梁英杰，周德鵬，李　錚，徐　華，宋玉印

(遼河油田總醫(yī)院檢驗科，遼寧盤錦 124010)

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·臨床研究·

根據NCCLS-EP9-A2方案對不同生化檢測系統(tǒng)血清鈣可比性分析

梁英杰，周德鵬，李錚，徐華，宋玉印

(遼河油田總醫(yī)院檢驗科，遼寧盤錦 124010)

摘要:目的通過對血清鈣不同檢測系統(tǒng)的測定進行方法比對和偏倚評估，探討血清鈣在不同檢測系統(tǒng)間測定結果的可比性，為不同實驗室檢驗結果的互認和醫(yī)學實驗室正確度認可提供數據。方法參考美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)的EP9-A2文件，以寧波美康生物科技股份有限公司MS-880生化分析儀、寧波美康生物科技股份有限公司試劑、寧波美康生物科技股份有限公司校準品和質控品組成的檢測系統(tǒng)1(參加室間質評成績優(yōu)秀，定期校準)為比較方法(X),檢測系統(tǒng)2是以另一臺日立7600-020生化分析儀為實驗方法(Y),用患者新鮮血清測定鈣離子，計算(X)和(Y)之間的相對偏差(SE%)和預期偏差的可信區(qū)間，以CLLA′88規(guī)定的室間質評為標準,允許誤差范圍定為1/2，以不同檢測系統(tǒng)的測定結果判斷在不同醫(yī)學決定水平的可比性。結果該實驗中鈣在兩種生化分析系統(tǒng)不同醫(yī)學決定水平處檢測結果的預期偏倚在允許誤差范圍內，線性回歸方程及相關性良好(r2>0.95),結果具有可比性。結論在嚴格按照操作規(guī)程進行校準和質控在控的前提下，使用同一檢測方法及兩種分析系統(tǒng)測定血清鈣的結果基本一致，在同一實驗室可以同時使用這2種系統(tǒng)檢測相同的項目。

關鍵詞:檢測系統(tǒng)；偏倚評估；血清鈣；正確度

檢測系統(tǒng)作為一個體系，主要是指包含完成一個檢驗項目所涉及的儀器、試劑、校準物、保養(yǎng)計劃、檢驗程序等的組合。其中，保證實現同一檢驗項目不同檢驗系統(tǒng)結果的可比性是質量管理的目標和重點。目前ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的同用要求》和ISO/15189《醫(yī)學實驗室-質量和能力的專用要求》是參考實驗室認可的兩個國際標準均對檢驗結果的可比性和溯源性提出了明確的要求，上述標準強調主要是比對實驗，是檢驗工作者實現準確度溯源和患者標本檢驗結果可比性的重要手段。目前在中國，檢驗界關注和討論的熱點是各個地區(qū)、各個實驗室均大量使用自建檢測系統(tǒng)[1](A+B+C即實驗儀器、校準品、試劑均來自不同廠家)，在這樣的情況下，檢驗結果如何進行比對實驗。怎樣評估不同檢測系統(tǒng)檢驗結果的偏差[2]，如何判斷不同檢測系統(tǒng)間結果的可比性[3]，就更加需要一定的數據進行評估。本研究參考NCCLS-EP9-A2文件[4]，對不同檢測系統(tǒng)血清鈣測定進行方法比對和偏倚評估，為實現血清鈣測定的溯源性和可比性提供實驗數據。

1材料與方法

1.1樣品來源每日收集患者新鮮血液(抽選出無黃疸、溶血、脂血的患者)按照盡量覆蓋醫(yī)學決定水平高、中、低的標準制成相應濃度的檢測項目樣本，共計8份，采取以40個以上標本為測試。要求盡量從一個患者采取有足夠量以備兩種方法做雙份測定的標本。如果無法做到，可以將兩個病史相同、被測物濃度也大致相近的患者標本混合使用，但不超過兩個。

1.2儀器與試劑檢測系統(tǒng)1(參加室間質評成績優(yōu)秀，定期校準)寧波美康生物科技股份有限公司MS-880生化分析儀、寧波美康生物科技股份有限公司試劑、寧波美康生物科技股份有限公司校準品和質控品，檢測系統(tǒng)2：另一臺Hitachi 7600-020生化分析儀。Ca2+為偶氮胂III終點法。

1.3方法

1.3.1熟悉階段此階段，操作者應按照要求掌握生化儀的操作程序和保養(yǎng)程序、并對樣本準備方法、校準以及檢測程序等進行熟悉。比對實驗中要嚴格按照廠商試劑盒的說明書進行校準，然后測定質控品、樣品，質控品穿插于樣品間進行測定。

