老年非小細(xì)胞肺癌組織中表皮生長因子受體基因突變情況及其與切割修復(fù)交叉互補基因1表達(dá)的相關(guān)性

張利誠

(武警浙江省總隊嘉興醫(yī)院呼吸科，浙江　嘉興　314000)

?

老年非小細(xì)胞肺癌組織中表皮生長因子受體基因突變情況及其與切割修復(fù)交叉互補基因1表達(dá)的相關(guān)性

張利誠

(武警浙江省總隊嘉興醫(yī)院呼吸科，浙江嘉興314000)

目的探討老年非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織中表皮生長因子受體(EGFR)基因突變情況及其與切割修復(fù)交叉互補基因(ERCC)1表達(dá)的關(guān)系。方法選擇老年NSCLC患者150例作為研究對象，采用PCR技術(shù)檢測老年NSCLC組織中EGFR基因突變和ERCC1基因表達(dá)水平。結(jié)果150例老年NSCLC組織中EGFR基因突變62例，突變率為41.3%，外顯子21和外顯子19突變率分別為18.7%和18.0%。老年NSCLC組織中，男性EGFR基因突變率低于女性(P<0.05)，吸煙患者EGFR基因突變率低于非吸煙患者(P<0.05)，腺癌患者EGFR基因突變率高于非腺癌患者(P<0.05)，有腫瘤家族史患者EGFR基因突變率高于無腫瘤家族史患者(P<0.05)，不同TNM分期患者EGFR基因突變率比較有差異(P<0.05)。EGFR基因突變型ERCC1高表達(dá)率低于EGFR基因野生型(P<0.05)。結(jié)論老年NSCLC患者EGFR基因突變以外顯子21和外顯子19突變?yōu)橹鳎詣e、吸煙、腺癌、腫瘤家族史、TNM分期為EGFR基因突變的影響因素，EGFR基因突變者ERCC1基因表達(dá)量低。

非小細(xì)胞肺癌；表皮生長因子受體基因；基因突變

手術(shù)治療是非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)最有效的治療方法，但有部分肺癌患者發(fā)現(xiàn)時已為肺癌晚期，或者已經(jīng)有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，使其失去了手術(shù)機會，而化療和放療的治療效果有限，分子靶向藥物的出現(xiàn)為NSCLC的治療提供了新的治療方法，表皮生長因子受體(EGFR)-酪氨酸激酶抑制劑(TKI)類藥物對NSCLC的治療作用越來越受到關(guān)注，EGFR-TKI類藥物治療是否有效的基礎(chǔ)為EGFR基因突變，在治療之前進(jìn)行EGFR基因突變檢測具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)NSCLC組織中存在EGFR基因突變情況〔1～3〕，EGFR基因突變和切割修復(fù)交叉互補基因(ERCC)1基因水平有一定關(guān)系〔4～6〕。本文對老年NSCLC組織中EGFR基因突變情況進(jìn)行研究，并探討其影響因素及其與ERCC1表達(dá)水平的相關(guān)性。

1　資料與方法

1.1研究對象選擇2010年1月至2013年12月我院65歲以上經(jīng)病理證實的老年NSCLC患者150例，年齡(74.25±3.28)歲，男61例，女89例，吸煙77例，腺癌104例，有腫瘤家族史45例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移64例，TNM分期Ⅰ期71例、Ⅱ期42例、Ⅲ期37例。所有患者簽署知情同意書，經(jīng)我院倫理委員會同意；所有患者手術(shù)前均未進(jìn)行放療或者化療治療。

1.2主要試劑和儀器人EGFR基因突變檢測試劑盒(美國Sigma公司)，ERCC1基因表達(dá)量檢測試劑盒、DNA提取試劑、RNA提取試劑(Qiagen公司)等；熒光定量PCR儀(Stratagene公司)，紫外線分光光度計(Thermo公司)等。

1.3病史及標(biāo)本收集收集患者的年齡、性別、吸煙史、腫瘤家族史、肺癌類型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床資料。將150例手術(shù)患者術(shù)中切除的肺癌組織標(biāo)本經(jīng)甲醛溶液固定，送檢驗科，石蠟包埋備用。

1.4EGFR基因突變檢測將肺癌組織石蠟包塊切成厚5 μm切片，提取DNA，提取DNA的純度和濃度用紫外分光光度計進(jìn)行測量，將DNA濃度稀釋為10 ng/μl。根據(jù)EGFR基因突變試劑盒說明書步驟檢測肺癌組織DNA中EGFR基因突變情況，經(jīng)PCR擴增后，收集熒光信號，熒光定量PCR分析軟件對結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果判定：老年NSCLC組織中檢測到突變位點有擴增，且CT值≤35時為陽性；35

