許聲豪

（福建省寧德市古田縣鶴塘鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，福建 古田 352265）

關(guān)于豬源鏈球菌的分離與鑒定思考

許聲豪

（福建省寧德市古田縣鶴塘鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，福建 古田 352265）

豬鏈球菌病指的是有多種致病鏈球菌感染所引起的一種人畜共患病，其主要特征為敗血癥、腦膜炎和關(guān)節(jié)炎等，是造成養(yǎng)殖戶(hù)減產(chǎn)的主要原因之一，若沒(méi)有及時(shí)控制和治療，還會(huì)威脅人的生命安全，給家庭和社會(huì)造成難以挽回的損失。當(dāng)前，受市場(chǎng)因素的影響，當(dāng)前我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)不斷發(fā)展和壯大，豬鏈球菌病的發(fā)病率隨之升高。本文從某養(yǎng)豬場(chǎng)內(nèi)分離到的多豬鏈球菌為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行了分離和鑒定，系統(tǒng)的分析了豬源鏈球菌的病原學(xué)特性，希望能夠?yàn)轲B(yǎng)豬業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展提供一些參考。

豬源鏈球菌；分離；鑒定；病原學(xué)特性

某養(yǎng)豬場(chǎng)飼養(yǎng)的40頭仔豬突發(fā)豬鏈球菌病，主要表現(xiàn)為體溫升高、呼吸不暢、食欲不振、嗜睡嚴(yán)重等癥狀，部分豬還出現(xiàn)了出血性紅斑、糞便過(guò)稀的情況。經(jīng)解剖檢查可見(jiàn)，患者腹部皮下組織、腹股溝淋巴結(jié)、肺部出血明顯[1]，脾胃腫脹、顏色變深，腎臟有少量紅色出血點(diǎn)。為抑制病情進(jìn)一步發(fā)展，該養(yǎng)豬場(chǎng)采用了抗菌藥物和抗生素對(duì)患豬進(jìn)行治療，但收效甚微。本文從病原學(xué)入手，對(duì)收集到的患豬病樣進(jìn)行了生態(tài)學(xué)、培養(yǎng)特性和血清血鑒定等試驗(yàn)，具體情況如下。

1 材料和方法

1.1 材料

分離和鑒定所用的材料均取自于該豬場(chǎng)病豬，主要有脾胃、淋巴結(jié)和皮膚等組織，所選用的工具均購(gòu)于市場(chǎng)，包括微量生化管、藥敏紙片、鏈球菌乳膠凝集標(biāo)準(zhǔn)診斷試劑盒等，豬鏈球菌2型陽(yáng)性血清、小白鼠由某農(nóng)業(yè)大學(xué)生物部提供。以上材料均符合試驗(yàn)要求。

1.2 細(xì)菌學(xué)檢查

取少量樣本，將其分別涂抹于普通瓊脂平板和鮮血瓊脂平板上，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)1 d，室內(nèi)溫度維持在36～37 ℃，革蘭氏染色后鏡檢。將鏡檢中發(fā)現(xiàn)的革蘭氏陽(yáng)性成雙或短鏈狀菌落接種到馬丁瓊脂平板和血清瓊脂平板上，繼續(xù)培養(yǎng)1 d，溫度36～37 ℃，完成上述步驟后，選取某些較為可疑的菌落進(jìn)行染色處理，鏡檢觀察，然后接種到THB培養(yǎng)基中，進(jìn)行增菌培養(yǎng)。THB培養(yǎng)基中應(yīng)有葡萄糖（0.2%）、犢牛血清（1%）等輔助培養(yǎng)成分[2]，培養(yǎng)溫度37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間1 d。

1.3 生化和生長(zhǎng)試驗(yàn)

將細(xì)菌學(xué)檢查中分離出來(lái)的純培養(yǎng)菌株取出，接種到血清瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間1 d，完成該步驟后，觀察培養(yǎng)基中出現(xiàn)溶血現(xiàn)象的菌落，按照步驟，將其中的典型部分分別接種到葡糖糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、山梨醇、木糖等培養(yǎng)基中，進(jìn)行常規(guī)生化試驗(yàn)和鑒別生化試驗(yàn)，記錄所得結(jié)果。最后，將不同培養(yǎng)基中生長(zhǎng)出的菌株分別接種到NaCl、馬尿酸鈉、七葉苷、明膠液化等培養(yǎng)基中，進(jìn)行生長(zhǎng)試驗(yàn)。

1.4 動(dòng)物致病性實(shí)驗(yàn)

選取8只體重為20～22 g左右的小白鼠，將THB培養(yǎng)皿培養(yǎng)朱的菌株，注射到4只小白鼠體內(nèi)，注射劑量為0.2 mL/只，另外4只注射生理鹽水，劑量0.2 mL/只，對(duì)比以上8只小白鼠的生存狀況。

