工藝。

1儀器和試劑

WFH-201B紫外透射反射儀； UV-1102；RE-3000旋蒸器；KH-400KDE超聲清洗器；乙醇(分析純)；G型薄層層析硅膠(青島海洋化工有限公司)；槲皮素標準品(中國藥品生物制品檢定所，批號：10081-200406)及山奈酚標品(110861-200808)； 柿葉采集自陜西關(guān)中地區(qū)，經(jīng)鑒定為柿樹屬植物柿的干燥葉。

2方法與結(jié)果

2.1原藥材的鑒定

精密稱取柿葉藥材(過 40 目篩)2.0 g，照10版藥典薄層色譜法取供試藥液(標為1、3)和槲皮素標品(2、4)、山奈酚(5)；以乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)溶液為展開劑,365 nm紫外檢測，結(jié)果與對照品顯相同顏色，但斑點不清晰。以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶3∶1)溶液為展開，斑點清晰可見如圖1。

2.2工藝參數(shù)考察

2.2.1供試品溶液的制備取過 40 目篩的柿葉藥材粉末2.0 g，按表3設(shè)計回流提取，合并濾過，濃縮，加乙醇定容至 50 mL量瓶中作為供試品備用。

圖1　柿葉藥材的鑒定

2.2.2對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品 4.9 mg于 10 mL 量瓶加乙醇稀釋至刻度搖勻，備用。

2.2.3標準曲線制作精密吸取對照品0,0.3，0.6，0.9，1.2，1.5 mL，分置于10 mL 量瓶，加蒸餾水 4 mL，5% NaNO20.3 mL,混勻，放置 6 min，加10% Al(NO3)30.3 mL,混勻，放置 6 min，再加4% NaOH 4.0 mL,加水至刻度搖勻，放置 15 min，在 510 nm 測吸收度 A。以對照品含量為橫坐標， A 為縱坐標，繪制標準曲線，計算得回歸方程為A=0.110C+0.003，r2=0.998，結(jié)果如圖2。

圖2　槲皮素標準曲線

2.2.4L9(34)正交試驗采用四因素三水平的正交試驗對乙醇濃度(A)、溶劑用量(B)、提取次數(shù)(C)、提取時間(D)進行考察，設(shè)計方案如表1；實驗結(jié)果如表2、3。

表1　正交試驗因素水平表

2.3結(jié)論與討論

從方差分析和直觀分析可以看出，提取次數(shù)對柿葉總黃酮有效部位影響最大，各因素最佳組合為A3B2C2D2，即乙醇濃度70%，加40倍量，提取1 h,2次。本實驗預(yù)考察了提取方法，選擇超聲提取、加熱回流提取、索式提取，結(jié)果加熱回流提取法提取率明顯高于其他方法。經(jīng)驗證，正交實驗確定的最佳提取工藝穩(wěn)定可行，此工藝僅為實驗室小試階段，但可為實際工業(yè)生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

表2　直觀分析表

表3　方差分析表

參考文獻：

[1]Jiang W K. Persimmon leaves-resource with huge exploiturepotential [J].J Guiyang Coll Tradit Chin Med, 1997,19(2):52.

[2]張秋燕,王 亮,肖 峰,等.柿葉藥理作用研究進展[J].河北職工醫(yī)學院學報, 2004,21(3):39-40.

[3]Mallavadhani U V, Panda A K, Rao Y R. Pharmocology andchemotaxonomy ofDiospyros[J].Phytochemistry, 1998,49(4):901-951.

[4]吳小南,汪家梨.柿葉茶抗氧化、降血脂保健作用的初步實驗[J].食品科學,1998,19(11):39-41.

[5]楊建雄,原江鋒,李發(fā)榮.柿葉黃酮的體外抗氧化作用研究[J].營養(yǎng)學報, 2003，(2):215-217.

[6]歐陽平,貝偉劍,賴文巖,等.柿葉黃酮對缺氧復(fù)氧以及晚期糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)的乳鼠心肌細胞凋亡的影響[J].第一軍醫(yī)大學學報, 2003, (7):680-682.

Identification of the Persimmon Leaf and Exploration on

Its Technology of Extracting Total Flavonoids

CHEN Hou, LONG Feng-lai, LI Qian-shu

(Yangling Vocational and Technical College, Yangling, Shaanxi 712100, China)

Abstract:In order to optimize the technology of extracting persimmon leaf total flavonoids, the orthogonal experiment was conducted through the method of ethanol heating reflux extraction. The result shows the best extraction condition of total flavonoids of persimmon leaves is that the methanol concentration is 70%, the ratio of material liquid is 1∶40, reflux extraction time is 1 h, extraction for two times. It is concluded that under the condition of the A3B2C2D2，the experiment effect of persimmon leaf flavonoids extraction is ideal, which provides the experimental basis for the clinical application of persimmon leaf as medicinal materials and market development.

Key words:persimmon leaves； total flavonoids； extracting

中圖分類號：TQ461

文獻標識碼：A

文章編號：1671-9131(2015)04-0030-02

作者簡介：陳 吼(1983-)，陜西永壽人，講師。主要從事中藥制藥技術(shù)的教學與研究工作。