甲殼類疾病及其防治技術(shù)（1）
——蝦類疾?。ㄒ唬?/h1>
2016-03-28 15:30:11汪建國(guó)
漁業(yè)致富指南 2016年14期
○汪建國(guó)
（中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所研究員博導(dǎo)）
甲殼類疾病及其防治技術(shù)（1）
——蝦類疾?。ㄒ唬?/p>
○汪建國(guó)
（中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所研究員博導(dǎo)）
（一）病毒性疾病
1.白斑綜合征俗稱白斑病，是對(duì)蝦的嚴(yán)重傳染性疫病，20世紀(jì)90年代以來(lái)一直嚴(yán)重威脅著全世界對(duì)蝦的養(yǎng)殖安全。該病的特點(diǎn)是感染率高、發(fā)病急、死亡率高、死亡速度快。病蝦活力弱，部分瀕死蝦頭胸甲部位出現(xiàn)白色斑點(diǎn)，白斑綜合征因此而得名，但亦可不出現(xiàn)白斑而蝦體變紅。2008年《中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告》第1125號(hào)將其列為一類動(dòng)物疫病，OIE將其列為必須申報(bào)的疾病。
【病原體】白斑綜合征病毒（Whitespot syndromevirus，WSSV）。
【流行與危害】20世紀(jì)90年代初，該病首先出現(xiàn)于日本及我國(guó)臺(tái)灣、廣東、福建等地，隨后擴(kuò)散并遍及亞洲主要對(duì)蝦養(yǎng)殖國(guó)家和地區(qū)。幾年后蔓延到南北美洲，造成全球性的對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)損失。一般蝦池發(fā)病后2～3天，最多不足1周時(shí)間可致全池死亡。
白斑綜合征病毒的宿主范圍非常廣泛。已知40多種對(duì)蝦和非對(duì)蝦甲殼動(dòng)物可感染該病毒，其中中國(guó)明對(duì)蝦最為易感，其他可被感染致病或成為病毒攜帶者的對(duì)蝦科生物有：斑節(jié)對(duì)蝦、凡納濱對(duì)蝦、日本囊對(duì)蝦、墨吉對(duì)蝦、長(zhǎng)毛對(duì)蝦、印度對(duì)蝦、桃紅對(duì)蝦、細(xì)角對(duì)蝦、白對(duì)蝦、褐對(duì)蝦、刀額新對(duì)蝦等。另外，羅氏沼蝦、海南沼蝦、埃氏沼蝦、藍(lán)氏沼蝦、脊尾白蝦、鼓蝦、克氏原螯蝦、哈氏美人蝦、龍蝦、蝦蛄、三疣梭子蟹、鋸緣青蟹、中華絨螯蟹、天津厚蟹、肉球近方蟹、日本大眼蟹、鱟等甲殼類動(dòng)物等也可被感染。
在自然感染過(guò)程中，經(jīng)口和鰓感染是傳播的主要途徑，對(duì)蝦在幼體期易經(jīng)口和鰓感染從而使蝦苗攜帶病毒。此外，發(fā)病對(duì)蝦精巢、精莢、卵巢中都能檢測(cè)到病毒，因此受精卵可被污染從而造成垂直傳播。由于多種甲殼動(dòng)物都可攜帶該病毒，自然環(huán)境中病毒極易在動(dòng)物個(gè)體間進(jìn)行傳播，使白斑病的防治工作變得較為困難。
【癥狀及病理變化】發(fā)病蝦厭食，空胃，行動(dòng)遲緩，彈跳無(wú)力，靜臥不動(dòng)或在水面兜圈。頭胸甲易剝離，殼與真皮分離，部分患病對(duì)蝦在頭胸和最后的尾節(jié)甲殼內(nèi)側(cè)可見(jiàn)白色斑點(diǎn)；患病中國(guó)明對(duì)蝦、凡納濱對(duì)蝦、日本囊對(duì)蝦體色發(fā)紅，而患病斑節(jié)對(duì)蝦在瀕臨死亡時(shí)則顯示變藍(lán)現(xiàn)象。血淋巴混濁、不凝固，血淋巴細(xì)胞減少。甲殼上白斑的主要成分是碳酸鈣，是由于白斑綜合征病毒在上皮細(xì)胞內(nèi)的迅速增殖導(dǎo)致鈣、磷比顯著增高，使甲殼上形成了碳酸鈣的沉積。
病毒侵害的主要組織和器官是甲殼下上皮組織、胃及后腸上皮組織、結(jié)締組織、觸角腺、造血組織、鰓、血淋巴器官。胃部壞死最嚴(yán)重，肝胰腺實(shí)質(zhì)細(xì)胞、中腸上皮細(xì)胞、肌纖維細(xì)胞不被感染。
感染早期，被侵害組織的少量細(xì)胞核略微膨大，核中出現(xiàn)嗜酸性著色區(qū)域，核仁邊移；隨著感染時(shí)間延續(xù)，細(xì)胞核內(nèi)嗜酸性著色很快轉(zhuǎn)變?yōu)榇蟮氖葔A性包涵體，使細(xì)胞核顯著膨大，染色質(zhì)只在細(xì)胞核邊沿隱約可見(jiàn)，大量細(xì)胞被侵染。
病毒粒子在細(xì)胞核中復(fù)制和裝配，成熟病毒粒子聚集于細(xì)胞核中，最后細(xì)胞解體，病毒粒子再感染周圍細(xì)胞。在肌纖維之間的結(jié)締組織及肝胰腺血竇的血細(xì)胞中也可見(jiàn)到病毒粒子。甲殼內(nèi)面的白點(diǎn)在顯微鏡下可見(jiàn)呈重瓣的花朵狀，外圍較透明，花紋較清楚，中部不透明。
【診斷方法】在本病嚴(yán)重暴發(fā)流行時(shí)，可根據(jù)其發(fā)病史、臨床特征及病理特征作出初步診斷，最后確診需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢查。診斷時(shí)應(yīng)注意與桃拉綜合征、細(xì)菌性白斑病相區(qū)別。本病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要是通過(guò)采集急性病例的鰓、胃、附肢或其他上皮組織，進(jìn)行下列檢查。
（1）樣品采集采集150尾蝦，按不同的大小或感染期取不同組織樣品。其中對(duì)蝦幼體、仔蝦取完整個(gè)體，幼蝦和成蝦取蝦的頭胸部，非對(duì)蝦的甲殼類動(dòng)物參照對(duì)蝦的方法取樣。非生物樣品取0.1～0.5g。
