馬 瑩

(濟(jì)南畜牧技術(shù)推廣站,山東濟(jì)南 250031)

談奶牛性控凍精技術(shù)

馬 瑩

(濟(jì)南畜牧技術(shù)推廣站,山東濟(jì)南 250031)

提高對(duì)性控凍精技術(shù)實(shí)踐效果宣傳力度,通過(guò)重點(diǎn)區(qū)域、重點(diǎn)小區(qū)的示范使用,使廣大養(yǎng)殖戶意識(shí)到性控凍精的使用價(jià)值,從而慢慢接受并使用性控凍精;政府各部門制定優(yōu)惠政策,加大對(duì)奶牛養(yǎng)殖的扶持力度,調(diào)動(dòng)奶農(nóng)的養(yǎng)殖積極性;加大對(duì)性控凍精技術(shù)的研究資金投入,著力降低性控凍精生產(chǎn)的成本。

奶牛;性控凍精;技術(shù)使用

目前奶牛的主要繁殖方式是人工授精技術(shù)，從成本、效果來(lái)看，應(yīng)用性控精液（X精液）通過(guò)人工授精來(lái)獲得雌性犢牛是最佳途徑，也是我們要推廣的奶牛性別控制技術(shù)。

1 性控精液獲得方法

性控精液的獲得方法主要是流式細(xì)胞儀法，牛精液中X精子和Y精子的DNA含量差異大更加容易分離，目前X精子的分離準(zhǔn)確度可達(dá)90%以上。流式細(xì)胞儀分離法其主要流程包括采集精液——精液品質(zhì)檢測(cè)——合格者染色——流式細(xì)胞儀分離——性控精液冷凍——解凍。在精液分離冷凍處理過(guò)程中，精細(xì)胞可能受到許多因素的干擾，如：采集到處理的間隔時(shí)間、高度稀釋、核染色、機(jī)械壓力（通過(guò)檢索儀時(shí)、激光照射、離心、冷凍等）。有研究表明，采集到處理的間隔時(shí)間越長(zhǎng)，分離處理的效果越差，間隔時(shí)間一般不應(yīng)超過(guò)24h，造成分離效果下降的原因，可能是在間隔時(shí)間內(nèi)，環(huán)境因素會(huì)造成線粒體產(chǎn)生的活性氧（ROS）增加，較高的ROS水平將會(huì)使精子線粒體發(fā)生膨脹，誘導(dǎo)線粒體膜通透性發(fā)生改變，釋放細(xì)胞色素C及其他凋亡相關(guān)因子損傷精子，損傷的精子又進(jìn)一步增加ROS的生成，最終導(dǎo)致精液品質(zhì)下降。另外，在精液冷凍解——凍過(guò)程中會(huì)造成部分精子的損傷和死亡，從而，產(chǎn)生更多對(duì)精細(xì)胞有害的ROS，精細(xì)胞的氧化損傷程度與精子冷凍效果有密切關(guān)系。為此，研究者一直以來(lái)，致力于研究精液冷凍保存的方法，探索選擇合適的染色液、稀釋液、鞘液、收集液、保存液、抗氧劑種類以及合適的冷凍保存方式，來(lái)提高精液冷凍保存的效果。稀釋液的種類和配方對(duì)精液的冷凍效果非常重要，組成稀釋液的主要成分包含糖類、鹽類、蛋白類及一些抗凍保護(hù)劑。常用的糖類有葡萄糖、蔗糖、乳糖和果糖等，稀釋液的糖類物質(zhì)不僅為精細(xì)胞提供能量，還具有一定的防凍作用，甘油是一種常用的抗凍保護(hù)劑，因?yàn)楦视蜐舛葘?duì)精子活力和頂體完整率有一定影響，對(duì)精細(xì)胞有一定的毒害作用，因此在運(yùn)用中應(yīng)注意控制其濃度。有研究發(fā)現(xiàn)，卵黃配合抗凍劑甘油對(duì)精液的冷凍保存也具有重要的作用。一般，卵黃的適宜添加量在15～20%，再進(jìn)行充分?jǐn)嚢杌靹?。添加抗氧化劑主要是抑制精?xì)胞內(nèi)的自由基的生成，預(yù)防不飽和酸發(fā)生過(guò)氧化，從而對(duì)精細(xì)胞膜起到保護(hù)作用。添加的抗氧化劑種類主要有維生素和一些酶類，維生素C和維生素E在具有重要的抗氧化作用，稀釋液中添加維生素E能夠增強(qiáng)牛精子抗氧化酶活性，可以使精子冷凍—解凍后的質(zhì)量得到提高，其添加的適宜劑量為1.5mg/ml。在冷凍稀釋液中添加維生素C對(duì)荷斯坦種公牛X精子的影響發(fā)現(xiàn)，隨著解凍時(shí)間的延長(zhǎng)，維生素C能夠減緩精子的死亡，而解凍時(shí)間短則效果不明顯，其適宜添加量為4～6mg/ml，并且發(fā)現(xiàn)荷斯坦公牛X精子在解凍后，其精子活率、質(zhì)膜完整率及頂體完整率都有顯著提高。對(duì)奶牛性控凍精生產(chǎn)工藝進(jìn)行改進(jìn)發(fā)現(xiàn)，改進(jìn)后的精子活率、頂體完整率、母牛受胎率、犢牛性別控制準(zhǔn)確率以及精液中抗氧化物酶活性都有顯著提高，在大幅度降低成本的同時(shí)加快了分離速度，并且提高了每支細(xì)管中的有效精子含量。值得注意的是，在冷凍處理前可以對(duì)精子進(jìn)行優(yōu)選，將死精畸形精進(jìn)行剔除，可以有效降低冷凍處理后的死精數(shù)，使得ROS產(chǎn)生減少，從而提高精液品質(zhì)。