1.3.2正式實驗階段按NCCLS EP9-A2標準文件準備標本，每天按照標準收集患者不同濃度的血清標本至少收集8份，持續(xù)收集5 d，濃度范圍盡可能處于該項目的分析測量范圍之內，其中需要使至少50%的實驗標本分析物的含量不在參考區(qū)間內，每個標本分析物含量越寬越好。每個標本重復測定兩次，指定第一次測定順序，第二次反序測定。(可減少交叉污染及漂移對重復測定標本平均值的影響)順序中的濃度應盡可能隨機排列。每天的樣本應在2 h內測定完畢，以確保分析物穩(wěn)定。實驗數據分布情況見表1(見《國際檢驗醫(yī)學雜志》網站主頁“論文附件”)。

1.4質量控制在正式實驗前應建立常規(guī)質量控制程序。如果出現失控時應重新測定，直到達到要求的樣本數為止。

1.5數據收集和整理

1.5.3比較方法(X)測定范圍檢驗X的分布范圍是否合適，可用相關系數(r)作粗略估計。計算公式如下：

如r≥0.975或r2≥0.95，則認為X范圍合適，直線回歸方程的斜率和截距可靠；可以用簡單的直線回歸來估計斜率和截距。如r<0.975，則必須分析更多的樣品以擴大數據濃度范圍，然后再重新分析全部數據。如果X的取值范圍無法擴大，則需采用分部偏倚代替回歸方法來評價平均偏倚。

1.5.4計算線性回歸方程Y=bX+a，b和a分別表示兩種方法間的比例誤差和恒定誤差。

1.5.5計算預期偏倚和可信區(qū)間在Y軸方向上數據點與回歸線之差稱為此點的殘差，這些殘差的標準差稱標準誤(Sy,x)，是測量圍繞回歸線的數據點的“離散度”。根據公式計算某一點的殘差、預期值的標準誤、在給定的醫(yī)學決定水平Xc處的預期偏倚(Bc)及其95%的可信區(qū)間。根據臨床使用要求，可在各個臨床決定水平濃度Xc處，了解Y方法引入后相對于X方法的預期偏倚Bc。Bc=a+(b-1)Xc為Bc的95%的可信區(qū)間:

以CLIA′88規(guī)定的室間質量評價允許誤差范圍的1/2作為該項在給定水平濃度處的允許誤差，將預期偏倚的可信區(qū)間與給定水平濃度處的允許誤差相比較，允許誤差大于預期偏倚的可信區(qū)間上限，檢測方法可接受；預期偏倚的可信區(qū)間上限大于允許誤差大于預期偏倚的可信區(qū)間下限，檢測方法與比較方法相當；允許誤差小于預期偏倚的可信區(qū)間下限，檢測方法不可接受。

1.6統(tǒng)計學處理所有數據均在Excel2007統(tǒng)計學軟件進行分析處理。

2結果

2.12個檢測系統(tǒng)實驗數據見表2。

2.3數據作圖見圖1(見《國際檢驗醫(yī)學雜志》網站主頁“論文附件”)。

2.4X值合適范圍的檢驗r≥0.975為X值取值范圍合適。

2.6估算Ca在給定水平處的預期偏倚及可信區(qū)間計算該項目的醫(yī)學決定水平分別為Xc1=1.75、Xc2=2.69、Xc3=3.24。CLIA′88允許總誤差為10%，按照1/2允許誤差的標準，其允許偏倚分別為0.087 5、0.013 45、0.162。預期偏倚見表3(見《國際檢驗醫(yī)學雜志》網站主頁“論文附件”)。

表2　　檢測系統(tǒng)1、2的原始數據

3討論

EP9-A2方案主要用于評價同一檢驗項目兩種測量方法之間的偏倚，并確定其偏倚是否在可接受的范圍內。通常新方法為實驗方法，與之比較的方法稱為比較方法。比較方法可以是參考方法，也可以是廠家聲明的方法或者檢驗科目前使用的常規(guī)方法(準確度已得到確認)。其過程相對簡單，主要在于統(tǒng)計學處理。

本實驗根據EP9-A2的方案對2種檢測系統(tǒng)進行了比較，檢測系統(tǒng)1的試劑、校準品、質控品均可溯源，具有較好的量值傳遞性能，參加室間質評成績優(yōu)秀，定期校準，測定結果可靠，故為比較方法(X)；系統(tǒng)2為實驗方法(Y)。

