人腦膠質(zhì)瘤不同病理分級標(biāo)本中神經(jīng)叢素1與細(xì)胞增殖抗原的陽性表達(dá)及臨床意義

王子謙 趙 剛

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)外科，吉林 長春 130021)

·外科與麻醉·

人腦膠質(zhì)瘤不同病理分級標(biāo)本中神經(jīng)叢素1與細(xì)胞增殖抗原的陽性表達(dá)及臨床意義

王子謙 趙 剛

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)外科，吉林 長春 130021)

目的探討人腦膠質(zhì)瘤不同病理分級標(biāo)本中神經(jīng)叢素A1(plexinA1)和細(xì)胞增殖抗原(Ki-67)的陽性表達(dá)及臨床意義。方法 選取50例腦膠質(zhì)瘤患者本行常規(guī)蘇木精-伊紅染色(HE染色)。根據(jù)病理分級Ki-67分為A、B兩組，其中A組21例(Ⅰ～Ⅱ級)，B組29例(Ⅲ～Ⅳ級)。采用免疫組織化學(xué)法對標(biāo)本中神經(jīng)叢素A1及Ki-67抗原的陽性表達(dá)情況進(jìn)行檢測。結(jié)果 神經(jīng)叢素A1在A組中的陽性表達(dá)率為23.81%(5/21)，低于B組72.41%(21/29)(P<0.05)；Ki-67在A組中的陽性表達(dá)率為14.29%(3/21)，低于B組55.17%(16/29)(P<0.05)；神經(jīng)叢素A1及Ki-67在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)呈正相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論 對腦膠質(zhì)瘤組織中神經(jīng)叢素A1進(jìn)行檢測有利于評估患者的預(yù)后。人腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生及發(fā)展過程中Ki-67和神經(jīng)叢素A1可能起到協(xié)同作用。

膠質(zhì)瘤；病理分級；細(xì)胞增殖抗原；神經(jīng)叢素A1

神經(jīng)叢素A1是一種跨膜蛋白，具有多向潛在功能，為信號素的主要受體之一。神經(jīng)叢素A1在免疫反應(yīng)、心血管生成、胚胎發(fā)育及神經(jīng)系統(tǒng)形成等方面發(fā)揮重要作用〔1〕。細(xì)胞增殖抗原(Ki-67)是惡性腫瘤研究中的熱門生物指標(biāo)，通過檢測Ki-67能夠觀察惡性腫瘤的細(xì)胞增殖活性。研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)叢素A1與口腔癌、胃癌和舌癌等腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)〔2〕，然而關(guān)于人腦膠質(zhì)瘤方面的研究卻少見報(bào)道。本研究對人腦膠質(zhì)瘤不同病理分級標(biāo)本中神經(jīng)叢素A1和Ki-67的陽性表達(dá)及臨床意義進(jìn)行探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年8月至2015年5月我院收治的50例腦膠質(zhì)瘤患者，男28例，女22例，年齡(53.7±4.8)歲。對每例患者的腫瘤標(biāo)本行常規(guī)蘇木精-伊紅染色(HE染色)。根據(jù)WHO腦腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)對腫瘤標(biāo)本的惡性度進(jìn)行分級，其中Ⅰ級8例，Ⅱ級13例，Ⅲ級19例，Ⅳ級10例，將Ⅰ～Ⅱ級劃分為A組，Ⅲ～Ⅳ級劃分為B組。A組室管膜瘤4例，星形細(xì)胞瘤11例，少支膠質(zhì)瘤6例；B組混合性膠質(zhì)瘤7例，脈絡(luò)叢瘤2例，神經(jīng)母細(xì)胞瘤13例，星形細(xì)胞瘤7例。

1.2 方法

1.2.1 試劑 SP-9001試劑盒(內(nèi)含辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素、封閉用正常山羊血清、內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑和生物素標(biāo)記羊抗兔IgG)、兔抗人Ki-67多克隆抗體、DAB顯色試劑盒、兔抗人神經(jīng)叢素A1多克隆抗體，上述試劑盒均由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。

