劉玲玲

·論著·

不同浸泡時(shí)間對間接免疫熒光法檢測抗核抗體結(jié)果的影響

劉玲玲

目的 探討不同浸泡時(shí)間對間接免疫熒光法檢測抗核抗體（antinuclear antibody，ANA）結(jié)果的影響。方法 選擇2014年6月～2016 年5月我院接收的符合研究選取標(biāo)準(zhǔn)的41例風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者作為研究組，另選取41例同期體檢健康者作為對照組。抽取所有研究對象空腹?fàn)顟B(tài)下靜脈血10.0 m l，將血清標(biāo)本分成三組，分別浸泡5.0 m in、15.0 m in、25.0 m in，采用間接免疫熒光技術(shù)進(jìn)行檢測。對比兩組研究對象不同浸泡時(shí)間ANA檢測結(jié)果。結(jié)果 浸泡5.0 m in時(shí)，研究組ANA檢測敏感度為100.00%、特異度為78.05%，對照組為7.32%、0.00%；浸泡15.0 min時(shí)，研究組ANA檢測敏感度為100.00%、特異度為10.00%，對照組為0.00%、0.00%；浸泡25.0 min時(shí)，研究組ANA檢測敏感度為80.49%、特異度為10.00%，對照組為0.00%、0.00%。研究組浸泡15.0 m in時(shí)敏感度（100.0%）高于浸泡25.0 m in時(shí)敏感度（80.49%），特異度（100.0%）高于浸泡5.0 m in時(shí)特異度（78.05%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 浸泡15.0 m in時(shí)間接免疫熒光法對抗核抗體的檢測靈敏度和特異度較高，可有效提高檢測準(zhǔn)確率，降低假陽性率。

不同浸泡時(shí)間；間接免疫熒光法；抗核抗體

ANA在臨床醫(yī)學(xué)中又被稱為抗核酸抗原抗體，是一種把自身真核細(xì)胞（如RNA、DNA、脫氧核糖核蛋白及可提取核抗原等）作靶抗原的自身抗體統(tǒng)稱[1-2］。ANA可和各種動物細(xì)胞核產(chǎn)生反應(yīng)，其在血清中分布最為廣泛，同時(shí)在尿液、關(guān)節(jié)滑膜液及胸水中也有一定分布[3］。ANA在多種自身免疫疾病中陽性率存在一定差異，如原發(fā)性膽汁性肝硬化（95.0%～100.0%）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（95.0%～100.0%）、全身性硬皮病（85.0%～90.0%）、干燥綜合征（10.0%～40.0%）、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（10.0%～20.0%）[4］。所以，ANA標(biāo)準(zhǔn)檢測已成為自身免疫系統(tǒng)疾病重要篩選途徑。臨床多通過以人喉癌上皮細(xì)胞等作底物的間接免疫熒光法對ANA予以檢測，但浸泡時(shí)間、標(biāo)本初始稀釋度等均可影響檢測結(jié)果[5］。本研究選取我院41例風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者，通過設(shè)置對照組，探究不同浸泡時(shí)間對間接免疫熒光法檢測抗核抗體結(jié)果的影響。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 研究組納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理學(xué)檢查確診為風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；具有自主意識，知曉本研究并簽署知情同意書；（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他全身免疫性疾病者；合并全身性感染疾病者；依從性差，無法順利配合完成本研究者；合并造血系統(tǒng)疾病者。

1.2 一般資料

選擇2014年6月～2016年5月我院接收的符合研究選取標(biāo)準(zhǔn)的41例風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者作為研究組，另選取41例同期體檢健康者作為對照組。研究組男13例，女28例；年齡31～66歲，平均（50.47±8.06）歲。對照組男15例，女26例；年齡33～65歲，平均（50.51±8.10）歲。兩組年齡、性別等一般資料對比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有研究價(jià)值，且本研究經(jīng)我院倫理委員會審核同意。