1.5ERCC1基因表達(dá)檢測將老年NSCLC組織切片切成厚10 μm切片，常規(guī)進(jìn)行RNA提取。將提取得到的老年非小細(xì)胞肺癌組織RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，加入ERCC1基因表達(dá)量檢測試劑盒中ERCC1基因表達(dá)量檢測試劑，并根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行熒光定量擴增，收集熒光信號，在PCR儀中輸出ERCC1基因表達(dá)量。以β-actin基因為內(nèi)參，△Ct>4.3為ERCC1基因高表達(dá)，△Ct≤4.3為ERCC1基因低表達(dá)。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS20.0軟件進(jìn)行t及χ2檢驗。

2　結(jié)　果

2.1老年NSCLC組織中EGFR基因突變情況150例老年非小細(xì)胞肺癌組織中EGFR基因突變62例，突變率為41.3%，其中外顯子21和外顯子19突變率比較高，突變率分別為18.7%和18.0%，外顯子18、外顯子20和雙突變的突變率比較低，分別為2.7%、1.3%和2.0%。

2.2老年非小細(xì)胞肺癌組織中EGFR基因突變的影響因素老年NSCLC組織中，男性EGFR基因突變率低于女性(29.2% vs 59.0%,χ2=13.257,P=0.000)，吸煙患者EGFR基因突變率低于非吸煙患者(31.2% vs 52.1%,χ2=6.741,P=0.009，P<0.05)，腺癌患者EGFR基因突變率高于非腺癌患者(51.9% vs 17.4%,χ2=15.684,P=0.000)，有腫瘤家族史患者EGFR基因突變率高于無腫瘤家族史患者(64.4% vs 31.4%,χ2=14.160,P=0.000)，不同TNM分期患者EGFR基因突變率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期分別為54.9%、33.3%、24.3%，χ2=9.573,P=0.008)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者EGFR基因突變率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(37.5% vs 44.2%,χ2=0.676,P=0.411)。

2.3EGFR基因突變型和野生型ERCC1表達(dá)情況EGFR基因突變型ERCC1基因表達(dá)量低于EGFR基因野生型(21.36±9.75 vs 49.21±12.42,t=6.365,P=0.003)。EGFR基因突變型ERCC1高表達(dá)率低于EGFR基因野生型〔30.6%(19/62) vs 60.2%(53/88)，χ2=12.753,P=0.000〕。

3　討　論

EGFR基因由28個外顯子組成，長約118 kb，EGFR基因的外顯子18～24是編碼酪氨酸激酶功能的區(qū)域，這些區(qū)域存在一定的基因突變，這些基因突變區(qū)域和EGFR-TKI類藥物的治療效果關(guān)系密切，其中EGFR基因最常見的突變是外顯子21和外顯子19的突變〔7，8〕。鄭軍等〔9〕發(fā)現(xiàn)214例NSCLC組織中EGFR基因突變98例，突變率為45.8%，其中外顯子19的突變率為22.0%，外顯子21的突變率為20.6%。本研究也發(fā)現(xiàn)老年NSCLC組織中外顯子21和外顯子19的突變率比較高，和鄭軍等〔9〕的研究結(jié)果也一致，表明老年NSCLC和非老年NSCLC患者肺癌組織中EGFR基因突變情況相似。

因EGFR-TKI類藥物對非小細(xì)胞肺癌的治療效果和EGFR基因突變有關(guān)，因此研究EGFR基因突變的影響因素具有重要意義。近年來不少學(xué)者對NSCLC患者肺癌組織中EGFR基因突變的影響因素進(jìn)行研究，但研究結(jié)果不完全一致，不少研究發(fā)現(xiàn)NSCLC患者中女性患者、非吸煙者、腺癌患者EGFR基因突變率比較高〔9～11〕，鄭軍等〔9〕研究發(fā)現(xiàn)NSCLC患者中女性患者的EGFR基因突變率為57.0%，男性為36.0%，女性患者的EGFR基因突變率高于男性患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移非小細(xì)胞肺癌患者的EGFR基因突變率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，而EGFR基因突變率和NSCLC患者的臨床分期、腫瘤分級以及患者的年齡無顯著相關(guān)性。王殿軍等〔11〕研究認(rèn)為NSCLC患者EGFR基因突變和患者的性別、年齡、腺癌、分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性，吸煙患者的EGFR基因突變率高于非吸煙患者。各研究結(jié)果之間存在差異可能和病例選擇例數(shù)少有關(guān)，但大多數(shù)研究認(rèn)為女性、腺癌和非吸煙患者的EGFR基因突變率較男性、非腺癌、吸煙患者的EGFR基因突變率高。