1.2.2 免疫組織化學(xué)法 對收集凍存的50個(gè)腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本進(jìn)行解凍等處理，將石蠟塊按厚度3 μm連續(xù)切片，將其放置在防脫載玻片上，采用濃度為0.1 mol/L的硫化鉛沖洗3次，每次沖洗時(shí)間為5 min；于切片上滴加濃度為3%的過氧化氫溶液，室溫下反應(yīng)10 min，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性；硫化鉛沖洗3次，每次5 min。室溫下滴加正常山羊血清并封閉，反應(yīng)時(shí)間為30 min；同時(shí)滴入相應(yīng)一抗，4℃過夜；硫化鉛沖洗3次，每次5 min。滴入辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，室溫下反應(yīng)15～25 min；滴加DAB顯色，顯微鏡下觀察顯色時(shí)間，終止顯色后采用蒸餾水沖洗，對比染色選用蘇木精，脫水封固。陰性對照采用硫化鉛代替一抗，陽性對照選取陽性對照片。

1.3 陽性的判定標(biāo)準(zhǔn) 細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)上的神經(jīng)叢素A1在顯微鏡下觀察陽性細(xì)胞即是細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜染色棕黃色的細(xì)胞。判定標(biāo)準(zhǔn)：隨機(jī)觀察高倍視野個(gè)數(shù)≥10個(gè)，陽性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)比例<30%為陰性，≥30%為陽性。胞核上Ki-67通過高倍顯微鏡觀察，隨機(jī)選取視野個(gè)數(shù)≥10個(gè)，計(jì)算陽性細(xì)胞占同類細(xì)胞的比例。判定標(biāo)準(zhǔn)：(1)根據(jù)細(xì)胞顯色對染色強(qiáng)度進(jìn)行評分，無色：0分，淺黃色：1分，棕黃色：2分，棕褐色：3分。(2)根據(jù)陽性細(xì)胞占的比例評分，陰性0分，陽性細(xì)胞≤10%：1分，11%≤陽性細(xì)胞≤50%：2分，51%≤陽性細(xì)胞≤75%：3分，陽性細(xì)胞>75%：4分。每例染色積分為上述兩項(xiàng)乘積，積分≥3分為陽性，積分<3分為陰性〔3〕。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS18.0軟件，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson分析。

2 結(jié) 果

2.1 不同病理分級中神經(jīng)叢素A1和Ki-67的表達(dá) 神經(jīng)叢素A1在A組中的陽性表達(dá)率為23.81%，低于B組的72.41%(χ2=11.528,P<0.05)。Ki-67在A組中的陽性表達(dá)率為14.29%，低于B組的55.17%(χ2=8.642,P<0.05)。

2.2 神經(jīng)叢素A1和Ki-67表達(dá)的相關(guān)性 Ki-67和神經(jīng)叢素A1均陽性15例，均陰性21例，僅Ki-67陽性9例，僅神經(jīng)素A1陽性5例。神經(jīng)叢素A1及Ki-67在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=9.736，P<0.05)。

3 討 論

膠質(zhì)細(xì)胞瘤是最常見的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，由于其以浸潤的方式生長，因而采用手術(shù)治療難以將其切除干凈，術(shù)后復(fù)發(fā)率極高，患者預(yù)后情況較差。近年來，膠質(zhì)瘤的治療已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)，主要表現(xiàn)在尋找新的治療靶點(diǎn)〔4〕。目前，有學(xué)者研究了12種膠質(zhì)瘤細(xì)胞株，結(jié)果顯示神經(jīng)叢素家族在7～9種膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中呈陽性表達(dá)，而神經(jīng)叢素A1則在其中9種細(xì)胞株中呈陽性表達(dá)〔5〕。另有研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)叢素A1和多種腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)〔6〕。有學(xué)者研究了胃癌組織中神經(jīng)叢素A1的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)神經(jīng)叢素A1對促進(jìn)腫瘤新生血管增生及細(xì)胞增殖方面可能起到重要作用〔7〕，然而目前有關(guān)神經(jīng)叢素A1在腫瘤發(fā)生及發(fā)展過程中的具體作用機(jī)制尚未完全明確。

