胚胎性轉(zhuǎn)錄因子FOXC2調(diào)控卵巢癌細(xì)胞增殖與侵襲的作用機(jī)制

周 星(鄭州大學(xué)附屬洛陽(yáng)中心醫(yī)院，河南 洛陽(yáng) 471099)

胚胎性轉(zhuǎn)錄因子FOXC2調(diào)控卵巢癌細(xì)胞增殖與侵襲的作用機(jī)制

周 星
(鄭州大學(xué)附屬洛陽(yáng)中心醫(yī)院，河南 洛陽(yáng) 471099)

目的 卵巢癌已經(jīng)是臨床婦科腫瘤常見(jiàn)腫瘤之一，其發(fā)病率逐年走高。其發(fā)病機(jī)制學(xué)說(shuō)存在多種假說(shuō)。本文探討了胚胎性轉(zhuǎn)錄因子FOXC2調(diào)控卵巢癌細(xì)胞增殖與侵襲的作用機(jī)制。方法 對(duì)我院2013年7月-2015年7月收治的女性患者的正常卵巢組織標(biāo)本和癌卵巢組織標(biāo)本免疫組織化學(xué)染色，觀察FOXC2的分布。結(jié)果 正常卵巢組織標(biāo)本中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)FOXC2的表達(dá)，在上皮性卵巢癌，交界性漿液性囊腺腫瘤中發(fā)現(xiàn)了FOXC2的表達(dá)，主要分布在間質(zhì)血管、腫瘤細(xì)胞核等。結(jié)論 FOXC2對(duì)上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為間質(zhì)細(xì)胞過(guò)程中是關(guān)鍵的調(diào)控因子之一，可以促進(jìn)細(xì)胞遷徙；可以誘導(dǎo)腫瘤病灶中血管生成，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷徙。

FOXC2；卵巢增殖；侵襲

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

研究對(duì)象為我院2013年7月-2015年7月收治的女性患者的卵巢組織共18例，其中屬于上皮性卵巢癌14例，交界性漿液性囊腺腫瘤3例，正常卵巢組織1例。獲取的組織樣本使用磷酸鹽緩沖液進(jìn)行清洗，清洗之后浸在福爾馬林中24h固定。

1.2 主要儀器

光學(xué)顯微鏡Olympus、環(huán)凱牌恒溫水箱、ERM3000 生物組織切片機(jī)

1.3 主要試劑

FOXC2 兔抗人多克隆抗體（LSBio）、SP羊抗兔/小鼠免疫組化試劑盒（上海研卉生物科技有限公司）、DAB顯色試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）、甲醛（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）、蘇木精（上海邁瑞爾化學(xué)技術(shù)有限公司）。

1.4 方法

將標(biāo)本進(jìn)行HE和免疫組織化學(xué)染色。載玻片清洗干凈，進(jìn)行酸處理24h，然后蒸餾水沖洗干凈，晾干。然后載玻片包被多聚賴氨酸，晾干。取福爾馬林中固定的標(biāo)本組織進(jìn)行酒精脫水。脫水的方法采用梯度法，80%酒精、90%酒精、100%酒精從低到高一次脫水；之后二甲苯透明處理。然后進(jìn)行組織包埋，標(biāo)本組織石蠟包埋后放在4℃冰箱過(guò)夜。將包埋好標(biāo)本組織的蠟塊進(jìn)行切片，將切片貼片于載玻片，60-70℃烘箱烘烤100min。將切片中的石蠟利用二甲苯進(jìn)行脫蠟處理，之后利用從高到低梯度的乙醇進(jìn)行復(fù)水。免疫組織化學(xué)染色需要對(duì)抗原進(jìn)行修復(fù)，修復(fù)的方法采用檸檬酸鹽和微波的方式進(jìn)行修復(fù)。然后，利用3%雙氧水孵育5-10min，消除內(nèi)源性的過(guò)氧化物酶活性。使用滴加馬血清，室溫孵育10min封閉。滴加一抗FOXC2，37℃孵育2h。PBS沖洗5分鐘，共沖洗3次，然后加入連接辣根過(guò)氧化物酶的二抗，37℃孵育20min，然后顯色劑DAB顯色，復(fù)染，脫水并透明，最后中性樹膠封片。

1.5 觀察數(shù)據(jù)

觀察FOXC2在卵巢癌細(xì)胞、間質(zhì)血管等的表達(dá)。

2 結(jié) 果

2.1 正常卵巢組織和交界性漿液性囊腺腫瘤染色結(jié)果

觀察正常卵巢組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，在切片中并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)棕色深染區(qū)域，即FOXC2沒(méi)有在正常卵巢組織表達(dá)。觀察交界性漿液性囊腺腫瘤切片組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，在切片發(fā)現(xiàn)棕色深染區(qū)域主要分布在血管或者淋巴管和腺體細(xì)胞中，即FOXC2在血管或者淋巴管和腺體細(xì)胞中表達(dá)。

2.2 上皮性卵巢癌染色結(jié)果

觀察上皮性卵巢癌組織切片發(fā)現(xiàn)，上皮性卵巢癌組織病灶存在大量棕色深染顆粒，即FOXC2在上皮性卵巢癌中大量表達(dá)，呈陽(yáng)性。FOXC2在腫瘤細(xì)胞核中大量表達(dá)，細(xì)胞核體積出現(xiàn)明顯的增大。

2.3 間質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞染色結(jié)果

上皮性卵巢癌組織切片和交界性漿液性囊腺腫瘤組織切片中發(fā)現(xiàn)FOXC2在間質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)強(qiáng)烈。

3 討 論

本研究中發(fā)現(xiàn)卵巢腫瘤間質(zhì)血管有FOXC2表達(dá)，這可能是促進(jìn)新生血管為其惡化腫瘤提供營(yíng)養(yǎng)。這主要涉及到血管新生的信號(hào)通路Notch，該信號(hào)通路主要是對(duì)血管形成和胚胎時(shí)期動(dòng)脈分化進(jìn)行調(diào)控。FOXC2作為該信號(hào)通路上重要的分子，對(duì)動(dòng)脈細(xì)胞的分化起著至關(guān)重要的作用。FOXC2可以激活Notch配體DLL4的啟動(dòng)子，Notch和DLL4對(duì)動(dòng)脈細(xì)胞的分化有決定性作用。因此，F(xiàn)OXC2通過(guò)調(diào)控的DLL4蛋白分子可以控制內(nèi)皮細(xì)胞的分化[1-3]。FOXC2既可以影響內(nèi)皮細(xì)胞的遷徙也可以調(diào)控動(dòng)脈細(xì)胞的分化。FOXC2在腫瘤細(xì)胞核中表達(dá)強(qiáng)烈，可能也是調(diào)控DNA轉(zhuǎn)錄，影響腫瘤細(xì)胞發(fā)展的重要轉(zhuǎn)錄因子之一。

[1] 楊念念.中國(guó)2009年卵巢癌發(fā)病與死亡分析[J].中國(guó)腫瘤,2013(08):617-621.

[2] 鄭春花.轉(zhuǎn)錄因子 FOXC2 在宮頸癌發(fā)生的研究[D].吉林:吉林大學(xué),2014.

[3] 馬珂等. Notch3 及 Notch 基因細(xì)胞內(nèi)區(qū)在卵巢上皮性癌組織中的表達(dá)及DAPT 對(duì)卵巢上皮性癌細(xì)胞的作用[J].中華婦產(chǎn)科雜志, 2010, 45(12):921-926.

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ISSN.2095-8803.2016.09.0015.02