ERCC1基因在DNA損傷修復(fù)和剪切方面具有重要作用，和鉑類化療藥物的治療效果有一定關(guān)系，近年來不少研究發(fā)現(xiàn)ERCC1基因水平和EGFR基因突變有關(guān)，EGFR基因突變非小細(xì)胞肺癌患者的ERCC1基因表達(dá)量較EGFR基因野生型者低〔12～14〕。本研究表明老年NSCLC患者EGFR基因突變和ERCC1基因之間存在一定關(guān)系，因此考慮EGFR突變型老年NSCLC患者可能對鉑類化療藥物比較敏感，鉑類化療藥物對EGFR突變型老年NSCLC患者的治療效果可能比較好。

1Kim EJ，Jeong JH，Bae S，etal.mTOR inhibitors radiosensitize PTEN-deficient non-small-cell lung cancer cells harboring an EGFR activating mutation by inducing autophagy〔J〕.J Cell Biochem，2013；114(6)：1248-56.

2成志強，王曉玫，賀黎升，等.應(yīng)用特異性突變抗體檢測人非小細(xì)胞肺癌組織中EGFR突變〔J〕.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2014；30(5)：531-4，539.

3Berge EM，Doebele RC.Re-examination of maintenance therapy in non-small cell lung cancer with the advent of new anti-cancer agents〔J〕.Drugs，2013；73(6)：517-32.

4Mlak R，Krawczyk P，Ramlau R，etal.Predictive value of ERCC1 and RRM1 gene single-nucleotide polymorphisms for first-line platinum-and gemcitabine-based chemotherapy in non-small cell lung cancer patients〔J〕.Oncol Rep，2013；30(5)：2385-98.

5李惠，張樹鵬，謝玲，等.非小細(xì)胞肺癌組織中EGFR基因突變與ERCC1基因表達(dá)的關(guān)系〔J〕.山東醫(yī)藥，2012；52(6)：67-8.

6Yamashita F，Azuma K，Yoshida T，etal.Prognostic value of EGFR mutation and ERCC1 in patients with non-small cell lung cancer undergoing platinum-based chemotherapy〔J〕.PLoS One，2013；8(8)：e71356.

7Mu X，Zhang Y，Qu X，etal.Ubiquitin ligase Cbl-b is involved in icotinib (BPI-2009H)-induced apoptosis and G1 phase arrest of EGFR mutation-positive non-small-cell lung cancer〔J〕.Biomed Res Int，2013;2013：726375.

8Zou Y，Ling YH，Sironi J，etal.The autophagy inhibitor chloroquine overcomes the innate resistance of wild-type EGFR non-small-cell lung cancer cells to erlotinib〔J〕.J Thorac Oncol，2013；8(6)：693-702.

9鄭軍，謝貴元，李姣，等.非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變的臨床意義研究〔J〕.中國腫瘤臨床，2014；30(14)：904-7.

10Boch C，Kollmeier J，Roth A，etal.The frequency of EGFR and KRAS mutations in non-small cell lung cancer (NSCLC)：routine screening data for central Europe from a cohort study〔J〕.BMJ Open，2013；3(4):pii：e002560.

11王殿軍，梁乃新，莫敏俐，等.非小細(xì)胞肺癌患者EGFR基因突變與ERCC1基因表達(dá)水平間的關(guān)聯(lián)〔J〕.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2012；22(1)：56-9.

12Ren S，Chen X，Kuang P，etal.Association of EGFR mutation or ALK rearrangement with expression of DNA repair and synthesisgenes in never-smoker women with pulmonary adenocarcinoma〔J〕.Cancer，2012；118(22)：5588-94.

13徐小博，楚慧麗，仲晨，等.非小細(xì)胞肺癌組織中EGFR基因突變與ERCC1 mRNA表達(dá)的關(guān)系〔J〕.中國腫瘤生物治療雜志，2014；21(6)：687-9.

14Krawczyk P，Wojas-Krawczyk K，Mlak R，etal.Predictive value of ERCC1 single-nucleotide polymorphism in patients receiving platinum-based chemotherapy for locally-advanced and advanced non-small cell lung cancer-A pilot study〔J〕.Folia Histochem Cytobiol，2012；50(1)：80-6.

〔2015-03-06修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

張利誠(1966-)，男，主任醫(yī)師，主要從事呼吸病學(xué)研究。

R73

A

1005-9202(2016)17-4234-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.048