樣品采集的要求參照SC/T7202.1-2007《斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒診斷規(guī)程第1部分：壓片顯微鏡檢查法）》附錄B的規(guī)定或者按照OIE《水生動(dòng)物疾病診斷手冊(cè)》中的列表要求采樣。
（2）組織及病理學(xué)檢查
①新鮮組織的快速染色法：取新鮮的蝦組織做成涂片，用“臺(tái)盼藍(lán)-伊紅”染色法（T-E染色法）染色后，檢查受感染細(xì)胞的典型變化。該方法適用于在現(xiàn)場(chǎng)或診斷實(shí)驗(yàn)室對(duì)患病瀕死的對(duì)蝦仔蝦、幼蝦或成蝦進(jìn)行快速診斷。
②組織病理學(xué)診斷：經(jīng)HE染色后可清晰地觀察到各種不同組織結(jié)構(gòu)的病理變化。HE染色適用于發(fā)病對(duì)蝦或其他敏感宿主的初步診斷和對(duì)懷疑染病宿主的診斷，不適于非感染性攜帶病毒樣品的病毒檢測(cè)。
③電鏡診斷：電鏡切片可在病蝦鰓、胃、淋巴器官、皮下組織等的細(xì)胞核內(nèi)觀察到病毒粒子，通過(guò)提純負(fù)染，電鏡下可觀察到完整的病毒粒子或無(wú)囊膜的核衣殼從而進(jìn)行確診。
（3）病原學(xué)鑒定
①生物診斷法：該法采用白斑綜合征病毒指示器-SPF凡納濱對(duì)蝦幼蝦進(jìn)行試驗(yàn)。將采集的可疑蝦附肢或蝦頭尖與TN緩沖液混合勻漿，離心上清液用2%無(wú)菌生理鹽水按1：10的比例稀釋，對(duì)指示蝦進(jìn)行肌內(nèi)注射（IM），然后進(jìn)行臨床觀察和組織病理學(xué)診斷。
②核酸探針檢測(cè)法：采用白斑綜合征病毒特異性的非放射性的地高辛標(biāo)記探針進(jìn)行，敏感性高于傳統(tǒng)的病理組織學(xué)診斷法。核酸探針斑點(diǎn)雜交檢測(cè)法適用于對(duì)蝦的成蝦、幼蝦、仔蝦、幼體和受精卵的活體、冰鮮或冰凍產(chǎn)品和其他甲殼動(dòng)物感染病毒的篩查、臨床病癥的確診。
③PCR檢測(cè)法：通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，檢測(cè)病毒的特定基因。適用于對(duì)蝦各種樣品、環(huán)境生物和餌料生物的各種樣品以及其他非生物樣品中WSSV的定性檢測(cè)，具有高靈敏度和高特異性，適用于病原篩查和疾病確診。
④單克隆抗體檢測(cè)法：應(yīng)用特異性的病毒單克隆抗體，采用斑點(diǎn)免疫印跡、免疫熒光和ELISA等方法進(jìn)行診斷。
【防治方法】
（1）預(yù)防選擇健康蝦作為親蝦，培養(yǎng)健康蝦苗。受精卵用含氯漂粉精或碘伏（聚乙烯砒咯烷酮碘）浸洗或用過(guò)濾海水并經(jīng)紫外線消毒后沖洗5分鐘。育苗用水應(yīng)過(guò)濾和消毒，育苗期間切忌溫度過(guò)高和濫用藥物。
做好養(yǎng)殖池塘的清淤、消毒及培水工作。蝦池在養(yǎng)蝦前盡可能徹底清淤，然后進(jìn)行消毒。用生石灰或含氯消毒劑均勻潑灑全池，消毒后應(yīng)曝曬1周左右，然后進(jìn)水。養(yǎng)殖過(guò)程中合理用水、培好水色、保持優(yōu)良水質(zhì)。在養(yǎng)蝦場(chǎng)附近有蝦病流行時(shí)，停止從海區(qū)向蓄水池注水，應(yīng)將蝦池中的水與蓄水池中的水循環(huán)使用。養(yǎng)蝦池中適當(dāng)混養(yǎng)一些攝食浮游生物或底棲藻類的魚或貝類，有利于防止水質(zhì)過(guò)肥，起凈化水質(zhì)的作用。
放養(yǎng)密度要合理。對(duì)蝦的放養(yǎng)密度應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)厮?、海域環(huán)境、蝦池的結(jié)構(gòu)和設(shè)備、生產(chǎn)技術(shù)、管理經(jīng)驗(yàn)、蝦苗的規(guī)格、飼料的質(zhì)和量等條件而定。飼養(yǎng)管理過(guò)程中要注意水質(zhì)及各種理化因子的變化，保持水體的相對(duì)穩(wěn)定；堅(jiān)持巡塘，定期檢查，正確診斷，積極預(yù)防。在養(yǎng)蝦池中接種和培養(yǎng)光合細(xì)菌凈化水質(zhì)，投喂能提高對(duì)蝦細(xì)胞免疫力的中草藥和免疫促進(jìn)劑，也是目前常用的防治途徑之一。
（2）控制對(duì)苗種場(chǎng)、良種場(chǎng)實(shí)施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度。加強(qiáng)疫病監(jiān)測(cè)與檢疫、掌握流行病學(xué)情況。可通過(guò)培育或引進(jìn)抗病品種、切斷傳染源以及加強(qiáng)飼養(yǎng)管理等綜合措施控制本病。
（3）處理苗種繁殖場(chǎng)內(nèi)WSSV檢疫呈陽(yáng)性的親蝦和苗種應(yīng)全部撲殺；病毒陽(yáng)性的種用和商品養(yǎng)殖蝦必須進(jìn)行無(wú)害化處理，禁止用于繁殖育苗、放流或直接作為水產(chǎn)餌料使用。
2.桃拉綜合征
俗稱“紅尾病”，是一種嚴(yán)重傳染性對(duì)蝦疾病，急性期以蝦體變紅（蝦紅素增多）、軟殼，過(guò)渡期以角質(zhì)上皮不規(guī)則黑化為特征。2008年《中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告》第1125號(hào)將其列為二類動(dòng)物疫病。OIE將其列為必須申報(bào)的疾病。
【病原體】桃拉綜合征病毒（Taura syndromevirus，TSV）。
