5種中草藥對凡納濱對蝦生長和抗病力的影響

黃永春， 陳輝輝， 涂晨凌， 于慧娟

(1.集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，福建廈門 361021；2.福建省海洋漁業(yè)資源與生態(tài)環(huán)境重點實驗室,福建廈門 361021)

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5種中草藥對凡納濱對蝦生長和抗病力的影響

黃永春1，2， 陳輝輝1， 涂晨凌1， 于慧娟1

(1.集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，福建廈門 361021；2.福建省海洋漁業(yè)資源與生態(tài)環(huán)境重點實驗室,福建廈門 361021)

凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)俗稱南美白對蝦，是世界三大養(yǎng)殖蝦類品種之一。由于生長迅速、抗逆性強、出肉率高、耐高密度和低鹽度養(yǎng)殖，使得該種蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量占蝦類總產(chǎn)量的80%以上，已成為我國主要的對蝦養(yǎng)殖品種。隨著蝦養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大、集約化程度的提高以及蝦生存環(huán)境的惡化，疾病的危害程度越來越大。特別是對蝦白斑綜合癥病毒 (White spot syndrome virus,WSSV)是迄今為止危害最為嚴(yán)重的一種對蝦病毒，感染蝦7～10 d內(nèi)死亡率可達80%～100%[1]。養(yǎng)殖生產(chǎn)上使用抗生素和其他化學(xué)類藥物來防治，容易打破生物間相互依賴、相互制約的生態(tài)平衡，抑制有益藻類的繁殖給對蝦健康養(yǎng)殖帶來了嚴(yán)重后果。

中草藥具有天然、高效、毒副作用小、不易產(chǎn)生抗藥性等特點，且藥中某些成分既有抗菌作用又有免疫作用，能改善機體的免疫狀態(tài)和提高自身抗病能力，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用越來越受到關(guān)注[2-3]。目前，Kumaran T等[4]、Balasubramanian G等[5]、Yogeeswaran A等[6]和Balasubramanian等[7-8]研究發(fā)現(xiàn)采用中草藥提取物投喂斑節(jié)對蝦(Penaeusmonodon)可以顯著增強其對 WSSV 侵染的抵抗力。郭志勛等[9]和陰曉麗等[10]研究發(fā)現(xiàn)番石榴(PsidiumguajavaL.)葉水提取物對WSSV 有一定的殺滅作用。另外，楊清華等[11]和吳俊文[12]研究表明在飼料中添加復(fù)方中草藥投喂凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)可以提高對蝦對 WSSV 的抗病能力。筆者將黃芩、黃芪、板藍根、柴胡、茯苓和甘草5種中草藥超微粉碎后分別以相同質(zhì)量分?jǐn)?shù)量加入到對蝦基礎(chǔ)飼料中，比較各種中草藥在對蝦抗WSSV的效果，為對蝦健康養(yǎng)殖提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1中草藥。5種中草藥(黃芪、板藍根、柴胡、甘草和茯苓)干燥超微粉碎后分別以質(zhì)量分?jǐn)?shù)的1.5%加入到基礎(chǔ)飼料中。

1.1.2試驗材料。從漳浦養(yǎng)蝦場購買健康凡納濱對蝦2 000尾，體長(2.36±0.42)cm，體質(zhì)量(0.35±0.11)g。

1.1.3試驗飼料。試驗用基礎(chǔ)飼料組成為優(yōu)質(zhì)魚粉、蝦殼粉、面粉、豆粕、酵母粉、多礦、多維、誘食劑等，在此基礎(chǔ)上添加中草藥制劑，添加量分別為1.5 g/kg。飼料主要營養(yǎng)水平為粗蛋白42.50%，粗脂肪6.5%，粗灰分10.2%，水分8.6%，鈣2.2%，磷1.0%。

