王曉蘭　王記紅　陳旭東

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MiR-513b-5p在結(jié)腸癌中的表達

王曉蘭王記紅陳旭東

【摘要】目的 探討miR-513b-5p在結(jié)腸癌組織中的表達。方法 選取69份結(jié)腸癌樣本作為研究對象，采用qRT-PCR方法檢測結(jié)腸癌組織和對應(yīng)癌旁組織中miR-513b-5p的表達情況。結(jié)果 miR-513b-5p在腫瘤組織的相對表達量較癌旁正常組織低（P＜0．001），結(jié)腸癌組織中miR-513b-5p表達水平與原發(fā)性腫瘤的發(fā)生，淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)聯(lián)（P＜0．001）。miR-513b-5p表達與性別，年齡和血道轉(zhuǎn)移無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0．05）。結(jié)論 miR-513b-5p可能在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮抑癌基因的角色。

【關(guān)鍵詞】miR-513b-5p；結(jié)腸癌；

結(jié)腸癌是危害人類生命和健康的惡性腫瘤之一，近年來我國的結(jié)腸癌發(fā)病率、死亡率均明顯上升，具有年輕化、家族聚集、遺傳等特點。結(jié)腸癌與其他類型腫瘤相同，是較復(fù)雜的基因表達異常性疾病，其中包括編碼及非編碼基因的結(jié)構(gòu)和表達的異常。

近年來，非編碼RNA（non. Coding RNAs），特別是微小RNA （microRNA, miRNA）調(diào)控基因表達研究的興起為該問題的解決提供了新的視點。MicroRNA是一類大小約為19～22個核苷酸的小分子RNA，通過抑制其靶基因的表達，發(fā)揮著“癌基因”或“抑癌基因”的作用。近來研究也已表明，與沒有癌變的胃組織比較，miR-513b-5p在胃癌組織中是低表達的[1]，但結(jié)腸癌中miR-513b-5p表達情況還沒見報道。我們采用qRT-PCR方法檢測結(jié)腸癌組織和對應(yīng)癌旁組織中miR-513b-5p的表達情況。

1　材料和方法

1.1臨床樣本采集

我們從2011年9月～2014年9月在漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院的手術(shù)患者中，獲取69例原發(fā)性結(jié)腸癌患者癌標(biāo)本和相匹配的癌旁組織（距離病灶邊緣15 cm以上）標(biāo)本，其中男41例，女28例；小于69歲32例，大于等于60歲37例，平均（53.5±3.5）歲。原發(fā)腫瘤T1-2 17例，T3-4 52例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N0-N1 20例，N2-N3 49例。無血道轉(zhuǎn)移62例，血道轉(zhuǎn)移7例。臨床I～II期21例，III～IV期48例。腫瘤和鄰近正常組織樣本均經(jīng)病理學(xué)檢驗確認(rèn)，樣本離體后迅速冷凍于液氮中，常規(guī)-80℃冰箱凍存。該研究經(jīng)漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校倫理委員會批準(zhǔn)，并取得所有患者的知情同意。

1.2試劑材料

人結(jié)腸癌細胞株 SW480為本校分子實驗室自存，胎牛血清、1640培養(yǎng)基購自Hyclone公司，TRIzol試劑購自invitrogen公司，Matrigel Matrix購自BD公司，All-in-One microRNA Q-PCR Detection Kit、miR-513b-5p、U6引物購自GeneCopoeia公司，ABI7500熒光定量PCR儀為ABI公司產(chǎn)品。

1.3RNA提取和qRT-PCR

用Invitrogen公司的Trizol從組織中提取總RNA；成熟miR-513b-5P的表達水平使用Taqman試劑盒用qRT-PCR定量；重復(fù)qRT-PCR 3次，包括一個無核酸的對照；MiR-513b-5P的表達情況用比較2-ΔΔCT值法，以U6 SnRNA為內(nèi)參進行定量。

1.4統(tǒng)計分析

統(tǒng)計學(xué)分析使用SPSS 16.0軟件進行，數(shù)據(jù)以（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，兩樣本平均值比較采用student's t檢驗，不同樣本間差異用單因素方差分析進行比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