【流行與危害】該病主要侵害凡納濱對(duì)蝦和細(xì)角對(duì)蝦，對(duì)蝦科濱對(duì)蝦屬所有成員均對(duì)本病易感，中國(guó)明對(duì)蝦也對(duì)本病易感；凡納濱對(duì)蝦除卵、受精卵和蝦蚴外，仔蝦、幼蝦及成蝦等各期均對(duì)本病易感，主要感染14～40日齡、體重0.05～5g以下的仔蝦，部分稚蝦或成蝦也容易被感染。對(duì)蝦科其他屬成員經(jīng)直接攻毒也可感染，但一般不表現(xiàn)癥狀。細(xì)角對(duì)蝦選擇系對(duì)TSV（基因1型或A抗原型）有抵抗力。
其他已報(bào)道TSV的自然感染或試驗(yàn)感染宿主有白對(duì)蝦、南方對(duì)蝦、斑節(jié)對(duì)蝦、刀額新對(duì)蝦、中國(guó)明對(duì)蝦、日本囊對(duì)蝦、褐對(duì)蝦和桃紅對(duì)蝦。
目前，本病廣泛流行于美洲和東南亞對(duì)蝦養(yǎng)殖區(qū)。該病1992年首次發(fā)現(xiàn)于厄瓜多爾桃拉河地區(qū)，之后隨染疫仔蝦和親蝦貿(mào)易迅速傳播到厄瓜多爾、秘魯、哥倫比亞、洪都拉斯、危地馬拉、薩爾瓦多、巴西、尼加拉瓜、伯利茲、墨西哥、美國(guó)等美洲各大蝦類養(yǎng)殖區(qū)。1999年中國(guó)臺(tái)北從中南美洲進(jìn)口凡納濱對(duì)蝦而傳人本病，此后，隨親蝦和仔蝦的貿(mào)易傳播到中國(guó)大陸、泰國(guó)、馬來(lái)西亞、印度尼西亞等地。
該病發(fā)病急，死亡率高。一般發(fā)病蝦池自發(fā)現(xiàn)病蝦至對(duì)蝦拒食人工飼料僅5～7天，10天左右大部分對(duì)蝦死亡。部分蝦池采取積極消毒措施后轉(zhuǎn)為慢性病，逐日死亡，至養(yǎng)成收獲時(shí)成活率一般不超過(guò)20%。本病主要通過(guò)健康蝦攝食病蝦、帶病毒水源等方式水平傳播；也可經(jīng)海鷗等海鳥(niǎo)、劃蝽科類水生昆蟲攜帶病毒傳播。攜帶病毒親蝦也可能經(jīng)垂直途徑傳播到后代，但目前尚無(wú)可靠證據(jù)。持續(xù)感染蝦和終生帶毒蝦是傳染源；染疫存活凡納濱對(duì)蝦和細(xì)角對(duì)蝦可終生帶毒成為疾病傳播者。
【癥狀及病理變化】
（1）癥狀根據(jù)病程和癥狀，桃拉綜合征可分為急性期、過(guò)渡（恢復(fù)）期和慢性期3個(gè)階段。
①急性期：蝦紅素增多，蝦體全身呈淡紅色，尾扇和游泳足呈鮮紅色，因此蝦民稱之為“紅尾病”。取尾扇發(fā)紅的病蝦，用10倍放大鏡仔細(xì)觀察細(xì)小附肢（如末端尾肢或腹肢）的表皮上皮，可以看到病灶處的上皮壞死。急性感染蝦常死于蛻皮期間，處于脫殼后期的病蝦以軟殼、空腹為特征，瀕死蝦常浮于水面或池體邊緣。
②過(guò)渡（恢復(fù)）期：介于急性期與慢性期之間，病程極短，以病蝦角質(zhì)層上皮多處出現(xiàn)不規(guī)則黑色斑點(diǎn)為特征。在過(guò)渡期，典型的急性期表皮損傷在數(shù)量和嚴(yán)重程度上都有所減少或降低，病灶壞死處聚集了大量血細(xì)胞及其滲出物。大量血細(xì)胞隨后開(kāi)始黑化，進(jìn)而導(dǎo)致病蝦角質(zhì)層上皮呈現(xiàn)不規(guī)則的黑色斑點(diǎn)。
③慢性期：成功蛻皮的病蝦，從過(guò)渡期轉(zhuǎn)入慢性期，一般無(wú)明顯的臨床癥狀，但對(duì)正常的環(huán)境應(yīng)激（如突然降低鹽度）明顯不如未染疫蝦。有的因病毒在淋巴器官持續(xù)感染而成為終生帶毒者。
（2）病理特征
①急性期：全身角質(zhì)層上皮、附肢、鰓、后腸、前腸（食管、前后胃室）可見(jiàn)多灶性壞死；有時(shí)在角質(zhì)層皮下結(jié)締組織細(xì)胞，以及靠近感染角質(zhì)層上皮的條紋肌纖維基質(zhì)也可見(jiàn)感染灶。嚴(yán)重的病例，觸角腺管狀上皮也遭破壞。多灶性表皮壞死的典型癥狀包括多個(gè)感染細(xì)胞聚集在一起、細(xì)胞質(zhì)嗜酸性增加、細(xì)胞核固縮或崩解。
②過(guò)渡（恢復(fù)）期：該期病理特征是桃拉綜合征過(guò)渡期的典型特征。在HE染色的組織病理切片上，這樣的病灶表現(xiàn)為角質(zhì)層被侵蝕，暴露的表皮血細(xì)胞和上皮被大量弧菌感染和侵襲。在桃拉綜合征過(guò)渡期，對(duì)蝦淋巴器官的組織切片在HE染色后觀察，可能外觀正常。但如果應(yīng)用TSV特異性的cDNA探針對(duì)這些切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色（ISH），就可以觀察到大量的病毒聚集在淋巴小管的外周實(shí)質(zhì)細(xì)胞內(nèi)。
③慢性期：該期病蝦的組織病理變化不明顯，僅可見(jiàn)大量的“類淋巴器官球體”（LOS）。類淋巴器官球體可能與成對(duì)淋巴器官的主體相連，或脫離形成異位的類淋巴器官體，位于血腔的局部區(qū)域（如心、鰓或皮下結(jié)締組織中等）。類淋巴器官球體由淋巴器官細(xì)胞和血淋巴細(xì)胞呈球形堆積而成，但從其球形特征以及缺乏中心管（典型的淋巴器官小管），可與正常淋巴器官進(jìn)行區(qū)別。應(yīng)用TSV特異性的cDNA探針進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，這些“類淋巴器官球體”的部分細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，而其他靶組織細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。
【診斷方法】
（1）初步診斷僅急性期的病蝦表現(xiàn)出行為的改變。急性期病蝦呈現(xiàn)缺氧狀態(tài)，常聚集在池塘邊緣或水面等溶氧高的地方，從而吸引大量的海鳥(niǎo)捕食。因此由垂死對(duì)蝦吸引來(lái)的海鳥(niǎo)在蝦池上空大量聚集，?？纱砦r池內(nèi)暴發(fā)了嚴(yán)重的流行?。ㄍǔＪ翘依C合征或白斑綜合征）。通?？梢砸罁?jù)流行病學(xué)、臨床特征和病理特征對(duì)急性期桃拉綜合征做出初步診斷：病蝦蝦體全身淡紅色、尾扇和游泳足鮮紅色，游泳足或尾足邊緣處上皮呈灶性壞死，常死于蛻皮期間，表現(xiàn)為軟殼、空腹等特征。