1.2方法

1.2.1生長試驗。對蝦經(jīng)暫養(yǎng)7 d后，分為對照組和5個中草藥組(黃芪、板藍根、柴胡、甘草和茯苓)，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)60尾對蝦，放置在200 L實驗桶中，適應(yīng) 3 d后分別投喂基礎(chǔ)飼料和5種添加中草藥的試驗飼料。日投喂量按體重的3%～5%，分3次(7：30、14：00、19:30)投喂，每天換水10%～15%，全程充氧，水溫為(27.1±1.2) ℃，鹽度為 28‰，養(yǎng)殖試驗持續(xù)35 d。試驗結(jié)束時，對每個桶中的對蝦進行稱重，并按照以下公式計算增重率、特定生長率、飼料系數(shù)和存活率：

增重率(WGR, %) = (Wt-Wo)/Wo×100

(1)

特定生長率(SGR, %/d) = (lnWt-lnWo)/t×100

(2)

飼料系數(shù)(FCR) =F/(Wt-Wo)

(3)

存活率(SR, %) =Nt/No×100

(4)

式中，Wt和Wo分別為魚的終末體重(g)和初始體重(g)；t為試驗天數(shù)(d)；Nt和No分別為t天后和初始魚的尾數(shù)；F為t天內(nèi)攝食的飼料量(g)。

1.2.2消化酶及血清免疫酶的活性測定。飼養(yǎng)滿35 d后對試驗對蝦饑餓24 h，每桶隨機抽取 10 尾(每組3桶)進行解剖，取肝胰臟組織立即投入-196 ℃液氮中，轉(zhuǎn)移至實驗室放置于-80 ℃冰箱中保存待測。

消化酶及免疫酶的活性測定將解凍后的肝胰腺稱重，加入10倍體積(V/W)的預(yù)冷生理鹽水，在冰水浴中勻漿5 min。采用低溫高速離心機(4 ℃, 4 000 r/min, 20 min)對勻漿液進行離心，吸取上清，即為粗酶液。淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶活性及氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、過氧化物酶(POD)的活性和總蛋白(TP)含量均使用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒測定。

1.2.3感染試驗。試驗結(jié)束后，每桶隨機抽取 30 尾(每組3桶)，投喂經(jīng)檢測感染 WSSV的新鮮病蝦，剁碎后按體重的5%～10%投喂，每天正常投喂、吸污、換水，定時檢查蝦的活動情況，及時收集、編號、保存(-80 ℃)死亡對蝦，計算存活率。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析采用 SPSS 11.5統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計與分析，先對試驗數(shù)據(jù)進行單因素方差分析(ANOVA)，并進行 Duncan’s多重比較法分析平均數(shù)的差異顯著性(P<0.05)。

2結(jié)果與分析

2.1中草藥對凡納濱對蝦的生長、 成活率和飼料系數(shù)的影響由表1可知，不同中草藥對凡納濱對蝦的生長、成活率和飼料系數(shù)的影響不同。從增重率來看，茯苓組>黃芪組>甘草組>柴胡組>板藍根組>對照組，其中黃芪組與甘草組以及柴胡組、板藍根組和對照組之間差異不顯著(P>0.05)外，其他組差異顯著(P<0.05)。各組特定生長率大小為茯苓組>黃芪組>甘草組>柴胡組>板藍根組>對照組，其中黃芪組與甘草組以及柴胡組、板藍根組和對照組之間差異不顯著(P>0.05)外，其他組差異顯著(P<0.05)。各組的飼料系數(shù)的大小為茯苓組<黃芪組<甘草組<柴胡組<板藍根組<對照組，其中茯苓組、黃芪組和甘草組以及柴胡組、板藍根組和對照組之間差異不顯著(P>0.05)外，其他組差異顯著(P<0.05)。各組凡納濱對蝦的成活率大小為板藍根組>柴胡組>黃芪組>甘草組>茯苓組>對照組，除對照組之間差異不顯著(P>0.05)，其他組差異顯著(P<0.05)。

表1　中草藥對凡納濱對蝦生長指標(biāo)的影響

注：同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

Note: Different lowercases in the same column stand for significant differences(P<0.05).

