白春俠

OPN和MMP-9在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義

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目的 探討骨橋蛋白（OPN）和基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）在膀胱移行細(xì)胞癌(bladder transitional cell carcinoma,BTCC)中的表達(dá)及臨床意義。方法 選取60例膀胱移行細(xì)胞癌患者，同時(shí)隨機(jī)選取20例非腫瘤患者，對其病理組織標(biāo)本進(jìn)行檢查，觀察OPN和MMP-9在膀胱移行細(xì)胞癌和正常膀胱組織中的表達(dá)以及OPN、MMP-9在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)與病理特征的關(guān)系。結(jié)果 OPN主要表達(dá)在細(xì)胞的細(xì)胞漿中，細(xì)胞癌組織中總陽性率為80.0%，正常膀胱組織中無陽性表達(dá)，OPN在BTCC中的陽性表達(dá)水平明顯高于正常膀胱組織陽性表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=13.33，P＜0.05）。MMP-9的主要表達(dá)在細(xì)胞的細(xì)胞漿中，正常膀胱組中中無陽性表達(dá)，細(xì)胞癌組織中總陽性率為68.4%，MMP-9在BTCC中的陽性表達(dá)水平明顯高于正常膀胱組織陽性表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.35，P＜0.05）。OPN在不同病理分級、臨床分期、是否復(fù)發(fā)、腫瘤數(shù)量方面的陽性表達(dá)率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），MMP-9在病理分級、臨床分期、是否復(fù)發(fā)方面的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 OPN和MMP-9在膀胱組織中的表達(dá)升高與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲具有密切關(guān)系，檢測OPN和MMP-9對膀胱移行細(xì)胞癌的診斷和預(yù)后判斷具有重要參考價(jià)值。

膀胱移行細(xì)胞癌；骨橋蛋白；基質(zhì)金屬蛋白酶9

膀胱癌是臨床常見惡性腫瘤，膀胱移行細(xì)胞癌是其中最多發(fā)的腫瘤[1]，誘發(fā)因素多，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，準(zhǔn)確的診斷和預(yù)后判斷對該病的診治具有重要意義。骨橋蛋白（OPN）屬于一種酸性糖蛋白，生物學(xué)功能多樣，與多數(shù)實(shí)體腫瘤細(xì)胞的侵襲和繁殖相關(guān)[2]?；|(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9)被認(rèn)為是腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲過程中的一種最重要、最直接的金屬蛋白酶。本研究分析了OPN和MMP-9在BTCC中的表達(dá)及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月～2014年12月營口市中心醫(yī)院收治的BTCC患者60例，男38例，女22例，年齡25～84歲，平均（62.5±5.8）歲。患者均經(jīng)病理學(xué)檢查確診，24例為初發(fā)腫瘤，36例為復(fù)發(fā)腫瘤；35例單發(fā)，25例多發(fā)；17例腫瘤直徑＞3 cm，43例腫瘤直徑≤3 cm；其中54例行經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切除術(shù)，2例行部分膀胱切除術(shù)，4例行全膀胱切除術(shù)。根據(jù)世界衛(wèi)生組織修訂的病理分級：18例G 1、19例G 2、23例G 3。腫瘤分期：21例淺表型、39例浸潤型。同時(shí)隨機(jī)選取20例非腫瘤患者的正常膀胱切除組織標(biāo)本，取自膀胱經(jīng)活組織檢查或開放手術(shù)。

1.2 方法 將用作免疫組織化學(xué)的玻片在洗潔精術(shù)中浸泡24 h，用水流沖洗，蒸餾水漂洗，然后將玻片浸泡在95%乙醇中24 h，蒸餾水漂洗，置入烤箱中徹底干燥。用蒸餾水將多聚-L-賴氨酸溶液稀釋10倍，將玻片在稀釋液中浸泡1～5 min，45℃烤箱烘干。對所有標(biāo)本組織進(jìn)行40%甲醛水溶液處理和石蠟包埋。利用自動切片機(jī)將處理好的標(biāo)本切成4 μm厚的切片3～4張，進(jìn)行漂片，然后貼附于玻片上，65℃烤箱烘烤4 h。利用梯度乙醇和二甲苯對切片進(jìn)行逐步脫蠟，用蒸餾水沖洗2次，3 min/次，用PBS沖洗3次，3 min/次。根據(jù)抗體說明書，對組織抗原給予相應(yīng)修復(fù)，OPN利用高壓高溫修復(fù)法，MMP-9無需修復(fù)。