（2）樣品采集采集病蝦10尾，健康蝦150尾，按不同的大小或感染期取不同組織樣品。其中，對(duì)蝦幼體、仔蝦取完整個(gè)體，幼蝦和成蝦取蝦的頭胸部，非對(duì)蝦的甲殼類動(dòng)物參照對(duì)蝦的方法取樣。非生物樣品取0.1～0.5g。
樣品采集的要求參照SC、T7202.1-2007《斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒診斷規(guī)程第1部分：壓片顯微鏡檢查法）》附錄B的規(guī)定或者按照OIE《水生動(dòng)物疾病診斷手冊(cè)》中的列表要求采樣。
（3）組織和病理學(xué)檢查依據(jù)前述病蝦的組織病理特征對(duì)該病作出診斷。該方法適用于桃拉綜合征的急性期、過(guò)渡期和慢性期患病對(duì)蝦的確診和對(duì)桃拉綜合征的篩查，不適用于對(duì)潛伏性感染或非感染性攜帶病毒標(biāo)本進(jìn)行疾病診斷。過(guò)渡期病蝦角質(zhì)層上皮多處出現(xiàn)不規(guī)則黑化斑，血細(xì)胞聚集，軟殼及蝦紅素不明顯。慢性期一般無(wú)明顯臨床癥狀。
（4）實(shí)驗(yàn)室診斷和病原學(xué)鑒定
①生物診斷法：采用SPF凡納濱對(duì)蝦幼蝦作為桃拉綜合征病毒指示器，對(duì)疑似感染蝦進(jìn)行生物檢測(cè)，具體方法有口服法和注射法?？诜ǎ涸摲ū容^容易操作，可用較小的SPF凡納濱對(duì)蝦幼蝦進(jìn)行試驗(yàn)。指示蝦隨機(jī)分為兩組，其中感染組以剁碎的疑似感染蝦樣品飼喂，對(duì)照組以正常飼料飼喂，然后對(duì)兩組蝦進(jìn)行臨床觀察和大體病理、組織病理學(xué)診斷。注射法：將采集的可疑蝦頭或全蝦樣品與TN緩沖液或2%的無(wú)菌生理鹽水按1：2或1：3混合勻漿，離心取上清作為接種物，對(duì)指示蝦進(jìn)行肌內(nèi)注射，然后進(jìn)行臨床觀察和外觀癥狀、組織病理學(xué)診斷。注射接種法宜采用較大的指示蝦進(jìn)行。
②免疫檢測(cè)技術(shù)：
斑點(diǎn)酶免疫反應(yīng)（DBI）：該法以感染蝦或SPF蝦血淋巴制取純化病毒，作為檢測(cè)抗原，點(diǎn)加于MA-HA-N45反應(yīng)板表面，干燥后，以磷酸鹽緩沖液和含山羊血清與酪蛋白的吐溫20進(jìn)行阻斷。用單抗TSVMAb1A1進(jìn)行斑點(diǎn)酶免疫反應(yīng)。
其他抗體檢測(cè)方法：包括利用TSV MAb1A1單克隆抗體的間接熒光抗體法（IFAT）和免疫組化法（IHC）等。這些方法適用于組織印片、冰凍切片和脫蠟的固定組織樣品及Davidson'sAFA固定的組織樣品中的病毒檢測(cè)。
③分子檢測(cè)技術(shù)：目前已開(kāi)發(fā)有原位雜交實(shí)驗(yàn)（ISH）、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（real-timequantitativeRT-PCR）等方法。原位雜交實(shí)驗(yàn)是采用非放射性的以地高辛標(biāo)記的eDNA探針進(jìn)行，敏感性高于傳統(tǒng)的病理組織學(xué)診斷方法。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法適用于對(duì)蝦的各生活期、非對(duì)蝦的生物和底泥等樣品中TSV帶毒情況的定性檢測(cè)，以進(jìn)行病原篩查和疾病的確診，但該法單獨(dú)使用時(shí)不適用于對(duì)病毒量、存在狀態(tài)（玷污、攜帶和感染狀態(tài)）或感染活性等的估測(cè)以及宿主感染程度的評(píng)估。實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法具快速、特異和敏感優(yōu)點(diǎn)，對(duì)TSV基因組目標(biāo)序列檢測(cè)靈敏度大約為100個(gè)拷貝。
【防治方法】
（1）預(yù)防進(jìn)行水體消毒，每10～15天（特別是在進(jìn)水、換水后）應(yīng)及時(shí)用漂白粉等含氯消毒劑消毒。調(diào)控水質(zhì)，保持整蝦池水質(zhì)平衡及穩(wěn)定。蝦池pH一般維持在8.0～8.8，氨氮0.5mg/L以下，透明度維持在30～60cm。在養(yǎng)殖過(guò)程中，定期使用水質(zhì)及底質(zhì)改良劑，改良養(yǎng)殖池底質(zhì)。特別是在養(yǎng)殖中后期，應(yīng)用光合細(xì)菌、硝化細(xì)菌等微生態(tài)制劑的改良劑進(jìn)行水質(zhì)和底質(zhì)改良。配合使用維生素、聚維酮碘等進(jìn)行預(yù)防。也可以在飼料中添加生物活性物質(zhì)或免疫促進(jìn)劑，增強(qiáng)蝦體非特異性免疫功能。
（2）控制可通過(guò)培育或引進(jìn)抗病品種、切斷傳染源以及加強(qiáng)飼養(yǎng)管理等綜合措施控制本病的暴發(fā)。對(duì)苗種場(chǎng)、良種場(chǎng)應(yīng)實(shí)施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度；加強(qiáng)疫病監(jiān)測(cè)與檢疫，掌握其流行情況。
（3）處理TSV檢疫陽(yáng)性結(jié)果的親蝦和商品養(yǎng)殖蝦必須進(jìn)行無(wú)害化處理，禁止用于繁殖育苗、放流或直接作為水產(chǎn)餌料使用。
（未完待續(xù)）
（通聯(lián)：430072，中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所武漢市武昌東湖南路7號(hào)）