2 輸精技術(shù)

性控凍精有效精子數(shù)遠(yuǎn)低于常規(guī)凍精，價(jià)格高于常規(guī)凍精，因此如何提高受胎率，節(jié)省成本就顯得非常關(guān)鍵了。在運(yùn)用性控凍精輸精時(shí)，不僅要嚴(yán)格掌握好輸精時(shí)間，而且要有過(guò)硬的輸精技術(shù)，才能達(dá)到理想的受胎率。有很多資料表明：性控凍精輸精部位不同，受胎率也不同，而且存在明顯差異。子宮角深部輸精比子宮體輸精受胎率高出很多，效果也更好。但也對(duì)人工授精員提出了更高的標(biāo)準(zhǔn)、更嚴(yán)的要求。在輸精時(shí)要求做到：慢插、輕拉、緩出，輸精完畢，套管口不應(yīng)有血跡，具體如下：（1）輸精前用紙巾將陰戶擦干凈，嚴(yán)禁用消毒水清洗陰戶；（2）進(jìn)槍時(shí)，以35°～40°角向上插入5～10cm，避開尿道口后，再改為略向前下方進(jìn)入陰道；（3）從直腸把握子宮頸；（4）內(nèi)外兩手協(xié)調(diào)操作；（5）不應(yīng)以外面手強(qiáng)硬操作；（6）輕柔地使輸精槍通過(guò)子宮頸，滑向子宮體內(nèi)至子宮體前沿，達(dá)卵泡側(cè)子宮角深部大彎處；（7）輸精槍到達(dá)輸精部位后緩慢注入精液；（8）輸精完畢，緩慢退出輸精槍，按摩子宮直至外陰有強(qiáng)烈收縮最佳；（9）如需促排可在輸精后肌注LRH-A325～50μg。

3 奶牛性控凍精應(yīng)用的體會(huì)

對(duì)專業(yè)技術(shù)工作，態(tài)度一定嚴(yán)謹(jǐn)、認(rèn)真負(fù)責(zé)，業(yè)務(wù)嫻熟。充分掌握實(shí)施對(duì)象的全面情況，如種精液的保管，種精液的解凍時(shí)間的問(wèn)題，精子活力是否達(dá)到3.5以上，有效精子數(shù)應(yīng)不少于1000萬(wàn)個(gè)。還有輸精時(shí)間和次數(shù)的考慮，一般發(fā)情開始后或排卵前12h左右適宜輸精，發(fā)情期內(nèi)輸精1～2次，相隔8～12h為佳。做好工作前牛只及操作人員，器具的衛(wèi)生檢查和衛(wèi)生消毒處理，備品的擺放，技術(shù)工作無(wú)小事，無(wú)死角，為工作人員及牛只創(chuàng)造優(yōu)質(zhì)的環(huán)境，防止應(yīng)激情況的出現(xiàn)。臨床來(lái)看，母牛的受精效果是，子宮正常的與患病的牛只的情期受孕率比為62%和46%，差異非常明顯。力爭(zhēng)達(dá)到衛(wèi)生檢查工作、并做好患牛治診斷，主要是確保母牛受孕成功。

[1] 趙永靜.提高種公牛精液品質(zhì)的幾項(xiàng)措施[J].養(yǎng)殖技術(shù)顧問(wèn)，2014，（10）：54-56.