廉潔

山西省中醫(yī)院，山西 太原 030000

連理湯對感染后腸易激綜合征患者結(jié)腸黏膜NLRP-3及PGRP-4的影響

廉潔

山西省中醫(yī)院，山西 太原 030000

目的：探討連理湯對感染后腸易激綜合征患者結(jié)腸黏膜NLRP-3及PGRP-4的影響。方法：將感染后腸易激綜合征患者48例分為2組，治療組予連理湯，對照組予得舒特，連續(xù)4周。采用半定量癥狀計(jì)分法，記錄治療前、治療后2周及4周癥狀計(jì)分變化；采用熒光定量PCR技術(shù)和Western-blot技術(shù)檢測結(jié)腸NLRP-3、PGRP-4變化。結(jié)果：治療組總有效率為83.33%，對照組總有效率為79.16%，2組總有效率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療前，PI-IBS患者結(jié)腸黏膜NLRP-3表達(dá)上升、PGRP-4表達(dá)下降；治療后，治療組患者結(jié)腸黏膜NLRP-3表達(dá)下降、PGRP-4表達(dá)上升，與治療前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：連理湯具有明確緩解PI-IBS患者腹痛、腹瀉癥狀的效用，其療效靶點(diǎn)考慮與上調(diào)NLRP-3、PGRP-4表達(dá)，提高腸道先天免疫反應(yīng)，維持腸黏膜免疫屏障完整相關(guān)。

感染后腸易激綜合征；連理湯；NOD樣受體-3（NLRP-3）；肽聚糖結(jié)合識別蛋白-4（PGRP-4）

部分腸道感染患者在急性腸道感染恢復(fù)后，仍存在腹痛、腹部不適、腹瀉等癥狀，即所謂感染后腸易激綜合征(post-infectious irritable bowel syndrome，PI-IBS)，這類患者占消化科就診患者20%以上[1～2]。生理情況下，腸道處于弱炎癥狀態(tài)，弱炎癥主要是先天免疫(innate immune)發(fā)揮重要作用，它主要通過模式識別相關(guān)危險(xiǎn)分子，激活巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等，啟動防御機(jī)制，通過抵御外來抗原對消化道損害，維持腸黏膜屏障完整，減少有害物質(zhì)透過腸道屏障，滲入黏膜下層，從而保證腸道共生菌群正常[3]。病理狀態(tài)下，腸道先天免疫失衡，模式識別分子如NOD樣受體家族(NLRs)、Toll樣受體家族(TLRs)、肽聚糖結(jié)合識別蛋白家族(PGRPs)表達(dá)異常，均有可能導(dǎo)致腸道防御機(jī)制受損，導(dǎo)致大量外來抗原入侵消化道，引起腸道功能失調(diào)[4]。筆者在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，從“濕熱邪毒留戀，其瀉乍發(fā)乍止”角度出發(fā)，結(jié)合上述研究進(jìn)展，應(yīng)用隨機(jī)、對照設(shè)計(jì)，觀察連理湯對于PI-IBS患者臨床癥狀、NOD樣受體-3(NLRP-3)、肽聚糖結(jié)合識別蛋白-4(PGRP-4)表達(dá)的作用。

1 臨床資料

1.1 一般資料 全部病例均源自于山西省中醫(yī)院門診患者48例，采用隨機(jī)、對照、開放試驗(yàn)設(shè)計(jì)：隨機(jī)號應(yīng)用簡明統(tǒng)計(jì)分析軟件設(shè)計(jì)隨機(jī)數(shù)字表后取號將患者分為2組各24例，治療組男14例，女10例；平均病程(1.41±0.29)年，平均年齡(46.73±13.21)歲。對照組男16例，女8例；平均病程(1.36± 0.38)年，平均年齡(47.10±12.94)歲。2組年齡、病程、性別及癥狀計(jì)分等基線資料經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照2006年功能性胃腸病羅馬Ⅲ診斷標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于腸易激綜合征中相關(guān)內(nèi)容[5]。中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華中醫(yī)藥學(xué)會發(fā)布《中醫(yī)內(nèi)科學(xué)常見病診療指南·西醫(yī)疾病部分》中關(guān)于腸易激綜合征中醫(yī)辨證論治內(nèi)容，符合脾虛濕盛證[6]。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 符合診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡18～65歲；簽署知情同意書。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 不符合診斷標(biāo)準(zhǔn)；伴有心腦血管疾病、精神病，肝腎功能障礙者；伴有消化道腫瘤者；孕婦或近3月有意懷孕者；不能理解知情同意書者。