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○汪建國(guó)
（中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所研究員博導(dǎo)）
甲殼類疾病及其防治技術(shù)（1）
——蝦類疾?。ㄒ唬?/p>
○汪建國(guó)
（中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所研究員博導(dǎo)）
（一）病毒性疾病
1.白斑綜合征俗稱白斑病，是對(duì)蝦的嚴(yán)重傳染性疫病，20世紀(jì)90年代以來(lái)一直嚴(yán)重威脅著全世界對(duì)蝦的養(yǎng)殖安全。該病的特點(diǎn)是感染率高、發(fā)病急、死亡率高、死亡速度快。病蝦活力弱，部分瀕死蝦頭胸甲部位出現(xiàn)白色斑點(diǎn)，白斑綜合征因此而得名，但亦可不出現(xiàn)白斑而蝦體變紅。2008年《中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告》第1125號(hào)將其列為一類動(dòng)物疫病，OIE將其列為必須申報(bào)的疾病。
【病原體】白斑綜合征病毒（Whitespot syndromevirus，WSSV）。
【流行與危害】20世紀(jì)90年代初，該病首先出現(xiàn)于日本及我國(guó)臺(tái)灣、廣東、福建等地，隨后擴(kuò)散并遍及亞洲主要對(duì)蝦養(yǎng)殖國(guó)家和地區(qū)。幾年后蔓延到南北美洲，造成全球性的對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)損失。一般蝦池發(fā)病后2～3天，最多不足1周時(shí)間可致全池死亡。
白斑綜合征病毒的宿主范圍非常廣泛。已知40多種對(duì)蝦和非對(duì)蝦甲殼動(dòng)物可感染該病毒，其中中國(guó)明對(duì)蝦最為易感，其他可被感染致病或成為病毒攜帶者的對(duì)蝦科生物有：斑節(jié)對(duì)蝦、凡納濱對(duì)蝦、日本囊對(duì)蝦、墨吉對(duì)蝦、長(zhǎng)毛對(duì)蝦、印度對(duì)蝦、桃紅對(duì)蝦、細(xì)角對(duì)蝦、白對(duì)蝦、褐對(duì)蝦、刀額新對(duì)蝦等。另外，羅氏沼蝦、海南沼蝦、埃氏沼蝦、藍(lán)氏沼蝦、脊尾白蝦、鼓蝦、克氏原螯蝦、哈氏美人蝦、龍蝦、蝦蛄、三疣梭子蟹、鋸緣青蟹、中華絨螯蟹、天津厚蟹、肉球近方蟹、日本大眼蟹、鱟等甲殼類動(dòng)物等也可被感染。
在自然感染過(guò)程中，經(jīng)口和鰓感染是傳播的主要途徑，對(duì)蝦在幼體期易經(jīng)口和鰓感染從而使蝦苗攜帶病毒。此外，發(fā)病對(duì)蝦精巢、精莢、卵巢中都能檢測(cè)到病毒，因此受精卵可被污染從而造成垂直傳播。由于多種甲殼動(dòng)物都可攜帶該病毒，自然環(huán)境中病毒極易在動(dòng)物個(gè)體間進(jìn)行傳播，使白斑病的防治工作變得較為困難。
【癥狀及病理變化】發(fā)病蝦厭食，空胃，行動(dòng)遲緩，彈跳無(wú)力，靜臥不動(dòng)或在水面兜圈。頭胸甲易剝離，殼與真皮分離，部分患病對(duì)蝦在頭胸和最后的尾節(jié)甲殼內(nèi)側(cè)可見(jiàn)白色斑點(diǎn)；患病中國(guó)明對(duì)蝦、凡納濱對(duì)蝦、日本囊對(duì)蝦體色發(fā)紅，而患病斑節(jié)對(duì)蝦在瀕臨死亡時(shí)則顯示變藍(lán)現(xiàn)象。血淋巴混濁、不凝固，血淋巴細(xì)胞減少。甲殼上白斑的主要成分是碳酸鈣，是由于白斑綜合征病毒在上皮細(xì)胞內(nèi)的迅速增殖導(dǎo)致鈣、磷比顯著增高，使甲殼上形成了碳酸鈣的沉積。
病毒侵害的主要組織和器官是甲殼下上皮組織、胃及后腸上皮組織、結(jié)締組織、觸角腺、造血組織、鰓、血淋巴器官。胃部壞死最嚴(yán)重，肝胰腺實(shí)質(zhì)細(xì)胞、中腸上皮細(xì)胞、肌纖維細(xì)胞不被感染。
感染早期，被侵害組織的少量細(xì)胞核略微膨大，核中出現(xiàn)嗜酸性著色區(qū)域，核仁邊移；隨著感染時(shí)間延續(xù)，細(xì)胞核內(nèi)嗜酸性著色很快轉(zhuǎn)變?yōu)榇蟮氖葔A性包涵體，使細(xì)胞核顯著膨大，染色質(zhì)只在細(xì)胞核邊沿隱約可見(jiàn)，大量細(xì)胞被侵染。
病毒粒子在細(xì)胞核中復(fù)制和裝配，成熟病毒粒子聚集于細(xì)胞核中，最后細(xì)胞解體，病毒粒子再感染周圍細(xì)胞。在肌纖維之間的結(jié)締組織及肝胰腺血竇的血細(xì)胞中也可見(jiàn)到病毒粒子。甲殼內(nèi)面的白點(diǎn)在顯微鏡下可見(jiàn)呈重瓣的花朵狀，外圍較透明，花紋較清楚，中部不透明。
【診斷方法】在本病嚴(yán)重暴發(fā)流行時(shí)，可根據(jù)其發(fā)病史、臨床特征及病理特征作出初步診斷，最后確診需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢查。診斷時(shí)應(yīng)注意與桃拉綜合征、細(xì)菌性白斑病相區(qū)別。本病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要是通過(guò)采集急性病例的鰓、胃、附肢或其他上皮組織，進(jìn)行下列檢查。
（1）樣品采集采集150尾蝦，按不同的大小或感染期取不同組織樣品。其中對(duì)蝦幼體、仔蝦取完整個(gè)體，幼蝦和成蝦取蝦的頭胸部，非對(duì)蝦的甲殼類動(dòng)物參照對(duì)蝦的方法取樣。非生物樣品取0.1～0.5g。
樣品采集的要求參照SC/T7202.1-2007《斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒診斷規(guī)程第1部分：壓片顯微鏡檢查法）》附錄B的規(guī)定或者按照OIE《水生動(dòng)物疾病診斷手冊(cè)》中的列表要求采樣。