兩個檢測系統(tǒng)的方法重復性都良好，方法內和方法間都沒有離散點，兩個檢測系統(tǒng)的測定結果相關線性較好，對截距和斜率的評估可靠r=0.995 588 453>0.975。截距系數a為0.034 045，說明恒定系統(tǒng)誤差??；斜率系數b接近1，說明比例系統(tǒng)誤差小。

以CLIA′88規(guī)定的室間質量評價允許誤差范圍的1/2作為該項在給定水平濃度處的允許誤差，預期偏倚可信區(qū)間的上限大于EA大于預期偏倚可信區(qū)間的下限，證明該實驗方法與比較方法結果相當；可以被接受。

兩種方法測定血清鈣水平可以得到基本一致的結果，2006年衛(wèi)生部發(fā)布《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》,以及CNAS CL02:2007[4](ISO15189:2003),醫(yī)學實驗室質量和能力認可的不斷深入，臨床實驗室應該做好各儀器的室內質控外，還需要可溯源的目標檢測系統(tǒng)，做好自建檢測系統(tǒng)的測定結果與目標檢測系統(tǒng)的結果比較，使其具有可比性。

本次血清鈣的測定中均是利用一臺美康MS-880和一臺日立7600-020的P2模塊，日立7600-020封掉P1模塊，這么做的目的是盡量保證外因相同，減少儀器本身對實驗結果的干擾。如不封模塊P1，儀器對放入其中的血樣是隨機分配的，可能會在P1模塊狀態(tài)下測定，也可能會在P2模塊狀態(tài)下測定，不能正確的判斷出其是哪個模塊狀態(tài)下完成的測試。其次，可能會因為血樣本身的狀態(tài)對結果造成一定的干擾，如溶血、脂血、黃疸等，在日常工作中，儀器不可能永遠處于最佳狀態(tài)，雖然是隨機分配通道，但是吸樣針和清洗機可能因受到標本的輕微堵塞而造成檢測系統(tǒng)性能受到影響，可能會因為以上原因造成注射針頭堵塞或污染進而導致實驗被干擾，從而測定結果出現偏倚。檢驗科內不同儀器間，即使每臺儀器工作性能穩(wěn)定、室內質控正常，檢測結果都有可能存在較大系統(tǒng)誤差，需要定期開展比對實驗和對儀器進行校準，探索造成變異的原因，使不同儀器間的相對偏差在可接受范圍，同樣也是對室內、室間質控的良好補充。

兩種測量方法的差異還可能由于不同的檢測系統(tǒng)因方法學、靈敏度、準確性及線性等差異甚至與試劑質量、質控品質量、儀器狀態(tài)，質控標準和工作人員技術水平有關。

由于是各檢驗科自建系統(tǒng)，各科室應用的試劑也不盡相同，可能與試劑的更換周期不同或在使用試劑過程中試劑受到污染或者在存放過程中變質甚至錯加試劑等因素導致了造成檢測性能受到影響。另外要特別注意確保定標、質控及標準化操作各步驟的標準化，使檢驗結果為臨床提供可靠的實驗室數據。

校準檢測系統(tǒng)的最佳校準品是新鮮混合血清，它可以規(guī)避人源基質質控品的基質效應。而生化危急值項目是臨床上最關注的檢驗項目，在之前的相關文獻報道中，關于血清鈣測定結果的比對很少，可能是因為鈣離子測定重復性不好，變異系數大，所以關于鈣的適宜比對方法尚在探討中。該比對方案目前標本量大、檢測濃度水平分布廣、可允許的偏差小，更能及時發(fā)現檢測系統(tǒng)性能變化，從而更好地保證了檢驗質量。

儀器的日常維護與保養(yǎng)對實驗的結果也有一定的影響，每次測定除了存在誤差外，與樣品中的水分風干、蒸發(fā)也有一定的關系。溫濕度等一些看似微不足道的因素同樣也要引起關注，對于工作人員要開展定期培訓和考核，加強儀器的規(guī)范操作，檢測結果真實地體現了實驗室的真實水平，所以提高上述問題的改善有助于提高實驗室檢測結果的準確。

綜上所述，在檢測系統(tǒng)性能驗證的大前提下，在保證了檢測系統(tǒng)正確度及準確性的前提下，定期參照EP9-A2文件進行規(guī)范化的比對是保證檢驗結果的基礎，在嚴格是室內質控下，可以通過增加常規(guī)比對來擴大監(jiān)控的范圍，及時發(fā)現結果的不穩(wěn)定因素，所以建立不同檢測系統(tǒng)測定結果間的比對機制，能保證實驗室內結果的一致性，為臨床檢測結果的互認提供可靠數據。

參考文獻

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(收稿日期：2015-10-24)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.059

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)04-0558-04