1.3 結(jié)果評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 隨機(jī)選取在400倍光鏡下每張切片上的5個(gè)視野，每個(gè)視野的細(xì)胞計(jì)數(shù)為200，共100個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)；利用顯微圖像分析系統(tǒng)系統(tǒng)標(biāo)記具有代表性的陽性視野中的棕黃色顆粒，對所有視野的陽性結(jié)果進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化檢測，蛋白顆粒密度有參數(shù)積分光密度表示。細(xì)胞無棕色或背景一致為陰性，或陽性細(xì)胞＜5%，可判定為陰性：陽性細(xì)胞＜25%，判定為陽性；陽性細(xì)胞25%～50%為中等陽性；陽性細(xì)胞＞50%為強(qiáng)陽性[3]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計(jì)數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 OPN的表達(dá) OPN主要表達(dá)在細(xì)胞的細(xì)胞漿中，呈棕黃色顆粒，少見細(xì)胞核著色[4]。正常膀胱組織中無陽性表達(dá)，細(xì)胞癌組織中12例陽性表達(dá)（20.0%）、12例陰性（20.0%）、14例中等陽性（23.3%）、22例強(qiáng)陽性（36.7%），總陽性率為80.0%。OPN在BTCC中的陽性表達(dá)水平明顯高于正常膀胱組織陽性表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=13.33，P＜0.05）。

2.2 MMP-9的表達(dá) MMP-9的主要表達(dá)在細(xì)胞的細(xì)胞漿中，呈棕黃色顆粒，未見細(xì)胞核著色[5]。正常膀胱組中中無陽性表達(dá)，細(xì)胞癌組織中19例陰性表達(dá)（31.7%）、14例陽性（23.3%）、8例中等陽性（13.3%）、19例強(qiáng)陽性（31.7%），總陽性率為68.4%。MMP-9在BTCC中的陽性表達(dá)水平明顯高于正常膀胱組織陽性表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=22.57，P＜0.05）。

2.3 OPN、MMP-9在BTCC中的表達(dá)與病理特征的關(guān)系OPN在不同性別、腫瘤直徑方面的陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在不同病理分級、臨床分期、是否復(fù)發(fā)、腫瘤數(shù)量方面的陽性表達(dá)率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），G 1與G 2、G 1與G 3間的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），G 2與G 3間陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MMP-9在性別、腫瘤數(shù)量、腫瘤大小方面的陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在病理分級、臨床分期、是否復(fù)發(fā)方面的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

3 討論

膀胱癌是臨床常見泌尿系惡性腫瘤，其中BTCC是發(fā)生率最高的腫瘤，具有容易復(fù)發(fā)、浸潤性生長、多中心的特點(diǎn)[6]，隨著病情發(fā)展，最終可能成為轉(zhuǎn)移性或肌層浸潤性細(xì)胞癌。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤侵襲是由多種細(xì)胞因子和蛋白基因所決定的[4]，涉及細(xì)胞黏附、遷移、增殖等環(huán)節(jié)。目前臨床多通過BTCC的臨床分期和病理分級對預(yù)后進(jìn)行評估判斷[7]，但腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和浸潤是一個(gè)復(fù)雜的過程，因此預(yù)后判斷的準(zhǔn)確性并不理想。

找到能夠準(zhǔn)確預(yù)測BCTT腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、浸潤的相關(guān)指

標(biāo)，給予相應(yīng)治療，有助于降低復(fù)發(fā)率、提高患者的生存質(zhì)量。本研究結(jié)果顯示，OPN和MMP-9在BTCC組織中的表達(dá)高于其在正常膀胱組織中的表達(dá)，說明兩者在腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、浸潤過程中發(fā)揮一定作用。本研究中，OPN的陽性表達(dá)與患者性別、腫瘤數(shù)量、腫瘤大小無關(guān)，但與病理分級、臨床分期及復(fù)發(fā)情況等有密切聯(lián)系，在G 2、G 3中的表達(dá)明顯高于在G 1中的表達(dá)，說明OPN在高分化腫瘤組織中的表達(dá)低于低分化腫瘤，提示BTCC的病變程度與OPN表達(dá)相關(guān)。同時(shí)，OPN在淺表型腫瘤的表達(dá)低于浸潤型腫瘤，說明OPN表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的浸潤和增殖能力相關(guān)。相關(guān)研究顯示，MMP-9在多種惡性腫瘤中的陽性表達(dá)率均較高[8]。本研究中，MMP-9的在BTCC腫瘤組織中的陽性表達(dá)率隨著腫瘤病理分級的增高而上升，且在浸潤型腫瘤中的表達(dá)水平更高，說明MMP-9的表達(dá)和患者疾病臨床分期之間有密切聯(lián)系。

綜上所述，OPN和MMP-9是評估BTCC復(fù)發(fā)和惡性程度的重要指標(biāo)，為膀胱癌的臨床診治提供了科學(xué)的依據(jù)。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.1.013

遼寧 115000 營口市中心醫(yī)院病理科 （白春俠）