（2）組織及病理學(xué)檢查
①新鮮組織的快速染色法：取新鮮的蝦組織做成涂片，用“臺(tái)盼藍(lán)-伊紅”染色法（T-E染色法）染色后，檢查受感染細(xì)胞的典型變化。該方法適用于在現(xiàn)場(chǎng)或診斷實(shí)驗(yàn)室對(duì)患病瀕死的對(duì)蝦仔蝦、幼蝦或成蝦進(jìn)行快速診斷。
②組織病理學(xué)診斷：經(jīng)HE染色后可清晰地觀察到各種不同組織結(jié)構(gòu)的病理變化。HE染色適用于發(fā)病對(duì)蝦或其他敏感宿主的初步診斷和對(duì)懷疑染病宿主的診斷，不適于非感染性攜帶病毒樣品的病毒檢測(cè)。
③電鏡診斷：電鏡切片可在病蝦鰓、胃、淋巴器官、皮下組織等的細(xì)胞核內(nèi)觀察到病毒粒子，通過(guò)提純負(fù)染，電鏡下可觀察到完整的病毒粒子或無(wú)囊膜的核衣殼從而進(jìn)行確診。
（3）病原學(xué)鑒定
①生物診斷法：該法采用白斑綜合征病毒指示器-SPF凡納濱對(duì)蝦幼蝦進(jìn)行試驗(yàn)。將采集的可疑蝦附肢或蝦頭尖與TN緩沖液混合勻漿，離心上清液用2%無(wú)菌生理鹽水按1：10的比例稀釋，對(duì)指示蝦進(jìn)行肌內(nèi)注射（IM），然后進(jìn)行臨床觀察和組織病理學(xué)診斷。
②核酸探針檢測(cè)法：采用白斑綜合征病毒特異性的非放射性的地高辛標(biāo)記探針進(jìn)行，敏感性高于傳統(tǒng)的病理組織學(xué)診斷法。核酸探針斑點(diǎn)雜交檢測(cè)法適用于對(duì)蝦的成蝦、幼蝦、仔蝦、幼體和受精卵的活體、冰鮮或冰凍產(chǎn)品和其他甲殼動(dòng)物感染病毒的篩查、臨床病癥的確診。
③PCR檢測(cè)法：通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，檢測(cè)病毒的特定基因。適用于對(duì)蝦各種樣品、環(huán)境生物和餌料生物的各種樣品以及其他非生物樣品中WSSV的定性檢測(cè)，具有高靈敏度和高特異性，適用于病原篩查和疾病確診。
④單克隆抗體檢測(cè)法：應(yīng)用特異性的病毒單克隆抗體，采用斑點(diǎn)免疫印跡、免疫熒光和ELISA等方法進(jìn)行診斷。
【防治方法】
（1）預(yù)防選擇健康蝦作為親蝦，培養(yǎng)健康蝦苗。受精卵用含氯漂粉精或碘伏（聚乙烯砒咯烷酮碘）浸洗或用過(guò)濾海水并經(jīng)紫外線消毒后沖洗5分鐘。育苗用水應(yīng)過(guò)濾和消毒，育苗期間切忌溫度過(guò)高和濫用藥物。
做好養(yǎng)殖池塘的清淤、消毒及培水工作。蝦池在養(yǎng)蝦前盡可能徹底清淤，然后進(jìn)行消毒。用生石灰或含氯消毒劑均勻潑灑全池，消毒后應(yīng)曝曬1周左右，然后進(jìn)水。養(yǎng)殖過(guò)程中合理用水、培好水色、保持優(yōu)良水質(zhì)。在養(yǎng)蝦場(chǎng)附近有蝦病流行時(shí)，停止從海區(qū)向蓄水池注水，應(yīng)將蝦池中的水與蓄水池中的水循環(huán)使用。養(yǎng)蝦池中適當(dāng)混養(yǎng)一些攝食浮游生物或底棲藻類的魚或貝類，有利于防止水質(zhì)過(guò)肥，起凈化水質(zhì)的作用。
放養(yǎng)密度要合理。對(duì)蝦的放養(yǎng)密度應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)厮?、海域環(huán)境、蝦池的結(jié)構(gòu)和設(shè)備、生產(chǎn)技術(shù)、管理經(jīng)驗(yàn)、蝦苗的規(guī)格、飼料的質(zhì)和量等條件而定。飼養(yǎng)管理過(guò)程中要注意水質(zhì)及各種理化因子的變化，保持水體的相對(duì)穩(wěn)定；堅(jiān)持巡塘，定期檢查，正確診斷，積極預(yù)防。在養(yǎng)蝦池中接種和培養(yǎng)光合細(xì)菌凈化水質(zhì)，投喂能提高對(duì)蝦細(xì)胞免疫力的中草藥和免疫促進(jìn)劑，也是目前常用的防治途徑之一。
（2）控制對(duì)苗種場(chǎng)、良種場(chǎng)實(shí)施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度。加強(qiáng)疫病監(jiān)測(cè)與檢疫、掌握流行病學(xué)情況。可通過(guò)培育或引進(jìn)抗病品種、切斷傳染源以及加強(qiáng)飼養(yǎng)管理等綜合措施控制本病。
（3）處理苗種繁殖場(chǎng)內(nèi)WSSV檢疫呈陽(yáng)性的親蝦和苗種應(yīng)全部撲殺；病毒陽(yáng)性的種用和商品養(yǎng)殖蝦必須進(jìn)行無(wú)害化處理，禁止用于繁殖育苗、放流或直接作為水產(chǎn)餌料使用。
2.桃拉綜合征
俗稱“紅尾病”，是一種嚴(yán)重傳染性對(duì)蝦疾病，急性期以蝦體變紅（蝦紅素增多）、軟殼，過(guò)渡期以角質(zhì)上皮不規(guī)則黑化為特征。2008年《中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告》第1125號(hào)將其列為二類動(dòng)物疫病。OIE將其列為必須申報(bào)的疾病。
【病原體】桃拉綜合征病毒（Taura syndromevirus，TSV）。
【流行與危害】該病主要侵害凡納濱對(duì)蝦和細(xì)角對(duì)蝦，對(duì)蝦科濱對(duì)蝦屬所有成員均對(duì)本病易感，中國(guó)明對(duì)蝦也對(duì)本病易感；凡納濱對(duì)蝦除卵、受精卵和蝦蚴外，仔蝦、幼蝦及成蝦等各期均對(duì)本病易感，主要感染14～40日齡、體重0.05～5g以下的仔蝦，部分稚蝦或成蝦也容易被感染。對(duì)蝦科其他屬成員經(jīng)直接攻毒也可感染，但一般不表現(xiàn)癥狀。細(xì)角對(duì)蝦選擇系對(duì)TSV（基因1型或A抗原型）有抵抗力。
