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      香芹中總黃酮提取工藝

      2016-03-27 17:26:50孫威振南陽(yáng)理工學(xué)院生化學(xué)院
      食品安全導(dǎo)刊 2016年24期
      關(guān)鍵詞:香芹電子天平乙醇溶液

      □孫威振 南陽(yáng)理工學(xué)院生化學(xué)院

      香芹中總黃酮提取工藝

      □孫威振 南陽(yáng)理工學(xué)院生化學(xué)院

      黃酮類化合物作為一種作用十分明顯的自由基清除劑,能夠抑制細(xì)菌生長(zhǎng),保持維生素C在人體內(nèi)含量 的穩(wěn)定性,在醫(yī)藥、保健、食品方面中有著廣泛的應(yīng)用。本研究通過(guò)設(shè)計(jì)香芹黃酮類化合物提取實(shí)驗(yàn),研究香芹葉中黃酮類化合物的提取方法,并測(cè)定其含量,探討香芹的利用價(jià)值。

      香芹是傘型的草本植物,在全國(guó)各地廣泛種植,是居民日常生活常用的食材,也是世界上用的最廣的一種草藥。香芹中所含的黃酮類化合物具有降血壓、防止動(dòng)脈硬化、抗衰老等作用。

      實(shí)驗(yàn)原料的準(zhǔn)備

      本實(shí)驗(yàn)所用的香芹由輔導(dǎo)老師臧晉陪同采購(gòu)自于南陽(yáng)市農(nóng)貿(mào)市場(chǎng),用自來(lái)水清洗,取葉片,經(jīng)60 ℃烘干后,粉碎過(guò)40目,貯存于棕色玻璃干燥器中,備用。

      香芹葉中總黃酮提取的工藝流程

      原料的預(yù)處理

      從棕色瓶取出經(jīng)過(guò)粉碎后的香芹葉,用一定量的石油醚進(jìn)行脫脂,倒出濾液,晾干,保存于干燥瓶中,備用。

      總黃酮的測(cè)定

      1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

      用萬(wàn)分之一電子天平精確稱量0.015 0 g蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品,倒入50 mL燒杯中,加入一定量的60%乙醇,將燒杯置于超聲波儀中使其快速溶解,使用冷水對(duì)目標(biāo)溶液進(jìn)行冷卻,將目標(biāo)溶液轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶中進(jìn)行定容,充分混勻,該標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液濃度0.3 mg/mL。

      用同一支吸量管吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液分別移入7只25 mL容量瓶中,每瓶中加入一管膠頭滴管的30%乙醇,搖勻后用移液管分別準(zhǔn)確加入5% NaNO20.75 mL,充分震蕩,靜置6 min后用移液管分別滴加0.75 mL 10%硝酸鋁溶液,充分震蕩,靜置6 min后,再分別加入10mL 4%氫氧化鈉溶液,充分震蕩,最后用乙醇定容7只容量瓶,充分震蕩后靜置12 min,在波長(zhǎng)為510 nm處進(jìn)行不同濃度溶液的吸光度測(cè)量并記錄。建立平面直角坐標(biāo)系,吸光度為橫坐標(biāo),濃度為縱坐標(biāo)橫坐標(biāo),將測(cè)定的數(shù)據(jù)進(jìn)行繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到標(biāo)準(zhǔn)方程為y=12.375x-0.001 9,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方程繪制當(dāng)R2=0.999 7的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

      總黃酮的提取

      用萬(wàn)分之一電子天平準(zhǔn)確稱取香芹葉粉末1.000 0 g倒入50 mL圓底燒瓶中,加入一定濃度的乙醇,放到設(shè)置好指定溫度的水浴鍋中,回流,一段時(shí)間后,取出,等溶液冷到室內(nèi)溫度,把回流液抽濾,再把抽濾后的溶液過(guò)濾,用玻璃棒引流到100 mL容量瓶中,并加入同樣濃度的乙醇定容。

      單因素實(shí)驗(yàn)

