萬紅才　段萍　徐作剛　曾琦

【摘 要】 目的：建立測定金烏骨通膠囊中原兒茶酸和原兒茶醛含量的方法。方法：采用高效液相色譜法；色譜條件：安捷倫 C18柱（250mm× 4.6mm，5μm），甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液為流動(dòng)相（梯度洗脫），流速：1.0ml/min；柱溫：35℃；檢測波長：256nm。結(jié)果：原兒茶酸在0.0793～0.4758μg范圍內(nèi)、原兒茶醛在0.00526～0.3153μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；原兒茶酸平均回收率為97.01%，RSD 為1.41%（n=6）；原兒茶醛平均回收率為98.19%，RSD為1.82%（n=6）。結(jié)論：原兒茶酸峰與原兒茶醛峰及其他雜質(zhì)峰能夠有效分離，其方法簡便，準(zhǔn)確度、靈敏度高，重現(xiàn)性和穩(wěn)定性好，能夠滿足本品有效成分質(zhì)量控制的要求。

【關(guān)鍵詞】 金烏骨通膠囊；高效液相色譜法；原兒茶酸，原兒茶醛；含量測定

【中圖分類號(hào)】R284.2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）04-0029-02

金烏骨通膠囊由金毛狗脊、烏梢蛇、葛根、淫羊藿、姜黃、補(bǔ)骨脂、木瓜、土牛膝、土黨參、威靈仙等十味藥組成，具有滋補(bǔ)肝腎、祛風(fēng)除濕、活血通絡(luò)的功效，臨床用于肝腎不足、風(fēng)寒濕痹、骨質(zhì)疏松、骨質(zhì)增生引起的腰腿酸痛、肢體麻木等癥狀[1]。其中，金毛狗脊、木瓜的活性成分主要是原兒茶酸和原兒茶醛[2-3]?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明，原兒茶酸和原兒茶醛具有增加冠脈流量、抗炎等活性，體外具有抑血小板聚集、抗菌等生理活性[4-5]。有文獻(xiàn)采用薄層色譜法鑒別金烏骨通膠囊中的原兒茶酸和原兒茶醛[6]；研究采取高效液相色譜法測定其原兒茶酸和原兒茶醛含量，有助于更好的控制該藥品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 安捷倫1260 高效液相色譜儀；梅特勒AG135電子天平；島津UV-2401紫外分光光度計(jì)。

1 .2 材料 原兒茶酸（批號(hào)：810-200205）、原兒茶醛（批號(hào)：110810-200205）對照品均購自中國藥品生物制品檢定所；金烏骨通膠囊由貴州盛世龍方制藥有限公司提供；甲醇、乙腈均為色譜純；水為娃哈哈純凈水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18柱（250mm×4. 6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液，按表1梯度洗脫；流速：1.0ml/min，柱溫：35℃；檢測波長：256nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取原兒茶酸、原兒茶醛對照品適量，精密稱定，置于同一容量瓶中，加甲醇制成分別含原兒茶酸15.86μg/ml和原兒茶醛 10.51μg/ml的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品5g，精密稱定，精密加50ml乙酸乙酯，稱重，水浴回流30min，放冷，用乙酸乙酯補(bǔ)足重量，濾過，取續(xù)濾液25ml蒸干，加甲醇2ml使溶解并轉(zhuǎn)移置5ml量瓶中，加1%的冰醋酸至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖中分別呈現(xiàn)與對照品溶液色譜圖中保留時(shí)間相一致的兩色譜峰，原兒茶酸與原兒茶醛兩成分峰的分離度較好，與相鄰雜質(zhì)峰完全分離，陰性無干擾。見圖1。

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn) 取“2.2.1”的對照品溶液，分別精密吸取5、10、15、20、25、30μl注入色譜儀，記錄色譜圖，以進(jìn)樣質(zhì)量數(shù)（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得原兒茶酸的回歸方程Y =4748.43767X -8.12860，r= 0.99999；原兒茶醛的回歸方程Y = 2003.05491X -4.81000，r= 0.99995。結(jié)果表明，原兒茶酸在0.0793～0.4758μg、原兒茶醛在0.00526～0.3153μg范圍內(nèi)質(zhì)量數(shù)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對照品溶液20μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，測定原兒茶酸、原兒茶醛的峰面積，計(jì)算原兒茶酸、原兒茶醛的RSD分別為0.22%、0.21%。實(shí)驗(yàn)表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液20μl，分別在0、6、10、16、22、25h各進(jìn)樣一次，測定原兒茶酸、原兒茶醛的峰面積，原兒茶酸、原兒茶醛的RSD分別為0.22%、0.21%。表明供試品溶液在25h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（130717）供試品，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法平行制備6份供試品溶液，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，測得原兒茶酸、原兒茶醛的平均含量分別為0.0211mg/g、0.0029mg/g，RSD分別為0.73%和1.23%（n=6），表明此方法重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn) 分別取原兒茶醛和原兒茶醛對照品29.31mg和11.45mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取5.00ml置500ml量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲(chǔ)備液。取同一批號(hào)（130717）的供試品5g，精密稱定，精密加對照品儲(chǔ)備液50ml，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法，制備供試品溶液，精密量取供試品溶液與對照品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，測定原兒茶酸、原兒茶醛的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1、2。測得原兒茶酸平均回收率97.01%，RSD=1.41%，原兒茶醛平均加樣回收率98.19%，RSD=1.82%。符合分析要求。

2.9 樣品含量測定 取5批樣品，按照供試品溶液的制備方法制備，照上述色譜條件測定計(jì)算，結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 測定指標(biāo)選擇 由金烏骨通膠囊的處方組成可知，要控制好該藥品質(zhì)量，必須控制好處方中主藥質(zhì)量，該藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究中也以葛根、淫羊藿、姜黃、補(bǔ)骨脂等的活性成分測定，即葛根素、淫羊藿苷、姜黃素、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素等的含量測定來控制質(zhì)量[7]。金毛狗脊、木瓜中含有原兒茶酸和原兒茶醛也是該藥品功效活性成分，有必要開展原兒茶酸和原兒茶醛含量測定指標(biāo)，比文獻(xiàn)中采用薄層鑒別更好的控制該藥品質(zhì)量。