酶標儀在血液檢驗上的應用分析

張冬云 遼寧省盤錦市雙臺子區(qū)疾病預防控制中心 (遼寧 盤錦 124000)

酶標儀在血液檢驗上的應用分析

張冬云 遼寧省盤錦市雙臺子區(qū)疾病預防控制中心 (遼寧 盤錦 124000)

目的：觀察酶標儀在梅毒、艾滋病中的臨床應用效果。方法：結合臨床化學檢驗操作規(guī)程，設定相應的工作程序，建立采血、測定到打印結果超微量化學檢驗流程，分析酶標儀在血液檢驗中的臨床應用效果。結果：以梅毒、艾滋病為例，分別取三份血清，采用本法進行批內、批間20次重復實驗。其中，批內CV為4.5%、4.9%、4.2%；批間CV為6.9%、5.6%及5.1%。當樣本梅毒、艾滋病活性升高到160卡門單位時，檢測結果已經不是線性關系，此時可以采用等滲鹽水將標本稀釋后再進行檢測。在三種已經確定梅毒、艾滋病的血清中加入分別加入一種梅毒、艾滋病，混合后根據梅毒、艾滋病方法進行測定，結果顯示：標本回收率為93.4%、97.6%及102.0%，平均回收率為97.6%。穩(wěn)定性結果顯示：10～90min內相對比較穩(wěn)定，顯色10min后比色相對比較理想。結論：血液檢驗上艾滋病和梅毒預防中采用酶標儀測定效果理想，能準確、穩(wěn)定、微量、快速、簡便的提高效率，降低檢驗成本，減少消耗，值得推廣應用。

酶標儀 血液檢驗 應用效果 檢驗成本

艾滋病、梅毒是臨床上常見的性病，其傳播主要以性傳播為主，患者發(fā)病后如果不采取積極有效的方法治療將會誘發(fā)其他疾病，嚴重者將威脅患者生命。目前，臨床上對于艾滋病、梅毒尚缺乏理想的診斷方法，但是長期療效欠佳，臨床誤診率或漏診率較高，難以達到預期的診斷效果。隨著醫(yī)療技術的不斷發(fā)展，自動生化分析儀在化學檢驗中得到應用，且效果理想，該方法能實現臨床化學檢驗的微量快速分析[1]。但是，該診斷方法對設備要求較高，難以在基礎醫(yī)院推廣普遍。近年來，酶標儀在血液檢驗中得到應用，該方法能實現快速、準確、穩(wěn)定、微量目的，并且能大大提高工作效率，報道如下。

1.資料與方法

1.1 儀器

①SLT400SF酶標儀；②edp-2自動加樣器；③234系列UBA微量加樣器；④RA-XT全自動生化分析儀；⑤酶標板及0.2ml聚苯乙烯離心管；⑥DG-3022A型酶標儀。

1.2 方法

1.2.1 實驗準備

將SLT400SF酶標儀根據要求編制相應的程序，采用程序分吸光度值和測定值進行打印。同時，DG-3022A型酶標儀根據實驗測定內容校準波長，做好比色測定[2]。向所選的酶標儀中加入空白試劑在酶標儀上進行比色，打印各個孔的吸光度值。校準edp-2自動加樣器和234系列UBA微量加樣器，保證加樣器準確度誤差≤±1%，變異系數＜1%。

1.2.2 采血方法

使用的血量甚微，一般只需要在手指、耳垂等末梢部位進行常規(guī)方法刺血即可。采用微量吸管吸住血，將其注入0.2ml小離心管中，待血液凝固后進行5min離心，速度為3000rpm。在96孔酶標板A1、A2作為空白對照組，A3-A4作為標準孔，各標準孔均為雙控，其余各孔均為測量孔，設置測定總量為300ul，操作相關操作步驟必須嚴格遵循儀器及試劑盒相關操作進行。

1.3 統(tǒng)計分析

采用SPSS18.0軟件處理，計數資料行x2檢驗，采用n（%）表示，計量資料行t檢驗，采用（±s）表示，P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2.結果

2.1 精密度測定

為了保證酶標儀在血液檢驗中測定更具針對性，實驗中以梅毒、艾滋病為例，分別取三份血清，采用本法進行批內、批間20次重復實驗。其中，批內CV為4.5%、4.9%、4.2%；批間CV為6.9%、5.6%及5.1%。

2.2 線性范圍

采用等滲鹽水將高活性的梅毒、艾滋病血清作為試驗標本測定其線性范圍，結果顯示：當樣本梅毒、艾滋病活性升高到160卡門單位時，檢測結果已經不是線性關系，此時可以采用等滲鹽水將標本稀釋后再進行檢測[3～5]。

2.3 回收率

在三種已經確定梅毒、艾滋病單位的血清中加入分別加入梅毒、艾滋病，混合后根據梅毒、艾滋病方法進行測定，結果顯示：標本回收率為93.4%、97.6%及102.0%，平均回收率為97.6%。