其他已報(bào)道TSV的自然感染或試驗(yàn)感染宿主有白對(duì)蝦、南方對(duì)蝦、斑節(jié)對(duì)蝦、刀額新對(duì)蝦、中國(guó)明對(duì)蝦、日本囊對(duì)蝦、褐對(duì)蝦和桃紅對(duì)蝦。
目前，本病廣泛流行于美洲和東南亞對(duì)蝦養(yǎng)殖區(qū)。該病1992年首次發(fā)現(xiàn)于厄瓜多爾桃拉河地區(qū)，之后隨染疫仔蝦和親蝦貿(mào)易迅速傳播到厄瓜多爾、秘魯、哥倫比亞、洪都拉斯、危地馬拉、薩爾瓦多、巴西、尼加拉瓜、伯利茲、墨西哥、美國(guó)等美洲各大蝦類養(yǎng)殖區(qū)。1999年中國(guó)臺(tái)北從中南美洲進(jìn)口凡納濱對(duì)蝦而傳人本病，此后，隨親蝦和仔蝦的貿(mào)易傳播到中國(guó)大陸、泰國(guó)、馬來(lái)西亞、印度尼西亞等地。
該病發(fā)病急，死亡率高。一般發(fā)病蝦池自發(fā)現(xiàn)病蝦至對(duì)蝦拒食人工飼料僅5～7天，10天左右大部分對(duì)蝦死亡。部分蝦池采取積極消毒措施后轉(zhuǎn)為慢性病，逐日死亡，至養(yǎng)成收獲時(shí)成活率一般不超過(guò)20%。本病主要通過(guò)健康蝦攝食病蝦、帶病毒水源等方式水平傳播；也可經(jīng)海鷗等海鳥(niǎo)、劃蝽科類水生昆蟲攜帶病毒傳播。攜帶病毒親蝦也可能經(jīng)垂直途徑傳播到后代，但目前尚無(wú)可靠證據(jù)。持續(xù)感染蝦和終生帶毒蝦是傳染源；染疫存活凡納濱對(duì)蝦和細(xì)角對(duì)蝦可終生帶毒成為疾病傳播者。
【癥狀及病理變化】
（1）癥狀根據(jù)病程和癥狀，桃拉綜合征可分為急性期、過(guò)渡（恢復(fù)）期和慢性期3個(gè)階段。
①急性期：蝦紅素增多，蝦體全身呈淡紅色，尾扇和游泳足呈鮮紅色，因此蝦民稱之為“紅尾病”。取尾扇發(fā)紅的病蝦，用10倍放大鏡仔細(xì)觀察細(xì)小附肢（如末端尾肢或腹肢）的表皮上皮，可以看到病灶處的上皮壞死。急性感染蝦常死于蛻皮期間，處于脫殼后期的病蝦以軟殼、空腹為特征，瀕死蝦常浮于水面或池體邊緣。
②過(guò)渡（恢復(fù)）期：介于急性期與慢性期之間，病程極短，以病蝦角質(zhì)層上皮多處出現(xiàn)不規(guī)則黑色斑點(diǎn)為特征。在過(guò)渡期，典型的急性期表皮損傷在數(shù)量和嚴(yán)重程度上都有所減少或降低，病灶壞死處聚集了大量血細(xì)胞及其滲出物。大量血細(xì)胞隨后開(kāi)始黑化，進(jìn)而導(dǎo)致病蝦角質(zhì)層上皮呈現(xiàn)不規(guī)則的黑色斑點(diǎn)。
③慢性期：成功蛻皮的病蝦，從過(guò)渡期轉(zhuǎn)入慢性期，一般無(wú)明顯的臨床癥狀，但對(duì)正常的環(huán)境應(yīng)激（如突然降低鹽度）明顯不如未染疫蝦。有的因病毒在淋巴器官持續(xù)感染而成為終生帶毒者。
（2）病理特征
①急性期：全身角質(zhì)層上皮、附肢、鰓、后腸、前腸（食管、前后胃室）可見(jiàn)多灶性壞死；有時(shí)在角質(zhì)層皮下結(jié)締組織細(xì)胞，以及靠近感染角質(zhì)層上皮的條紋肌纖維基質(zhì)也可見(jiàn)感染灶。嚴(yán)重的病例，觸角腺管狀上皮也遭破壞。多灶性表皮壞死的典型癥狀包括多個(gè)感染細(xì)胞聚集在一起、細(xì)胞質(zhì)嗜酸性增加、細(xì)胞核固縮或崩解。
②過(guò)渡（恢復(fù)）期：該期病理特征是桃拉綜合征過(guò)渡期的典型特征。在HE染色的組織病理切片上，這樣的病灶表現(xiàn)為角質(zhì)層被侵蝕，暴露的表皮血細(xì)胞和上皮被大量弧菌感染和侵襲。在桃拉綜合征過(guò)渡期，對(duì)蝦淋巴器官的組織切片在HE染色后觀察，可能外觀正常。但如果應(yīng)用TSV特異性的cDNA探針對(duì)這些切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色（ISH），就可以觀察到大量的病毒聚集在淋巴小管的外周實(shí)質(zhì)細(xì)胞內(nèi)。
③慢性期：該期病蝦的組織病理變化不明顯，僅可見(jiàn)大量的“類淋巴器官球體”（LOS）。類淋巴器官球體可能與成對(duì)淋巴器官的主體相連，或脫離形成異位的類淋巴器官體，位于血腔的局部區(qū)域（如心、鰓或皮下結(jié)締組織中等）。類淋巴器官球體由淋巴器官細(xì)胞和血淋巴細(xì)胞呈球形堆積而成，但從其球形特征以及缺乏中心管（典型的淋巴器官小管），可與正常淋巴器官進(jìn)行區(qū)別。應(yīng)用TSV特異性的cDNA探針進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，這些“類淋巴器官球體”的部分細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，而其他靶組織細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。
【診斷方法】
（1）初步診斷僅急性期的病蝦表現(xiàn)出行為的改變。急性期病蝦呈現(xiàn)缺氧狀態(tài)，常聚集在池塘邊緣或水面等溶氧高的地方，從而吸引大量的海鳥(niǎo)捕食。因此由垂死對(duì)蝦吸引來(lái)的海鳥(niǎo)在蝦池上空大量聚集，?？纱砦r池內(nèi)暴發(fā)了嚴(yán)重的流行?。ㄍǔＪ翘依C合征或白斑綜合征）。通?？梢砸罁?jù)流行病學(xué)、臨床特征和病理特征對(duì)急性期桃拉綜合征做出初步診斷：病蝦蝦體全身淡紅色、尾扇和游泳足鮮紅色，游泳足或尾足邊緣處上皮呈灶性壞死，常死于蛻皮期間，表現(xiàn)為軟殼、空腹等特征。