2 研究方法

2.1 治療組 給予免煎中藥制劑，連理湯(黃連、炙甘草各8 g，茯苓12 g，白術(shù)15 g，人參、干姜各6 g，江蘇江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，用200 mL水沖服，每天1劑，分2次服用，連續(xù)4周。

2.2 對照組 給予匹維溴銨(法國蘇威制藥生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字：H20120127，商品名：得舒特)，50 mg，每天3次，連續(xù)4周。

3 觀察指標(biāo)與統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3.1 癥狀計(jì)分 參照羅馬Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)以及中華中醫(yī)藥學(xué)會發(fā)布《中醫(yī)內(nèi)科學(xué)常見病診療指南·西醫(yī)疾病部分》中關(guān)于腸易激綜合征相關(guān)內(nèi)容，采用半定量計(jì)分法，將PI-IBS癥狀列為主要癥狀即腹瀉(0分：無癥狀、2分：大便每天3次；4分：大便每天3次以上)；次要癥狀即腹部不適(0分：無癥狀；1分：偶有腹部不適，不影響工作；2分：腹部不適頻繁，嚴(yán)重影響工作)，腹痛(0分：無癥狀；1分：偶有腹痛，不影響工作；2分：腹痛頻繁，嚴(yán)重影響工作)。

3.2 PI-IBS患者結(jié)腸黏膜NLRP-3、PGRP-4蛋白及 mRNA表達(dá) 采用 Real-timePCR技術(shù)和western-blot技術(shù)檢測患者結(jié)腸黏膜 NLRP-3、PGRP-4蛋白及mRNA表達(dá)，具體實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按說明進(jìn)行。NLRP-3、PGRP-4及GAPDH引物委托廣州吉坤生物技術(shù)有限公司完成。NLRP-3、PGRP-4一抗購自美國SanTa公司，二抗購自武漢博士德生物有限公司。

表1NLRP-3、PGRP-4及GAPDH引物序列

3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0 for Windows統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以()表示，符合正態(tài)分布資料采用單因素方差分析(ANOVA)檢驗(yàn)；若為非正態(tài)分布資料采用Mann-Whitney U秩和檢驗(yàn)。

4 療效評價(jià)與研究結(jié)果

4.1 療效評價(jià) 主要癥狀腹瀉改善為療效評價(jià)終點(diǎn)，即采用單一療效評價(jià)作為主要評價(jià)手段，綜合考慮總體癥狀計(jì)分變化以判斷臨床療效。

4.2 2組臨床療效比較 全部病例均完成本次臨床觀察，治療組臨床完全緩解6例，顯效4例，有效10例，無效4例，總有效率為83.33%。對照組臨床完全緩解5例，顯效5例，有效9例，無效5例，總有效率為79.16%。2組總有效率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

4.3 2組治療前后主要癥狀計(jì)分比較 見表2 。治療后，2組主要癥狀腹瀉均明顯改善，治療后2周、治療后4周癥狀計(jì)分與治療前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表2 2組治療前后主要癥狀計(jì)分比較() 分

表2 2組治療前后主要癥狀計(jì)分比較() 分

與治療前比較，①P＜0.05

組別治療組對照組n 24 24治療前7.24±0.25 7.31±0.17治療后2周3.65±0.42①3.89±0.38①治療后4周2.14±0.16①2.61±0.20①

4.4 2組治療前后 NLRP-3、PGRP-4蛋白及mRNA表達(dá)比較 見表3 。治療前，PI-IBS患者結(jié)腸黏膜NLRP-3表達(dá)上升、PGRP-4表達(dá)下降；治療后，治療組患者結(jié)腸黏膜NLRP-3表達(dá)下降、PGRP-4表達(dá)上升，與治療前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而對照組患者治療后結(jié)腸黏膜NLRP-3、PGRP-4蛋白及mRNA表達(dá)與治療前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表3 2組治療前后NLRP-3、PGRP-4蛋白及mRNA表達(dá)比較()