2.2中草藥對凡納濱對蝦消化酶活力的影響由表2可知，不同中草藥對凡納濱對蝦肝胰腺消化酶活性的影響不同。從淀粉酶活性來看，各組淀粉酶活性大小為茯苓組>甘草組>黃芪組>板藍根組>柴胡組>對照組，除茯苓組與其他組差異顯著(P<0.05)外，黃芪組和甘草組以及柴胡組、板藍根組和對照組之間差異不顯著(P>0.05)。各組脂肪酶活性大小為甘草組>茯苓組>黃芪組>對照組>柴胡組>板藍根組，其中茯苓組和甘草組以及黃芪組、柴胡組、板藍根組和對照組之間差異不顯著(P>0.05)外，其他組差異顯著(P<0.05)。各組蛋白酶活性大小為茯苓組>黃芪組>甘草組>板藍根組>對照組>柴胡組，其中黃芪組和甘草組以及柴胡組、板藍根組和對照組之間差異不顯著(P>0.05)，其他組差異顯著(P<0.05)。

表2　中草藥對凡納濱對蝦肝胰臟消化酶的影響

注：同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

Note: Different lowercases in the same column stand for significant differences(P<0.05).

2.3中草藥對凡納濱對蝦非特性免疫指標(biāo)的影響由表3可知，中草藥影響凡納濱對蝦肝胰腺非特異性免疫力。從SOD活性來看，各組SOD活性大小順序為板藍根組>柴胡組>黃芪組>甘草組>茯苓組>對照組，其中板藍根組、柴胡組、黃芪組和甘草組以及茯苓組和對照組之間差異不顯著(P>0.05)，其他組差異顯著(P<0.05)。各組AKP活性大小順序為板藍根組>甘草組>黃芪組>柴胡組>茯苓組>對照組，其中板藍根組、甘草組、黃芪組和柴胡組之間差異不顯著(P>0.05)，其他組差異顯著(P<0.05)。各組ACP活性大小順序為板藍根組>甘草組>黃芪組>對照組>柴胡組>茯苓組，各組之間差異不顯著(P>0.05)。各組POD活性大小順序為板藍根組>黃芪組>甘草組>柴胡組>茯苓組>對照組，其中板藍根組、柴胡組、黃芪組和甘草組之間差異不顯著(P>0.05)，其他組差異顯著(P<0.05)。

表3　中草藥對凡納濱對蝦肝臟非特異性免疫力的影響

注：同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

Note: Different lowercases in the same column stand for significant differences(P<0.05).

2.4中草藥制劑對凡納濱對蝦抗病力的影響由表4可知，經(jīng)過感染試驗后，各組凡納濱對蝦的半致死時間大小為柴胡組>板藍根組>黃芪組>甘草組>茯苓組>對照組，柴胡組、板藍根組、黃芪組、甘草組和茯苓組半致死時間分別比對照組延長了35.50、34.17、29.87、29.34和4.47 h，其中板藍根組、柴胡組、黃芪組和甘草組之間差異不顯著(P>0.05)，其他組差異顯著(P<0.05)。不同中草藥對凡納濱對蝦抗WSSV的效果表現(xiàn)為柴胡組>黃芪組>板藍根組>甘草組>茯苓組>對照組，柴胡組、黃芪組、板藍根組、甘草組和茯苓組凡納濱對蝦的存活率與對照組相比分別提高5.36%、5.22%、5.04%、3.22%和1.25%，其中板藍根組、柴胡組和黃芪組之間差異不顯著(P>0.05)，其他組差異顯著(P<0.05)。