Ki-67是一種核抗原，能夠反映增殖期細(xì)胞表達(dá)的特異性。由于Ki-67的半衰期短，因而在增殖周期后會迅速降解，相較于其他DNA聚合酶α、細(xì)胞增殖核抗原和溴脫氧尿嘧啶等膠質(zhì)瘤增殖指標(biāo)更能清晰地反映腫瘤細(xì)胞的惡性和增殖程度等情況〔8〕。Ki-67是惡性腫瘤研究中的熱門生物指標(biāo)，通過對其進(jìn)行檢測能夠觀察惡性腫瘤的細(xì)胞增殖活性。

本次研究表明膠質(zhì)瘤中神經(jīng)叢素A1的陽性表達(dá)率與其惡性程度有關(guān)，膠質(zhì)瘤的惡性程度越低神經(jīng)叢素A1的陽性表達(dá)率也越低，神經(jīng)叢素A1及Ki-67在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)呈正相關(guān)。提示在膠質(zhì)瘤的發(fā)展過程中兩者可能起到協(xié)同作用，然而兩者間的作用機(jī)制尚未明確。

1 王維軍，楊 華.神經(jīng)從素A1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)與意義〔J〕.中國微侵襲神經(jīng)外科雜志，2015；20(3)：134-5.

2 Kei-ichi Katayama，F(xiàn)umiyasu Imai，F(xiàn)umikazu Suto，etal.Deletion of Sema3a or plexinA1/plexinA3 causes defects in sensory afferent projections of statoacoustic ganglion neurons〔J〕.PLoS One，2013；8(8)：e72512.

3 王維軍，楊 華，劉 灃，等.神經(jīng)叢素A1和細(xì)胞增殖抗原在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.腫瘤研究與臨床，2015；27(5)：336-8.

4 Valdés PA，Jacobs J，Harris BT，etal.Quantitative fluorescence using 5-aminolevulinic acid-induced protoporphyrin Ⅸ biomarker as a surgical adjunct in low-grade glioma surgery〔J〕.J Neurosurg，2015；123(3)：771-80.

5 Céline Delloye-Bourgeois，Arnaud Jacquier，Camille Charoy，etal.PlexinA1 is a new slit receptor and mediates axon guidance function of slit c-terminal fragments〔J〕.Nat Neurosci，2015；18(1)：36-45.

6 叢 宇，包倪榮，許 斌.信號素家族在免疫系統(tǒng)中作用的研究進(jìn)展〔J〕.中國腫瘤生物治療雜志，2015；22(4)：528-35.

7 趙向陽，陳 凜，許 倩，等.Plexin A1在胃癌中的表達(dá)及其與腫瘤細(xì)胞增殖和血管生成的關(guān)系〔J〕.中國胃腸外科雜志，2007；10(3)：265-8.

8 徐文鑫，楊俊榮，王秋實(shí)，等.Ki-67、p53、Survivin在食管癌及癌前病變組織中的表達(dá)意義〔J〕.中國醫(yī)師雜志，2015；17(2)：224-7.

〔2016-05-04修回〕

(編輯 郭 菁)

趙 剛(1958-)，男，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，主要從事神經(jīng)腫瘤的基礎(chǔ)和臨床研究。

王子謙(1990-)，男，在讀碩士，主要從事神經(jīng)腫瘤的基礎(chǔ)和臨床研究。

R651.1

A

1005-9202(2016)24-6193-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.070