表3 2組治療前后NLRP-3、PGRP-4蛋白及mRNA表達(dá)比較()

與治療組治療前比較，①P＜0.05；與對照組治療前比較，②P＞0.05

組別治療組n對照組時(shí)間治療前治療后治療前治療后24 24 24 24 NLRP-3蛋白1.46±0.14 0.86±0.11①1.42±0.12 1.37±0.09②PGRP-4蛋白0.82±0.07 1.38±0.10①0.86±0.13 0.75±0.08②NLRP-3 mRNA 1.52±0.10 0.85±0.15①1.54±0.08 1.49±0.11②PGRP-4 mRNA 0.89±0.06 1.44±0.13①0.92±0.14 0.86±0.08②

5 討論

流行病學(xué)資料已明確證實(shí)胃腸道感染與IBS之間存在密切聯(lián)系，有學(xué)者依據(jù)羅馬Ⅲ型標(biāo)準(zhǔn)將PI-IBS的定義為以前未患IBS個(gè)體，早期胃腸道感染恢復(fù)后出現(xiàn)IBS癥狀；胃腸道感染符合以下2條或2條以上特征：發(fā)熱，嘔吐，腹瀉，糞便標(biāo)本致病微生物培養(yǎng)陽性[7]。中醫(yī)學(xué)將PI-IBS歸屬于泄瀉范疇，誠所謂“泄瀉之由，無不由于脾胃”。PI-IBS從臨床特點(diǎn)看“其病乍發(fā)乍止”，與休息痢病機(jī)相似，《諸病源候論》指出其形成是由于腸胃虛弱，胃管有停飲，冷熱氣乘之而成。筆者在上述理論指導(dǎo)下，提出溫中健脾為本，佐以清熱化濕為標(biāo)，應(yīng)用連理湯治療PI-IBS患者臨床療效可靠，該方具有明確緩解腹瀉、腹痛及腹部不適的效用，其療效與得舒特基本相似。

早期胃腸道感染導(dǎo)致的腸道黏膜損傷、腸道屏障功能受損、腸道通透性改變和腸道微生物失衡，以淋巴細(xì)胞浸潤、炎癥因子釋放、腸神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞增殖等為主要表現(xiàn)的腸道持續(xù)性、低級別炎癥反應(yīng)狀態(tài)，腸道感覺、運(yùn)動功能和腦-腸軸功能異常等因素都可能參與PI-IBS的發(fā)病機(jī)制[8]。NLRP-3炎癥小體是由NOD樣受體分子3、IL-1β、ASC等分子構(gòu)成蛋白復(fù)合體，主要表達(dá)于上皮細(xì)胞，屬于一種可調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的胞內(nèi)受體，參與機(jī)體先天免疫防御[9]。有研究證實(shí)，PI-IBS患者小腸細(xì)菌過度生長，導(dǎo)致NLRP-3炎癥小體表達(dá)上升，促使caspase-1活化，從而裂解前體形成的IL-1β使其成為有生物活性的IL-1β，同時(shí)，NLRP-3炎癥小體可誘導(dǎo)激活Toll樣受體識別后激活NF-κB途徑，從轉(zhuǎn)錄水平增加固有層巨噬細(xì)胞中IL-1β前體的表達(dá)，從而引發(fā)腸道炎癥反應(yīng)[10]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，治療前，PI-IBS患者NLRP-3表達(dá)增加，該變化與患者臨床癥狀呈正相關(guān)；而予中藥連理湯治療后，患者PGRP-4表達(dá)下降并伴隨癥狀逐步改善。