表4中草藥對凡納濱對蝦抗WSSV的影響

Table 4The effects of Chinese herbs on WSSV-resistance ofLitopenaeusvannamei

處理組Processinggroup半致死時間Medianlethaltime∥h存活率Survivalrate∥%對照組CK98.33±8.63b6.83±2.63d黃芪組A.membranaceusgroup128.20±6.57a12.05±3.52a板藍根組I.indigoticagroup132.50±10.50a11.87±1.56a柴胡組B.chinensegroup133.83±12.33a12.19±1.86a甘草組G.uralensisgroup127.67±6.33a10.05±3.21b茯苓組W.cocosgroup102.80±10.25b8.08±2.65c

注：同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

Note: Different lowercases in the same column stand for significant differences(P<0.05).

3討論與結(jié)論

中草藥作為一種天然物質(zhì)，具有來源廣泛、價格低廉、不宜導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點。目前，已有200 余種中草藥具有多種免疫活性且影響和調(diào)節(jié)動物機體的免疫功能[2]。中草藥除含有藥用功效的成分外，還含有蛋白質(zhì)、多糖、脂類、微量元素、維生素等營養(yǎng)成分，因而中草藥具有增強機體免疫力、調(diào)整機體新陳代謝、增強抗應(yīng)激能力、抗菌抑菌、促消化吸收、促生長、殺蟲驅(qū)蟲等功能，適合作為免疫增強劑應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)[13-15]。

中草藥黃芩(Astraogalusmembranaceusvar. mongholicus)含有黃芩多糖及甙類等多種微量有益物質(zhì)，有增強機體免疫功能、促進生長的作用[15-16]；甘草(GlycyrrhizauralensisFisch)的主要成分是三萜類化合物(甘草酸、甘草次酸、甘草內(nèi)酯等)、黃酮化合物(甘草素、甘草醇、甘草利酮、甘草查耳酮等)、糖類、生物堿類、香豆素類等，是一種補益中草藥，具有抗炎、抗氧化、抗病毒和抗腫瘤等生理活性[17]，將黃芪和甘草添加到基礎(chǔ)飼料中可以明顯增強對蝦的免疫性能。該試驗中黃芪組和甘草組對蝦的AKP、ACP、POD和SOD均表現(xiàn)出較高的活力。板藍根(Radixisatidis)的有效成分為靛苷、靛紅、靛藍、葡萄糖蕓香素、棕櫚酸和氨基酸等，具有清熱解毒、涼血等功效，對流感病毒、乙型腦炎病毒和腮腺炎病毒有抑制其感染和增殖的作用[18-19]；柴胡(Bupleurumchinense)的有效成分為皂苷、甾醇、揮發(fā)油、有機酸、黃酮、多糖等，柴胡具有鎮(zhèn)靜、止痛、降溫、鎮(zhèn)咳、抗炎、抗菌、保肝利膽、降血壓、抗病毒、抗腫瘤等生理活性[20]。添加在基礎(chǔ)飼料中投喂35 d后的攻毒感染試驗表明，試驗對蝦比對照組存活率提高56.41%和55.20%。茯苓(Poria)含茯苓多糖、三萜類化合物茯苓素、茯苓聚糖分解酶、脂肪酶及蛋白酶等多種有益物質(zhì), 具有促進消化、吸收等功能[15，21]。該研究中茯苓組試驗對蝦肝胰腺消化酶(淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶)活性明顯優(yōu)于其他組。因此，不同中草藥由于其有效成分不同，其發(fā)揮的功能也不同，就生長而言茯苓促生長作用較佳，黃芪、板藍根、柴胡和甘草可以明顯提高免疫力和抗病性能。張耀等[22]在飼料中添加中草藥黃芪、黃岑(Radixscutellaria)、板蘭根、茯苓、魚腥草(Houttuyniacordata)等藥用植物，發(fā)現(xiàn)可以通過改善動物腸道內(nèi)環(huán)境，促進有益菌增殖，抑制有害菌的繁殖，從而提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化率；王蕓等[23]用魚腥草、黃芪、大黃(Rheumofficinale)、甘草和黃芩的水提取物按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%添加在飼料中連續(xù)飼養(yǎng)28 d，發(fā)現(xiàn)黃芪、大黃和甘草能夠促進凡納濱對蝦的生長及非特異性免疫功能，注射鰻弧菌攻毒試驗的結(jié)果表明黃芪、大黃和甘草的累計死亡率均低于對照組，免疫保護率為 37%～46%；湯菊芬等[24]在飼料中添加黃芪、當(dāng)歸(Angelicasinensis)、陳皮(CitrusreticulataBlanco)、金銀花(Lonicerajaponica)、板藍根、連翹(Forsythiasuspensa)等6種中草藥，結(jié)果表明試驗組凡納濱對蝦的增重率、成活率、飼料系數(shù)、蛋白質(zhì)效率、抗病力等指標(biāo)均優(yōu)于對照組。該研究結(jié)果與江湧等[25]、周歧存等[26]和葉建生等[27]中草藥制劑對凡納濱對蝦生長和消化酶活性的影響的研究結(jié)果相同。

