乙型肝炎病毒核心抗體定量與定性測定比較

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乙型肝炎病毒核心抗體定量與定性測定比較

張青葉

關(guān)鍵詞：化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法；酶聯(lián)免疫法；乙型肝炎病毒核心抗體；定量；定性

乙型肝炎是嚴(yán)重危害人類健康的傳染病。乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界性分布。我國是HBV感染的高發(fā)區(qū)，慢性感染者有1億多人[1]。HBV血清標(biāo)志物的檢測對乙型肝炎的診斷、療效觀察及預(yù)后判斷具有非常重要的意義。乙型肝炎核心抗體檢測可提示當(dāng)前或以往HBV感染，乙型肝炎病毒核心抗體(抗-HBc)濃度的高低可反映病毒感染的狀態(tài)，高濃度提示乙型肝炎急性感染。慢性乙型肝炎呈現(xiàn)抗-HBc持續(xù)高濃度[2]?？?HBc在急性HBV感染出現(xiàn)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)后不久便可在血清中檢測到，在HBsAg消失后和可檢測到乙型肝炎表面抗體(抗-HBs)之前，都將持續(xù)存在。在缺乏其他HBV標(biāo)志物相關(guān)信息的情況下，檢測到抗-HBc可能代表HBV活動性感染或感染可能已緩解。所以抗-HBc是HBV感染和潛在感染的唯一血清學(xué)標(biāo)志物[3]。國內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)室最常用的HBV感染者的血清學(xué)標(biāo)志物的檢測主要依靠酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法。而有研究顯示，根據(jù)HBV抗原抗體模式難以準(zhǔn)確地判斷病毒復(fù)制程度及其傳染性的強(qiáng)弱，因此也應(yīng)對HBV血清標(biāo)志物做定量分析。

1對象與方法

1.1對象選取住院乙型肝炎病人410例，分別進(jìn)行酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法。

1.2方法

1.2.1酶聯(lián)免疫法本研究采用的酶聯(lián)免疫法為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，儀器為Addcare ELISA1100，試劑為上海科華生物工程股份有限公司抗-HBc試劑盒。其原理是利用自動化儀器與酶聯(lián)免疫法結(jié)合完成測定。它采用基因工程重組乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)包被反應(yīng)板，加入待測樣本，同時(shí)加入抗-HBc-HRP,與抗原形成競爭結(jié)合。若待測樣本中抗-HBc含量高，則抗-HBc-HRP結(jié)合少，加入四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物時(shí)顯色淡，反之顯色深。

1.2.2化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法(chemiluminesent microparticle immuno assay,CMIA)采用的儀器為ARCHITECT i2000，試劑為ARCHITECT原裝抗-HBc試劑盒及質(zhì)控品、校準(zhǔn)品，其原理是利用重組乙型肝炎核心抗原包被微粒子以檢測Anti-HBc。采用兩步免疫測定法：首先利用待測樣本與項(xiàng)目稀釋液、樣本稀釋液和重組乙型肝炎核心抗原包被的順磁性微粒子混合，樣本中存在的抗-HBc與乙型肝炎核心抗原包被的順磁性微粒子結(jié)合，然后洗滌反應(yīng)結(jié)合物，再加入抗-人吖啶酯標(biāo)記結(jié)合物使其結(jié)合；再次洗滌后加入預(yù)激發(fā)液和激發(fā)液使其發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，測定產(chǎn)生的化學(xué)反應(yīng)的相對發(fā)光單位(RLUS)。血清中抗-HBc含量與RLUS值成正比。通過比較反應(yīng)中的化學(xué)發(fā)光信號和ARCHITECT抗-HBc校準(zhǔn)生成的臨界值，確定血清中是否存在抗-HBc?；瘜W(xué)發(fā)光信號大于或等于Cutoff信號可視為呈反應(yīng)性。

2結(jié)果(見表1)

表1　兩種檢測方法的抗-HBc陽性結(jié)果　例(%)

3討論

表1結(jié)果顯示，410例樣本中抗-HBc濃度值1.00 S/CO ～8.00 S/CO時(shí)酶聯(lián)免疫法檢測率為0；>8.00S/CO時(shí)也有2例未檢出。因此，酶聯(lián)免疫法檢測率較低，很容易造成漏檢。這可能是由于其受到方法學(xué)的限制，不能用于定量測定，對于微量樣本的檢出有局限性；而且操作過程中受多種因素影響，如內(nèi)源性補(bǔ)體、甲胎蛋白、類風(fēng)濕因子、自身抗體和外源性物質(zhì)的干擾，如乳糜、溶血血清，試劑盒質(zhì)量，洗板的質(zhì)量等，致使其檢測準(zhǔn)確度降低，甚至出現(xiàn)假陰性結(jié)果，難以準(zhǔn)確判斷病毒復(fù)制程度及其傳染性，無法判斷治療效果。但由于酶聯(lián)免疫法有著方法簡單、成本低廉、易于操作、適用于批量標(biāo)本檢測的特點(diǎn)，目前仍被大量應(yīng)用于對HBV血清學(xué)標(biāo)志物定性或半定性分析。

化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法是新一代超微量分析法。由于其化學(xué)發(fā)光劑發(fā)光穩(wěn)定、持續(xù)時(shí)間長[4]，可定量檢測血清中HBV抗原抗體的濃度，其原理先進(jìn)、標(biāo)記物簡單高效、線形范圍寬、特異性強(qiáng)、精密度高、自動化程度高、檢測速度快且結(jié)果準(zhǔn)確，可以有效防止漏檢；能準(zhǔn)確評估HBV蛋白合成水平，從而能評估HBV感染后病情轉(zhuǎn)歸及抗病毒治療效果等。樣本可以隨時(shí)測定，便于臨床更好、更快地掌握病人信息，以采取措施防止其發(fā)展成為乙型肝炎或慢性病毒攜帶者，同時(shí)也可為注射乙型肝炎疫苗提供指導(dǎo)。

參考文獻(xiàn)：

[1]楊旭,羅紅雨,張永紅,等.乙型肝炎病毒載量與抗原抗體模式的關(guān)系[J].中華肝臟病雜志,2002,10(4):269-271.

[2]Heijtink RA,Kruining J,Honkoop P,etal.Serum HbeAg quantitation during antiviral therapy for chronic hepatitis B[J].J Med Virol,1997,53(3):282-287.

[3]駱抗先.乙型肝炎基礎(chǔ)和臨床[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:207-336．

[4]Nahed Ismail,Geoffrey E,Fish,etal.Smith laboratory evaluation of a fully automated chemiluminescence immunoassay for rapid detection of HBsAg,antibodies to HBsAg,and antibodies to hepatitis C virus[J].J Clin Microbiol,2004,42(2):610-617.

(本文編輯崔曉芳)

(收稿日期：2015-06-24；修回日期：2016-01-28)

作者簡介張青葉，副主任檢驗(yàn)師，本科，單位：030001，山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院。

中圖分類號：R47

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：C

doi:10.3969/j.issn.1009-6493.2016.06.052

文章編號：1009-6493(2016)02C-0766-02