（2）樣品采集采集病蝦10尾，健康蝦150尾，按不同的大小或感染期取不同組織樣品。其中，對(duì)蝦幼體、仔蝦取完整個(gè)體，幼蝦和成蝦取蝦的頭胸部，非對(duì)蝦的甲殼類動(dòng)物參照對(duì)蝦的方法取樣。非生物樣品取0.1～0.5g。
樣品采集的要求參照SC、T7202.1-2007《斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒診斷規(guī)程第1部分：壓片顯微鏡檢查法）》附錄B的規(guī)定或者按照OIE《水生動(dòng)物疾病診斷手冊(cè)》中的列表要求采樣。
（3）組織和病理學(xué)檢查依據(jù)前述病蝦的組織病理特征對(duì)該病作出診斷。該方法適用于桃拉綜合征的急性期、過(guò)渡期和慢性期患病對(duì)蝦的確診和對(duì)桃拉綜合征的篩查，不適用于對(duì)潛伏性感染或非感染性攜帶病毒標(biāo)本進(jìn)行疾病診斷。過(guò)渡期病蝦角質(zhì)層上皮多處出現(xiàn)不規(guī)則黑化斑，血細(xì)胞聚集，軟殼及蝦紅素不明顯。慢性期一般無(wú)明顯臨床癥狀。
（4）實(shí)驗(yàn)室診斷和病原學(xué)鑒定
①生物診斷法：采用SPF凡納濱對(duì)蝦幼蝦作為桃拉綜合征病毒指示器，對(duì)疑似感染蝦進(jìn)行生物檢測(cè)，具體方法有口服法和注射法?？诜ǎ涸摲ū容^容易操作，可用較小的SPF凡納濱對(duì)蝦幼蝦進(jìn)行試驗(yàn)。指示蝦隨機(jī)分為兩組，其中感染組以剁碎的疑似感染蝦樣品飼喂，對(duì)照組以正常飼料飼喂，然后對(duì)兩組蝦進(jìn)行臨床觀察和大體病理、組織病理學(xué)診斷。注射法：將采集的可疑蝦頭或全蝦樣品與TN緩沖液或2%的無(wú)菌生理鹽水按1：2或1：3混合勻漿，離心取上清作為接種物，對(duì)指示蝦進(jìn)行肌內(nèi)注射，然后進(jìn)行臨床觀察和外觀癥狀、組織病理學(xué)診斷。注射接種法宜采用較大的指示蝦進(jìn)行。
②免疫檢測(cè)技術(shù)：
斑點(diǎn)酶免疫反應(yīng)（DBI）：該法以感染蝦或SPF蝦血淋巴制取純化病毒，作為檢測(cè)抗原，點(diǎn)加于MA-HA-N45反應(yīng)板表面，干燥后，以磷酸鹽緩沖液和含山羊血清與酪蛋白的吐溫20進(jìn)行阻斷。用單抗TSVMAb1A1進(jìn)行斑點(diǎn)酶免疫反應(yīng)。
其他抗體檢測(cè)方法：包括利用TSV MAb1A1單克隆抗體的間接熒光抗體法（IFAT）和免疫組化法（IHC）等。這些方法適用于組織印片、冰凍切片和脫蠟的固定組織樣品及Davidson'sAFA固定的組織樣品中的病毒檢測(cè)。
③分子檢測(cè)技術(shù)：目前已開(kāi)發(fā)有原位雜交實(shí)驗(yàn)（ISH）、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（real-timequantitativeRT-PCR）等方法。原位雜交實(shí)驗(yàn)是采用非放射性的以地高辛標(biāo)記的eDNA探針進(jìn)行，敏感性高于傳統(tǒng)的病理組織學(xué)診斷方法。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法適用于對(duì)蝦的各生活期、非對(duì)蝦的生物和底泥等樣品中TSV帶毒情況的定性檢測(cè)，以進(jìn)行病原篩查和疾病的確診，但該法單獨(dú)使用時(shí)不適用于對(duì)病毒量、存在狀態(tài)（玷污、攜帶和感染狀態(tài)）或感染活性等的估測(cè)以及宿主感染程度的評(píng)估。實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法具快速、特異和敏感優(yōu)點(diǎn)，對(duì)TSV基因組目標(biāo)序列檢測(cè)靈敏度大約為100個(gè)拷貝。
【防治方法】
（1）預(yù)防進(jìn)行水體消毒，每10～15天（特別是在進(jìn)水、換水后）應(yīng)及時(shí)用漂白粉等含氯消毒劑消毒。調(diào)控水質(zhì)，保持整蝦池水質(zhì)平衡及穩(wěn)定。蝦池pH一般維持在8.0～8.8，氨氮0.5mg/L以下，透明度維持在30～60cm。在養(yǎng)殖過(guò)程中，定期使用水質(zhì)及底質(zhì)改良劑，改良養(yǎng)殖池底質(zhì)。特別是在養(yǎng)殖中后期，應(yīng)用光合細(xì)菌、硝化細(xì)菌等微生態(tài)制劑的改良劑進(jìn)行水質(zhì)和底質(zhì)改良。配合使用維生素、聚維酮碘等進(jìn)行預(yù)防。也可以在飼料中添加生物活性物質(zhì)或免疫促進(jìn)劑，增強(qiáng)蝦體非特異性免疫功能。
（2）控制可通過(guò)培育或引進(jìn)抗病品種、切斷傳染源以及加強(qiáng)飼養(yǎng)管理等綜合措施控制本病的暴發(fā)。對(duì)苗種場(chǎng)、良種場(chǎng)應(yīng)實(shí)施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度；加強(qiáng)疫病監(jiān)測(cè)與檢疫，掌握其流行情況。
（3）處理TSV檢疫陽(yáng)性結(jié)果的親蝦和商品養(yǎng)殖蝦必須進(jìn)行無(wú)害化處理，禁止用于繁殖育苗、放流或直接作為水產(chǎn)餌料使用。
（未完待續(xù)）
（通聯(lián)：430072，中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所武漢市武昌東湖南路7號(hào)）
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