王彩霞

(寧夏醫(yī)科大學(xué)，寧夏　銀川　750004)

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枸杞多糖對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠皮膚的影響

王彩霞

(寧夏醫(yī)科大學(xué)，寧夏銀川750004)

〔摘要〕目的探討枸杞多糖的抗皮膚衰老作用。方法健康昆明種雌性小鼠50只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、衰老模型組、枸杞多糖低、中、高劑量組，每組10只。除正常對(duì)照組外，其余各組均每日頸背部皮下注射D-半乳糖連續(xù)42 d，建立衰老模型。給藥組同時(shí)給予不同劑量的枸杞多糖。42 d后測(cè)定小鼠皮膚組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性，脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量，以及皮膚羥脯氨酸(HYP)含量。結(jié)果枸杞多糖可增強(qiáng)衰老模型小鼠皮膚組織SOD、GSH-Px活力，降低MDA含量，提高HYP含量。結(jié)論枸杞多糖具有延緩D-半乳糖致小鼠皮膚衰老的作用。

〔關(guān)鍵詞〕枸杞多糖；D-半乳糖；皮膚衰老

第一作者：王彩霞(1978-)，女，副教授，碩士，主要從事中醫(yī)藥抗衰老研究。

皮膚衰老是機(jī)體衰老的一個(gè)重要組成部分，不僅有損于美容，且與許多皮膚病如脂溢性角化病、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌的發(fā)生也有著病因?qū)W的關(guān)系。因此，預(yù)防和延緩皮膚衰老已成為科學(xué)研究的熱點(diǎn)之一〔1〕。寧夏枸杞(L)是我國(guó)傳統(tǒng)“藥食同源”的道地藥材，也是回族醫(yī)藥的代表藥物，其有效成分枸杞多糖(LBP)因具有多種生理活性越來(lái)越受到人們的關(guān)注。現(xiàn)代藥理研究證實(shí)，LBP既又具有豐富的生物學(xué)活性，又無(wú)毒副作用，具有調(diào)節(jié)免疫、降血脂、降血壓、保肝、防輻射、抗腫瘤、抗疲勞、延緩衰老等廣泛的藥理學(xué)作用〔2〕。無(wú)論在保健類食品開(kāi)發(fā)還是臨床應(yīng)用方面都有著廣闊的前景〔3〕。本研究擬采用D-半乳糖頸背部注射小鼠建立亞急性衰老模型，探討衰老模型小鼠皮膚組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性和羥脯氨酸(HYP)、丙二醛(MDA)含量變化，從而探究LBP對(duì)D-半乳糖致衰老模型小鼠皮膚的抗衰老作用及機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組健康清潔級(jí)昆明種小鼠50只，1月齡，雌性，體重(20±2)g，隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組、衰老模型組、LBP低、中、高劑量組，每組10只。均購(gòu)自寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2藥品、試劑與儀器枸杞多糖由銀川市農(nóng)科院提供，批號(hào)20111009；D-半乳糖為上海試劑二廠產(chǎn)品，批號(hào)20110916。SOD試劑盒批號(hào)20110803，GSH-Px試劑盒批號(hào)20110810，MDA試劑盒批號(hào)20110920，HYP試劑盒、批號(hào)20110825，均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。測(cè)定儀器為722分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠；DY89-Ⅱ電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)，上海將來(lái)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；TDL-5-A型離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；DK-420S型三用恒溫水箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；BLG10電子秤，上海精科天美科學(xué)儀器有限公司。ELx808全自動(dòng)酶標(biāo)儀，美國(guó)佰騰。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1動(dòng)物模型的制備及取材衰老模型組和LBP低、中、高劑量組每日頸背部皮下注射D-半乳糖1 000 mg/kg，建立小鼠亞急性衰老模型。造模的同時(shí)給藥：①正常對(duì)照組：頸背部皮下注射生理鹽水0.2 ml，同時(shí)灌服生理鹽水0.1 ml/10 g。②衰老模型組：每日頸背部皮下注射D-半乳糖1 000 mg/kg，同時(shí)灌服生理鹽水0.1ml/10g。③LBP低、中、高劑量組：每組每日頸背部皮下注射D-半乳糖1 000 mg/kg，同時(shí)灌服LBP 5、10、20 mg·kg-1·d-1。給藥容積20 ml/kg。以上操作每日1次，無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，各組均連續(xù)給藥42 d。42 d后，小鼠斷頸處死，取背部?jī)杉珉尾恐g皮膚(去毛)，面積為3 cm×3 cm，并迅速將取下的皮膚冰凍保存，擬作皮膚組織勻漿。

1.3.210%皮膚勻漿的制備及指標(biāo)測(cè)定取脫毛后背部皮膚組織約0.5 g，在預(yù)冷生理鹽水中漂洗，除去血液、皮下脂肪及其他結(jié)締組織，用濾紙拭干，稱重，量筒量取該組織塊9倍重量的預(yù)冷生理鹽水，先取2/3量倒入裝有組織塊的燒杯中，用眼科小剪剪碎組織塊，將剪碎的組織倒入勻漿管中，將剩余1/3生理鹽水沖洗燒杯壁，用組織勻漿機(jī)制成10%組織勻漿。漿液以3 500 r/min的速度離心20 min，取上清液按試劑盒說(shuō)明測(cè)定并計(jì)算SOD、GSH-Px活性，MDA及HYP含量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0軟件行方差分析。