1.5 溶血試驗(yàn)

溶血試驗(yàn)分為兩種，及平板法和接觸法。平板法指的是將鏈球菌接種在鮮血平板上（5%），培養(yǎng)溫度37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間1 d，觀察菌落的生長(zhǎng)情況，若其周?chē)忻黠@的溶血環(huán)，則判斷為陽(yáng)性。接觸法指的是將菌株接種在THB培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)溫度37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間1 d，然后取50 μ L菌液，滴注在頂板上，將其與血紅細(xì)胞混合，觀察1 h后得出鑒定結(jié)果。

1.6 藥敏試驗(yàn)

采用紙片擴(kuò)散法，將選定的鏈球菌接種在THB培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24 h后，將生理鹽水稀釋?zhuān)湃胝袷幤髦姓鹗?，得出渾濁液，在無(wú)菌操作中，使用習(xí)慣吸取0.2 mL放于血清瓊脂平板上，注意涂抹均勻，加蓋靜置5 min后將藥敏試紙貼在平板上，輕輕按壓，使其貼附在培養(yǎng)基表面。每個(gè)平板均貼5張藥敏試紙，試紙與試紙之間的距離應(yīng)在2 cm左右。完成以上操作后，將培養(yǎng)基放入溫箱，培養(yǎng)20～24 h，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。若抑菌圈直徑達(dá)到了15 mm或以上，則判斷為高度敏感，若抑菌圈直徑在10～15 mm之間，則判斷為中度敏感，若未超過(guò)10 mm，則判斷為耐藥[3]。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果

細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果顯示，菌落中有大量的革蘭氏陽(yáng)性、短鏈狀、散在的球菌。分離結(jié)果顯示，菌落在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況良好，大部分菌落呈圓形，表面光滑，邊緣整齊，顏色為灰色或者灰白色，并帶有一些小的菌落有明顯的β型溶血。普通瓊脂培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)狀況一般。

2.2 生化和生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)果

分離菌株受溫度影響較大，36～37 ℃時(shí)生長(zhǎng)良好，10 ℃或40 ℃時(shí)生長(zhǎng)不良或者不能生長(zhǎng)。分離菌株能夠發(fā)酵葡糖糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、山梨醇、木糖，NaCL、馬尿酸鈉、七葉苷、明膠液化的生化結(jié)果均為陰性。

2.3 動(dòng)物致病試驗(yàn)結(jié)果

接種病料的4四只白鼠均在20 h內(nèi)死亡，剖檢發(fā)現(xiàn)，白鼠的肝脾、腎臟組織明顯變大，膀胱充盈，胸腔積液，心臟出血。對(duì)白鼠胸腔積液進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢后發(fā)現(xiàn)，有很多單個(gè)或承兌的短鏈革蘭氏陽(yáng)性球菌。其余4只小白鼠存活情況良好，未出現(xiàn)不良反應(yīng)，此結(jié)果表明，分離菌株有較強(qiáng)的致病性。

2.4 溶血試驗(yàn)結(jié)果

兩種方法檢測(cè)結(jié)果均顯示為β型溶血。

2.5 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

分離菌株對(duì)頭孢噻呋、頭孢他啶、阿莫西林、氧氟沙星高敏，對(duì)阿米卡星、氯霉素、環(huán)丙沙星中敏，對(duì)青霉素、恩諾沙星、卡那霉素、紅霉素、慶大霉素、強(qiáng)力霉素、新霉素抗藥。

3 結(jié)論

根據(jù)以上檢驗(yàn)結(jié)果，若出現(xiàn)豬鏈球菌病史，應(yīng)先進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，避免濫用抗生素，根據(jù)實(shí)際情況選擇適當(dāng)?shù)慕o藥途徑，保證連續(xù)用藥。同時(shí)，做好綜合性的防護(hù)措施，搞好衛(wèi)生，定期消毒，加強(qiáng)管理，定期免疫接種，提高豬的抗病能力。

[1]江甜，胡智斌，谷長(zhǎng)勤，等.7型豬鏈球菌的分離鑒定及特性[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，31（10）.

[2]趙海忠，王生奎，張以芳.豬鏈球菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].湖北畜牧獸醫(yī)，2008，（5）：1453–1457.

[3]李肖梁，馬有智，方維煥，等.豬源鏈球菌的分離與鑒定[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2003，（10）：8-9.

（編輯：張淑鳳）

S852.61

B

1006-799X(2016)18-0105-01

許聲豪（1960-），男，福建古田人，獸醫(yī)師，主要從事獸醫(yī)工作。