肽聚糖作為先天免疫理想靶標(biāo)，在宿主體內(nèi)是不能自行產(chǎn)生的，而多源于外來抗原，是重要的病原相關(guān)模式分子，而肽聚糖結(jié)合識別蛋白(PGRPs)通過識別肽聚糖，水解肽聚糖，并阻斷Toll樣受體信號通路，誘導(dǎo)產(chǎn)生抗菌肽，發(fā)揮殺菌作用[11～12]。PGRP-4主要表達(dá)于腸黏膜上皮細(xì)胞，具有直接殺菌和清道夫作用，參與機(jī)體炎癥反應(yīng)，能夠幫助機(jī)體維持健康的腸道菌群，保護(hù)宿主免受結(jié)腸炎的損害[13～14]。本研究發(fā)現(xiàn)，治療前，PI-IBS患者結(jié)腸黏膜PGRP-4表達(dá)下降，該變化與患者臨床癥狀呈正相關(guān)；而予中藥連理湯治療后，患者PGRP-4表達(dá)上調(diào)并伴隨癥狀逐步改善。

綜上，連理湯能緩解PI-IBS腹痛、腹瀉等癥狀，筆者推測其效用靶點(diǎn)可能與下調(diào)NLRP-3表達(dá)，上調(diào)PGRP-4表達(dá)，提高腸道先天免疫反應(yīng)，維持腸黏膜免疫屏障完整相關(guān)。

[1]Nielsen HL，Engberg J，Ejlertsen T，et al.Psychometric scores and persistence of irritable bowel after Campylobacter concisus infection[J].Scand J Gastroenterol，2014，49(5)：545-551.

[2]Dickinson B，Surawicz CM.Infectious diarrhea：a n overview[J].Curr Gastroenterol Rep，2014，16(8)：399.

[3]Schwille-Kiuntke J，Unverdorben A，Weimer K，et al.Bacterial infections in childhood：A risk factor for gastrointestinal and other diseases?[J].United European GastroenterolJ，2015，3(1)：31-38.

[4]Wouters MM，Van Wanrooy S，Nguyen A，et al.Psychological comorbidity increases the risk for postinfectious IBS partly by enhanced susceptibility to develop infectious gastroenteritis[J].Gut，2015：gutjnl-2015-309460.

[5]Drossman DA.RomeⅢ：the new criteria[J].Chin J Dig Dis，2006，7(4)：181-185.

[6]中華中醫(yī)藥學(xué)會.中醫(yī)內(nèi)科常見疾病診療指南·西醫(yī)疾病部分[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2008：112-116.

[7]Kanazawa M，Palsson OS，van Tilburg MA，et al.Motility response to colonic distention is increased in postinfectious irritable bowel syndrome(PI-IBS)[J].NeurogastroenterolMotil，2014，26(5)：696-704.

[8]Kanazawa M，F(xiàn)ukudo S.Relationship between infectious gastroenteritis and irritable bowel syndrome[J].Clin J Gastroenterol，2014，7(1)：14-18.

[9]Yen H，Sugimoto N，Tobe T.Enteropathogenic Escherichia coli Uses NleA to Inhibit NLRP3 Inflammasome Activation[J].PLoS Pathog，2015，11(9)：e1005121.

[10]Sun YL，Zhang M，Chen CC，et al.Stress-induced corticotropin-releasing hormone-mediated NLRP6 inflammasome inhibition and transmissible enteritis in mice[J].Gastroenterology，2013，144(7)：1478-1487.

[11]Nanau RM，Neuman MG.Metabolome and inflammasome in inflammatory bowel disease[J].Transl Res，2012，160(1)：1-28.

[12]Saha S，Jing X，Park SY，et al.Peptidoglycan recognition proteins protect mice from experimental colitis by promoting normal gut flora and preventing induction of interferon-gamma[J].Cell Host Microbe，2010，8(2)：147-162.

[13]RichardsonWM，Sodhi CP，Russo A，et al.Nucleotide-binding oligomerization domain-2 inhibits tolllike receptor-4 signaling in the intestinal epithelium[J].Gastroenterology，2010，139(3)：904-917.

[14]Lee J，Geddes K，Streutker C，et al.Role of mouse peptidoglycan recognition protein PGLYRP2 in the innate immune response to Salmonella enterica serovar Typhimurium infection in vivo[J].InfectImmun，2012，80(8)：2645，2654.

（責(zé)任編輯：駱歡歡，李海霞）

R574.4

A

0256-7415（2016）05-0080-04

10.13457/j.cnki.jncm.2016.05.031

2016-01-22

廉潔（1983-），女，住院醫(yī)師，主要從事脾胃病科臨床工作。