隨著對蝦養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大、集約化程度的提高以及蝦生存環(huán)境的惡化，疾病的危害程度越來越大，給養(yǎng)蝦生產(chǎn)造成了巨大損失，而使用抗生素和其他化學(xué)類藥物來防治養(yǎng)殖病害，容易引發(fā)一系列環(huán)境問題和社會問題。為此，利用中草藥這一綠色、環(huán)保藥物和添加劑提高蝦體自身非特異性免疫能力和抗病能力，減少漁藥使用，生產(chǎn)綠色對蝦產(chǎn)品，促進對蝦可持續(xù)健康發(fā)展。該試驗結(jié)果表明黃芪、板藍根、柴胡、甘草和茯苓可以明顯提高凡納濱對蝦的生長和抗病力，其中茯苓促生長較佳，而黃芪、板藍根、柴胡和甘草可以明顯提高免疫力和抗病性能。

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摘要[目的] 研究不同中草藥對凡納濱對蝦生長和抗病的影響，為對蝦的健康養(yǎng)殖提供科學(xué)依據(jù)。[方法] 將黃芪、板藍根、柴胡、甘草和茯苓經(jīng)超微粉碎后，分別添加1.5%到基礎(chǔ)飼料中，飼喂凡納濱對蝦35 d， 研究其對凡納濱對蝦的生長、成活率、飼料系數(shù)、消化酶活力、非特性免疫指標(biāo)及感染W(wǎng)SSV后的抗病力的影響。[結(jié)果] 各組凡納濱對蝦的增重率和特定生長率大小順序均為茯苓組>黃芪組>甘草組>柴胡組>板藍根組>對照組。各組餌料系數(shù)的大小順序為茯苓組<黃芪組<甘草組<柴胡組<板藍根組<對照組。各組對蝦存活率的大小順序為板藍根組>柴胡組>甘草組>黃芪組>茯苓組>對照組。不同中草藥對凡納濱對蝦肝胰腺消化酶活性的影響不同。各組淀粉酶大小順序為茯苓組>甘草組>黃芪組>板藍根組>柴胡組>對照組；各組脂肪酶大小順序為甘草組>茯苓組>黃芪組>對照組>柴胡組>板藍根組；各組蛋白酶大小順序為茯苓組>黃芪組>甘草組>板藍根組>對照組>柴胡組。5種中草藥對凡納濱對蝦肝胰腺非特異性免疫力有影響，其中黃芪組和甘草組對蝦的AKP、ACP、POD和SOD活力較高。感染W(wǎng)SSV后，各組凡納濱對蝦的半致死時間順序為柴胡組>板藍根組>黃芪組>甘草組>茯苓組>對照組，各組存活率大小順序為柴胡組>黃芪組>板藍根組>甘草組>茯苓組>對照組。[結(jié)論] 中草藥制劑可以明顯提高凡納濱對蝦的生長和抗病力。其中，茯苓的促生長作用較佳，而黃芪、板藍根、柴胡和甘草可以明顯提高其抗病力。