1.3 方法

ANA檢測試劑盒由德國歐蒙生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，通過歐蒙滴定平板法，采用間接免疫熒光技術(shù)進(jìn)行檢測。具體過程如下：抽取所有研究對象空腹?fàn)顟B(tài)下靜脈血10.0 m l，置入離心機(jī)中行離心處理（轉(zhuǎn)速：3 000 r/min，時(shí)長：10.0 min），隨后取上清液放于-20.0℃環(huán)境中儲存待檢。將所有研究對象血清標(biāo)本依據(jù)1∶100比例進(jìn)行稀釋，并將每份血清標(biāo)本分為三組，使其與固定于載玻片反應(yīng)區(qū)中的基質(zhì)（人喉癌上皮細(xì)胞及鼠肝）相互反應(yīng)（30.0 min左右）；對分為三組的血清標(biāo)本予以浸泡洗滌處理（三組浸泡時(shí)間分別設(shè)定為5.0 min、15.0 min、25.0 min），隨后加入經(jīng)熒光素標(biāo)記處理的抗人IgG抗體，進(jìn)行時(shí)長為30.0 min的孵育處理后再次進(jìn)行浸泡洗滌（三組浸泡時(shí)間分別設(shè)定為5.0 min、15.0 min、25.0 min）；于熒光顯微鏡下仔細(xì)查看特異性熒光染色模型。依據(jù)熒光染色模型將其分為胞質(zhì)型、核著絲點(diǎn)型、核膜型、核仁型、核斑點(diǎn)型、核均質(zhì)型及混合型（2種或2種以上混合熒光染色模型），將1∶100初始血清稀釋度陽性標(biāo)本作陽性評定標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 觀察指標(biāo)

對比兩組研究對象不同浸泡時(shí)間ANA檢測結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

通過SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以n（%）表示計(jì)數(shù)資料，組間分布采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

采用χ2檢驗(yàn)可知，浸泡5.0 min時(shí)，研究組ANA檢測敏感度為100.00%（41/41）、特異度為78.05%（32/41），對照組敏感度為7.32%（3/41）、特異度為0.00%（0/41）；浸泡15.0 min時(shí)，研究組ANA檢測敏感度為100.00%（41/41）、特異度為10.00% （41/41），對照組敏感度為0.00%（0/41）、特異度為0.00%（0/41）；浸泡25.0 min時(shí)，研究組ANA檢測敏感度為80.49%（33/41）、特異度為10.00%（41/41），對照組敏感度為0.00%（0/41）、特異度為0.00%（0/41）。研究組浸泡15.0 min時(shí)敏感度（100.0%）高于浸泡25.0 min時(shí)的敏感度（80.49%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.787，P＜0.05），特異度（100.0%）高于浸泡5.0 min時(shí)的特異度（78.05%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.988，P＜0.05）。

3 討論

ANA是一組針對細(xì)胞核中的蛋白、RNA、DNA或此類物質(zhì)分子復(fù)合物的自身抗體，根據(jù)其核中每個(gè)分子的性能不同，可將其分為抗核仁抗體、抗非組蛋白抗體、抗組蛋白抗體及抗DNA抗體等，而每類抗體根據(jù)抗原特性不同又可進(jìn)一步細(xì)分為多種類型[6-7］。ANN主要分布于IgG、IgA、IgM中，在IgD和IgE中也有少量分布。ANA的檢測在臨床中具有重要價(jià)值，ANA檢測結(jié)果呈陽性則可高度懷疑機(jī)體存在自身免疫性疾病，且滴度越高，表明免疫損害程度越高。因此，對ANA進(jìn)行準(zhǔn)確診斷對自身免疫性疾病的臨床診治、提高預(yù)后均具有重要意義[8-10］。