2.4 穩(wěn)定性試驗

采用1份血清測定梅毒、艾滋病生成量，加入濃度為0.4mmol/LNaOHh顯色后在不同的時間點進行比色（5、10、15、30、60、90及120min），結果顯示：10～90min內相對比較穩(wěn)定，顯色10min后比色相對比較理想。

3.討論

酶聯(lián)免疫吸附試驗時七十年代初在酶聯(lián)免疫組織化學基礎上發(fā)展起來的，并且在國內血站臨床試驗中主要的檢測技術，由于多數酶聯(lián)免疫吸附試驗最后均需要采用比色測定，使得酶標儀成為酶聯(lián)免疫吸附中重要的工具[6]。本研究中，根據酶標儀精密的比色系統(tǒng)和儀器軟件，配備一些簡單的附件，根據檢驗項目程序并參考全國臨床檢驗操作方法按照一定比例縮小，從而形成了采血、檢測到打印結果的工作流程。本研究中，為了保證酶標儀在血液檢驗中測定更具針對性，實驗中以梅毒、艾滋病為例，分別取三份血清，采用本法進行批內、批間20次重復實驗。其中，批內CV為4.5%、4.9%、4.2%；批間CV為6.9%、5.6%及5.1%。

酶標儀是臨床上梅毒和艾滋病中常用的篩查方法，該方法具備軟件功能和精密的光學系統(tǒng)。通過軟件功能能控制整機測量及檢驗程序的處理，并且能顯示或打印結果；而通過酶標儀光學系統(tǒng)原理也是根據朗博-比爾定律演變而來，具有較高的精度，并且檢測速度較快，能實現批量檢測。本研究中，采用等滲鹽水將高活性的梅毒、艾滋病血清作為試驗標本測定其線性范圍，結果顯示：當樣本梅毒、艾滋病活性升高到160卡門單位時，檢測結果已經不是線性關系，此時可以采用等滲鹽水將標本稀釋后再進行檢測[7]。同時，酶標儀檢測時不但可以實現酶標儀一機多用，既可以實現免疫學試驗，也可以作為多種臨床化學檢驗，具有測試穩(wěn)定、采血微量、節(jié)約試劑等優(yōu)點。本研究中，在三種已經確定梅毒、艾滋病單位的血清中加入分別加入梅毒、艾滋病，混合后根據梅毒、艾滋病方法進行測定，結果顯示：標本回收率為93.4%、97.6%及102.0%，平均回收率為97.6%。但是，臨床上采用不同酶標儀作為標板或同一酶標板的不同孔對實驗的重復性均具有明顯的影響。出現這種現象的原因是多方面的，由于不同酶標板底透光度不均一，同一板孔內的液體存在重復性誤差，因此，臨床上采用酶標儀測定時應該進行酶標板的本底數值，從測定孔吸光度值中去除本底數值，提高檢測精度，在疾病篩查中發(fā)揮了重要的作用，能實現艾滋病和梅毒的篩查，正確的指導患者治療。本研究中，采用1份血清測定梅毒、艾滋病生成量，加入濃度為0.4mmol/NaOH顯色后在不同的時間點進行比色（5、10、15、30、60、90及120min），結果顯示：10～90min內相對比較穩(wěn)定，顯色10min后比色相對比較理想。

綜上所述，血液檢驗上艾滋病和梅毒預防中采用酶標儀測定效果理想，能準確、穩(wěn)定、微量、快速、簡便的提高效率，降低檢驗成本，減少消耗，值得推廣應用。

[1] 苑瑞琴, 興安, 張力, 等. 290例血液標本不合格原因分析及對策[J]. 臨床輸血與檢驗, 2012,13(2):363-366.

[2] 宿振國, 周玉明, 高梅蘭, 等. 濱州市健康成人靜脈血血細胞各項參數參考范圍調查[J]. 濱州醫(yī)學院學報, 2012,17(6):249-252.

[3] 付增祺, 趙蔭林, 馬光湖, 等. 關于臨床血液檢驗質量控制的探討[J]. 西北國防醫(yī)學雜志, 2011,16(1):150-155.

[4] 李乃魚, 張錄喜, 馮鳳, 等. 血液檢驗室內質控存在的若干問題及對策[J]. 實用醫(yī)技雜志, 2012,23(15):180-184.

[5] 陶敏. 影響檢驗分析前血液標本質量的因素分析[J]. 大家健康:學術版, 2014，8(1):57-57.

[6] 張林淵. 免疫學檢驗分析前采血標本質量控制的問題與應對措施分析[J]. 大家健康:學術版, 2014,8(7):57-58.

[7] 楊姣. 免疫學檢驗分析前采血標本質量控制的問題與應對策略[J]. 基層醫(yī)學論壇, 2014,18(2)：222-223.

1006-6586(2016)07-0037-02

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