關(guān)鍵詞中草藥；凡納濱對蝦；生長；消化酶；免疫酶；WSSV

Effects of Five Species of Chinese Herbs on the Growth and Disease-resistance ofLitopenaeusvannamei

HUANG Yong-chun1,2，CHEN Hui-hui1, TU Chen-ling1et al (1.Fishery College of Jimei University, Xiamen, Fujian 361021; 2. Fujian Provincial Key Laboratory of Marine Fishery Resources and Eco-environment, Xiamen, Fujian 361021)

Abstract[Objective] To study the effects of different Chinese herb on the growth and disease-resistance ofLitopennausvannameiand provide scientific basis for the healthy culture ofL.vannamei. [Method] 1.5%Astraogalusmembranaceusvar. mongholicus,IsatisindigoticaFortune,Bupleurumchinense,GlycyrrhizauralensisFisch andWolfiporiacocoswere added in the basal diet after superfine comminution to feedL.vannameifor 35 d. Their effects on the growth, survival rate, feed coefficient, digestive enzyme activity, non-specific immune indices, and disease-resistance after infecting WSSV ofL.vannameiwere studied. [Result] The weight gain rate and specific growth rate orders ofL.vannameiin test groups wereW.cocosgroup>A.membranaceusgroup>G.uralensisgroup>B.chinensegroup>I.indigoticagroup>control group. The feed coefficient order ofL.vannameiin test groups wasW.cocosgroupB.chinensegroup>G.uralensisgroup>A.membranaceusgroup>W.cocosgroup>control group. Five species ofL.vannameihad different effects on the activities of digestive enzymes in the hepatopancreas ofL.vannamei. The amylase activity order ofL.vannameiin test groups wasW.cocosgroup>G.uralensisgroup>A.membranaceusgroup>I.indigoticagroup>B.chinensegroup>control group. The lipase activity order ofL.vannameiin test groups wasG.uralensisgroup>W.cocosgroup>A.membranaceusgroup>control group>B.chinensegroup>I.indigoticagroup. The protease activity order ofL.vannameiin test groups wasW.cocosgroup>A.membranaceusgroup>G.uralensisgroup>I.indigoticagroup>control group>B.chinensegroup. Five species ofL.vannameiinfluenced the non-specific immune indices ofL.vannamei. The actives of AKP, ACP, POD and SOD inL.vannameiinA.membranaceusgroup andG.uralensisgroup were higher. The median lethal time order ofL.vannameiinfected with WSSV in test groups wasB.chinensegroup>I.indigoticagroup>A.membranaceusgroup>G.uralensisgroup>W.cocosgroup>control group. The survival rate order ofL.vannameiin test groups wasB.chinensegroup>A.membranaceusgroup>I.indigoticagroup>G.uralensisgroup>W.cocosgroup>control group. [Conclusion] Chinese herbal preparations can significantly improve the growth and disease-resistance ofL.vannamei. Among these Chinese herbs, the growth-promoting effect ofW.cocosis the best, andA.membranaceus,I.indigotica,B.chinenseandG.uralensiscan significantly improve the disease-resistance ofL.vannamei.

Key wordsChinese herbs;Litopenaeusvannamei; Growth; Digestive enzyme; Immune enzyme; WSSV

收稿日期2015-12-09

作者簡介黃永春(1966- )男，福建長汀人，副教授，博士，從事水產(chǎn)健康養(yǎng)殖和良種選育研究。

基金項目福建省自然基金項目(2013J01139); 廈門市海洋經(jīng)濟創(chuàng)新發(fā)展區(qū)域示范項目(13PZY001SF25)。

中圖分類號S 945.4+9

文獻標(biāo)識碼A

文章編號0517-6611(2016)01-086-05