目前，臨床主要將猴或鼠肝與人喉癌上皮細(xì)胞作底物，并采用間接免疫熒光法對ANA進(jìn)行檢測，其中人喉癌上皮細(xì)胞細(xì)胞結(jié)構(gòu)較為清晰、核大、核抗原較為豐富，有助于結(jié)果觀察并分析熒光染色模型[11-12］。但當(dāng)血清標(biāo)本浸泡時(shí)間、抗原基質(zhì)、反應(yīng)時(shí)間、加樣量、初始稀釋度、室溫等條件發(fā)生轉(zhuǎn)變時(shí)，熒光強(qiáng)度也發(fā)生變化，導(dǎo)致間接免疫熒光法對ANA的檢測結(jié)果存在一定差異性。本研究將每位研究對象血清標(biāo)本分為三組，分別浸泡5.0 min、15.0 min及25.0 min，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，浸泡5.0 min時(shí)研究組檢測結(jié)果均呈陽性，而對照組出現(xiàn)3例陽性，導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性的原因可能是操作期間浸泡時(shí)間較短，血清未有效洗脫而形成非特異性熒光所致。而當(dāng)浸泡25.0 min時(shí)，對照組檢測結(jié)果均呈陰性，而研究組出現(xiàn)8例陰性，其原因可能是浸泡時(shí)間較長，致使熒光強(qiáng)度降低或患者抗體自身滴度較低，雖然隨著浸泡時(shí)間增長熒光強(qiáng)度不斷降低，滴度也隨之減弱，但熒光染色核型未發(fā)生改變。當(dāng)浸泡時(shí)間為15.0 min時(shí)，研究組均為陽性，對照組均為陰性，與病理檢查結(jié)果一致，并且浸泡15.0 min時(shí)敏感度和特異度分別高于浸泡25.0 min時(shí)敏感度、浸泡5.0 min時(shí)特異度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），由此可以得知，浸泡時(shí)間適宜有助于提高ANA檢測準(zhǔn)確度與敏感度，為臨床治療方案的制定提供指導(dǎo)依據(jù)。

綜上所述，浸泡15.0 min時(shí)間接免疫熒光法對抗核抗體的檢測靈敏度和特異度較高，可有效提高檢測準(zhǔn)確率，降低假陽性率。

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Effect of Different Soaking Time on the Results of Indirect Imm unofluorescence Assay for the Detection of Antinuclear Antibody

LIU Lingling Department of Laboratory， Shangqiu First People's Hospital Branch， Shangqiu He’nan 476000， China

Objective To investigate the effects of different soaking time on the results of antinuclear antibody （ANA） by indirect immunofluorescence assay. Methods 41 patients with rheumatoid arthritis who received the selection criteria for the study were selected as the study group from June 2014 to May 2016， another 41 cases of the same period were selected as the control group. We extracted all the subjects in the fasting state of venous blood 10.0ml， serum samples were divided into three groups， respectively，soak 5.0 m in， 15.0min， 25.0 min， using indirect immunofluorescence techniques to detect. Two groups of research objects with different immersion time ANA test results were compared. Results When soaked in 5.0 min， the sensitivity and specificity of ANA in the study group were 100.00% and 78.05%， while the control group was 7.32% and 0.00%，respectively， when soaked in 15.0 min， the sensitivity and specificity of ANA in the study group were 100.00% and 10.00% respectively， while the control group was 0.00% and 0.00%， respectively， when soaked in 25.0 min， the sensitivity and specificity of ANA in the study group were 80.49% and 10.00% respectively， while the control group was 0.00% and 0.00%，respectively. The study group of immersion 15.0 min sensitivity （100.00%）was higher than immersion 25.0 m in sensitivity （80.49%）， specificity （100.00%） was significantly higher than that of immersion 5.0 min specificity （78.05%）， the difference was statistically significant （P＜0.05）. Conclusion The detection sensitivity and specificity of immersion 15.0 min time is high， which can effectively improve the detection accuracy and reduce false positive rate.

Different soaking time， Indirect immunofluorescence， Anti nuclear antibody

R 446

A

1674-9308（2016）26-0048-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.26.026

河南省商丘市第一人民醫(yī)院分院檢驗(yàn)科，河南 商丘 476000