利用實時熒光定量PCR檢測了69對新鮮結(jié)腸癌組織及遠端正常組織miR-513b-5p的表達，結(jié)果顯示miR-513b-5P在結(jié)腸癌組織中的表達明顯低于正常黏膜組織（t=-4.642，P＜0.001）。臨床病理分析結(jié)果顯示：miR-513b-5P與患者性別、年齡、血道轉(zhuǎn)移均無顯著關(guān)系（t=1.219，P=0.227；t=0.574，P=0.568；t=1.078,P=0.285）；而在原發(fā)性腫瘤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期上存在統(tǒng)計學(xué)差異（t=5.671，P=0.000；t=6.949，P=0.000；t=6.342，P=0.000）。

3　討論

結(jié)腸癌是歐美發(fā)達國家最常見的惡性腫瘤，也是我國九大常見惡性腫瘤之一。MicroRNA廣泛的存在于動物、植物、病毒等有機體內(nèi)，而且是一種非編碼RNA，成熟體長度在18～25 bp左右，其編碼基因常位于某種基因的內(nèi)含子內(nèi)隨宿主基因編碼而表達[2]。MicroRNA表達譜在惡性腫瘤中反映不同的腫瘤類型，且可反映腫瘤分化階段。文獻報道m(xù)ir-513a-3p對人肺癌細胞有抑制作用[3]。在本研究中，結(jié)果顯示miR-513b-5P在結(jié)腸癌組織中的表達明顯低于相匹配的癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）；miR-513b-5P在原發(fā)性腫瘤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期上存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.001）；提示miR-513b-5p可能抑制結(jié)直腸癌細胞的生長、侵襲及轉(zhuǎn)移能力。結(jié)果表明，miR-513b-5p可能是結(jié)腸癌的抑制基因。

總之，我們證實在人類結(jié)腸癌miR-513b-5p呈現(xiàn)明顯低表達，miR-513b-5p可能在結(jié)腸癌的發(fā)生和發(fā)展中起重要的調(diào)節(jié)作用。因此，miR-513b-5p可能是結(jié)腸癌的潛在生物標(biāo)志物與治療的分子靶標(biāo)。

參考文獻

[1] Xudong Chen，Guoqiang Zhao，F(xiàn)uqing Wang，et al． Upregulation of miR-513b inhibits cell proliferation， mingration，and promotes apoptosis by targeting high mobility group-box 3 protein in gastric cancer[J]． Tumor Biology，2014，35（11）：11081-11089．

[2]Qin W， Ren Q，Liu T，et al． MicroRNA-155 is a novel suppressor of ovarian cancer-initiating cells that targets CLDN1[J]．FEBS let，2013，587（9）：1434-1439．

[3]Zhang X，Zhu J，Xing R，et al． MiR-513a-3p sensitizes human lung adenocarcinoma cells to chemotherapy by targeting GSTP1[J]．Lung Cancer，2012，77（3）：488-494．

Expression of miR-513b-5p in Colon Cancer

WANG Xiaolan WANG Jihong CHEN Xudong, Luohe Medical College, Luohe 462002, China

[Abstract]Objective To investigate the expression of miR-513b-5p in colon cancer. Methods 69 colon cancer samples were chosen as the research object. qRT-PCR was used to detect the expression of miR-513b-5p in colon cancer samples. Results The expression of miR-513b-5p was significantly lower in tumor tissue compared with matched non-malignant adjacent tissues (P＜0.001), meanwhile there was negative correlation with occurrence of primary tumors, lymph node metastasis and TNM staging (P＜0.001 ). But there was no significant difierence with genders, ages and hematogenous metastasis (P＞0.05). Conclusion miR-513b-5p probably is a kind of anti-oncogene in colon cancer.

[Key words]miR-513b-5p, Colon cancer, Expression

doi：10．3969/j．issn．1674-9308．2016．03．036

【文章編號】1674-9308（2016）03-0056-02

【中圖分類號】R735．3+5

【文獻標(biāo)識碼】A

作者單位： 462002 漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校