2結(jié)果

2.1對(duì)自然衰老小鼠皮膚組織SOD活性、MDA含量的影響與正常對(duì)照組比較，衰老模型組小鼠皮膚組織SOD活性降低(P<0.01)，MDA含量升高(P<0.01)。與衰老模型組比較，LBP低、中、高劑量組小鼠皮膚SOD活性明顯升高(P<0.01)，MDA含量降低(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1　LBP對(duì)小鼠皮膚組織SOD活性、MDA

與正常對(duì)照組比較：1)P<0.01；與衰老模型組比較：2)P<0.05，3)P<0.01，下表同

2.2對(duì)皮膚組織GSH-Px活性與HYP含量的影響與正常對(duì)照組比較，衰老模型組小鼠皮膚組織GSH-Px活性降低(P<0.01)，HYP含量降低(P<0.01)。與衰老模型組比較，LBP低、中、高劑量組小鼠皮膚GSH-Px活性明顯升高(P<0.05，P<0.01)，HYP含量明顯升高(P<0.05，P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2　LBP對(duì)小鼠皮膚組織GSH-Px活性與HYP

3討論

衰老自由基學(xué)說(shuō)認(rèn)為，機(jī)體的自由基主要通過(guò)內(nèi)源和外源兩個(gè)途徑產(chǎn)生，同時(shí)又具備有效的自由基清除系統(tǒng)，以維持體內(nèi)自由基的正常水平〔4〕。但隨著年齡的增長(zhǎng)，自由基代謝平衡失調(diào)，機(jī)體對(duì)自由基的防御能力下降，導(dǎo)致自由基產(chǎn)生蓄積。過(guò)量的自由基可攻擊細(xì)胞膜、核酸、蛋白質(zhì)和酶類等生物大分子，引起細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層中的不飽和脂肪酸產(chǎn)生過(guò)氧化反應(yīng)〔5，6〕，形成多種脂質(zhì)過(guò)氧化物及其代謝產(chǎn)物MDA。MDA是極活潑的交聯(lián)劑，它能與蛋白質(zhì)、核算等交聯(lián)聚合，生成無(wú)活性的脂褐質(zhì)(LF)，沉積在皮膚結(jié)締組織中形成老年斑〔7〕。因此，MDA可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接地反映出細(xì)胞的受損程度〔8〕。而SOD是最有效的抗氧化劑和自由基清除劑，是人體不可缺少、也是目前為止發(fā)現(xiàn)的唯一以自由基為底物的酶，在維持生物機(jī)體內(nèi)自由基產(chǎn)生與清除的動(dòng)態(tài)平衡中起著極其重要的作用，是機(jī)體內(nèi)對(duì)抗自由基的第一道防線〔4〕。因此其活力的高低間接反映機(jī)體清除氧自由基的能力。GSH-Px 是一種含硒的水溶性四聚體蛋白酶，存在于細(xì)胞線粒體、胞質(zhì)內(nèi)以及生物膜上〔9，10〕，能將H2O2分解成H2O和O2，減輕或阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的一級(jí)引發(fā)作用，從而保護(hù)細(xì)胞免受自由基損傷〔5〕，起到延緩機(jī)體衰老的作用。測(cè)定GSH-Px的活力可以間接反映細(xì)胞的完整程度。皮膚中富含膠原蛋白，而HYP是構(gòu)成膠原蛋白分子的主要成分，約占膠原蛋白全部氨基酸殘基的13.4%〔11〕。HYP可穩(wěn)定膠原蛋白的結(jié)構(gòu)，從而增加皮膚中膠原纖維的韌性，修復(fù)受損皮膚組織，增強(qiáng)皮膚彈性，使皮膚光滑、舒展，健康靚麗〔12〕。但隨著年齡的增長(zhǎng)，蛋白合成逐漸減少，又由于蛋白交聯(lián)、降解，使總膠原含量減少，從而使皮膚出現(xiàn)松弛，彈性降低等。因此，HYP的含量能夠間接地反映皮膚老化的程度。測(cè)定皮膚中HYP含量的變化可作為判定受試動(dòng)物皮膚衰老程度一個(gè)敏感而特殊的指標(biāo)〔13〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示膠原蛋白量減少，致皮膚真皮層明顯變薄，纖維成分減少且排列疏松，皮膚處于衰老狀態(tài)。LBP低、中、高劑量均可明顯提高D-半乳糖衰老模型小鼠皮膚組織SOD、GSH-Px活性和HYP含量，顯著降低皮膚組織MDA含量，LBP能從一定程度上加速清除衰老模型小鼠體內(nèi)氧自由基及其代謝產(chǎn)物，增強(qiáng)抗氧化酶活性，提高抗氧化能力，維持體內(nèi)自由基和抗氧化酶之間的動(dòng)態(tài)平衡，減輕或抑制脂質(zhì)過(guò)氧化損傷,從而達(dá)到延緩衰老的目的。

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〔2014-02-19修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢(mèng)園)

〔中圖分類號(hào)〕R229

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2015)22-6360-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.22.019