      1 乙醇濃度對(duì)香芹葉總黃酮得率的影響

      用萬(wàn)分之一電子天平準(zhǔn)確稱取香芹葉粉末1.000 0 g置入5O mL圓底燒杯中,然后用不同濃度的乙醇溶液,以10%為基礎(chǔ)進(jìn)行遞增,分別配置40%~80% 5種不同濃度的乙醇,然后將這5種不同濃度的乙醇每次用一種濃度加入到70 ℃的水浴鍋中,在回流裝置下提取時(shí)間為1 h結(jié)束后取出,冷卻到室內(nèi)溫度后,抽濾再過(guò)濾,將過(guò)濾操作后得到的溶液置入100 mL容量瓶中,再使用同濃度的乙醇溶液對(duì)其進(jìn)行定容。將該容量瓶?jī)?nèi)的溶液取1 mL置入25 mL容量瓶中,根據(jù)試驗(yàn)的相關(guān)要求對(duì)這1 mL溶液也進(jìn)行試劑添加并進(jìn)行吸光度數(shù)值測(cè)定。

      2 提取時(shí)間對(duì)香芹葉總黃酮得率的影響

      用萬(wàn)分之一電子天平準(zhǔn)確稱取香芹葉粉末1.000 0 g置入5O mL圓底燒杯中,向其中加入60 mL濃度為60%的乙醇溶液,并在水溫為70 ℃的水浴鍋中進(jìn)行回流操作,在操作過(guò)程中需要按照不同的時(shí)間進(jìn)行提取,以0.5 h為基礎(chǔ)進(jìn)行遞增,從0.5~2.5 h中選擇5個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行回流,回流結(jié)束后取出,冷卻到室內(nèi)溫度后抽濾再過(guò)濾,過(guò)濾操作后得到的溶液置入100 mL容量瓶中,再使用同濃度的乙醇溶液對(duì)其進(jìn)行定容。將該容量瓶?jī)?nèi)的溶液取1 mL置入25 mL容量瓶中,根據(jù)試驗(yàn)的相關(guān)要求對(duì)這1 mL溶液也進(jìn)行試劑添加并進(jìn)行吸光度數(shù)值測(cè)定。

      3 提取溫度對(duì)香芹葉總黃酮得率的影響

      用萬(wàn)分之一電子天平準(zhǔn)確稱取香芹葉粉末1.000 0 g倒入50 mL圓底燒杯中,加入60 mL 60%乙醇,具體來(lái)講以10 ℃為基礎(chǔ)進(jìn)行遞增,分別在50~90 ℃ 5個(gè)不同環(huán)境下的水浴鍋中進(jìn)行回流,在對(duì)其進(jìn)行1 h的處理之后完成回流操作,并且將其取出,冷卻到室內(nèi)溫度后抽濾再過(guò)濾,過(guò)濾操作后得到的溶液置入100 mL容量瓶中,再使用同濃度的乙醇溶液進(jìn)行定容。將該容量瓶?jī)?nèi)的溶液取1 mL置入25 mL容量瓶中,根據(jù)試驗(yàn)的相關(guān)要求對(duì)這1 mL溶液也進(jìn)行試劑添加并進(jìn)行吸光度數(shù)值測(cè)定。

      正交實(shí)驗(yàn)

      通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)確定較為合理的因素范圍,比較各單因素條件影響,從提取溫度、提取時(shí)間、乙醇濃度3個(gè)單因素條件中,分別選取3組較優(yōu)數(shù)據(jù)條件。設(shè)計(jì)L9(33)正交實(shí)驗(yàn),探究芹菜葉中乙醇回流提取工藝,獲得最優(yōu)工藝條件,并驗(yàn)證最佳工藝提取條件。

      結(jié)論與分析

      本實(shí)驗(yàn)在本系輔導(dǎo)老師的指導(dǎo)下,筆者通過(guò)對(duì)乙醇濃度、提取時(shí)間、提取溫度這三個(gè)因素對(duì)提取香芹葉中總黃酮的影響,使用乙醇回流法提取法提取香芹葉總黃酮。建立在單因素實(shí)驗(yàn)的條件上,在乙醇濃度為70%、提取時(shí)間1.5 h、溫度80℃這個(gè)最適宜的反應(yīng)條件中,整個(gè)提取過(guò)程得到的總黃酮率是18.47 mg /g。

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