蘇 勇

（遼寧省沈陽市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧沈陽 110034）

弓形蟲病血清學(xué)檢測方法研究進(jìn)展

蘇 勇

（遼寧省沈陽市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧沈陽 110034）

弓形蟲病是由剛第弓形蟲（toxop1asma gondii）引起的一種人畜共患寄生蟲病。呈世界性分布，各種家畜，包括豬、牛、羊、犬、貓和試驗(yàn)動(dòng)物，包括小白鼠、天竺鼠、家兔等，以及人類，都能感染弓形蟲。弓形蟲病可使孕畜流產(chǎn)死胎，急性弓形蟲病可造成家畜的死亡。弓形蟲感染孕婦后可引起流產(chǎn)，胎兒畸形或產(chǎn)出弱智兒。弓形蟲感染成人后，可侵害神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心臟、淋巴內(nèi)皮系統(tǒng)等多種器官或系統(tǒng)，并造成損傷，嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成死亡。因此弓形蟲病具有重要的公共衛(wèi)生意義。

弓形蟲??；人畜共患寄；公共衛(wèi)生意義

由于弓形蟲病病原學(xué)檢查比較困難且陽性率不高，所以血清學(xué)試驗(yàn)仍是目前廣泛應(yīng)用于診斷的重要參考依據(jù)，從血清或腦脊液內(nèi)檢測弓形蟲特異性抗體，是弓形蟲感染和弓形蟲病診斷的重要輔助手段，尤其是特異性IgM陽性，代表早起感染，特別適用于流行病學(xué)調(diào)查和早期生前診斷。近年來，有不少關(guān)于檢測循環(huán)抗原（CAg）的報(bào)告，表明循環(huán)抗原陽性具有病原學(xué)診斷價(jià)值。

1 抗體檢測方法

1.1 染色試驗(yàn)（Sabin-Feldman dye test，DT）

是最早使用的，公認(rèn)的可靠方法，具有良好的特異性、敏感性個(gè)重復(fù)性。其原理是采用活滋養(yǎng)體在有致活因子的參與下與樣本的特異性抗體作用，使蟲體表膜破壞而不為美蘭著染。鏡檢時(shí)60%蟲體不被藍(lán)染者為陽性，如測定滴度，則以50%蟲體不著色者為血清最高滴度。蟲體多數(shù)被藍(lán)染者為陰性。由于需要適宜的含輔助因子的人血清，并要以活弓形蟲為抗原，故其應(yīng)用受到一定的限制。

1.2 間接血凝試驗(yàn)（IHA）

間接血凝抗體是機(jī)體對弓形蟲可溶性抗原刺激的應(yīng)答，比染色試驗(yàn)抗體出現(xiàn)遲。它雖不是最特異的反應(yīng)，但由于近年來在抗原處理和固定血細(xì)胞方法等方面的不斷改進(jìn)，特異性大大提高。結(jié)果易于判斷，敏感性較高，試劑易于商品化，適于大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查時(shí)使用，目前已有試劑盒出售。

1.3 間接免疫熒光抗體試驗(yàn)（IFA）

以整蟲抗原，采用熒光標(biāo)記的二抗檢測特異抗體。此法可檢測同型及亞型抗體，其中檢測IgM具有早期診斷價(jià)值。但因需要熒光顯微鏡，故在基層推廣有困難。此外檢測IgM還有可能由于被檢血清含類風(fēng)濕因子、抗核抗體等因素產(chǎn)生假陽性。

1.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

用于檢測宿主的特異循環(huán)抗體或抗原，已有多種改良法廣泛用于早期急性感染和先天性弓形蟲病的診斷。有學(xué)者在原有基礎(chǔ)上增加用生物素-親和素系統(tǒng)，其靈敏度可提高數(shù)倍。目前臨床上多采用同時(shí)檢測IgM、IgG診斷現(xiàn)癥感染。目前已有一些新的改進(jìn)技術(shù)，如金黃色葡萄球菌A蛋白-ELISA法，將金黃色葡萄球菌A蛋白標(biāo)記酶，替代第二抗體；其他還有Dot-ELISA、ABC-ELISA等。

1.5 免疫酶染色試驗(yàn)（IEST）

效果與間接免疫熒光抗體試驗(yàn)相似，可用普通光學(xué)顯微鏡觀察，便于基層推廣應(yīng)用。

1.6 微量間接乳膠凝集試驗(yàn)（LAT）

法國和日本十分推崇微量間接乳膠凝集試驗(yàn)。我國楊鐵生等（1991）應(yīng)用自行制備的微量間接乳膠凝集試驗(yàn)試劑盒檢測健康人血清64份和貓血清35份。其敏感性、特異性和重復(fù)性均與日本榮研試劑盒無顯著差異。

2 抗原檢測方法

2.1 循環(huán)抗原（CAg）的檢測方法

是近年來應(yīng)用較多的技術(shù)，循環(huán)抗原比特異性抗體出現(xiàn)早，是病原體存在的特征。常用的方法為ELISA，也有改進(jìn)的斑點(diǎn)-ELISA、黑色素細(xì)胞抗體-ELISA等。具有較高的敏感性和特異性，可診斷弓形蟲急性感染。

2.2 抗弓形蟲McAb的建立與應(yīng)用

采用McAb-微量反向間接血凝試驗(yàn)（RIHA）檢測弓形蟲循環(huán)抗原，制成了用于早期弓形蟲病的診斷試劑盒。

2.3 PCR檢測技術(shù)

夏愛娣等（1992）和韋相才等（1994）建立了診斷弓形蟲病的PCR方法，提取外周血白細(xì)胞DNA進(jìn)行擴(kuò)增，具有較高的敏感性和特異性；石群立等（1992）用建立的PCR檢測80例先天性畸形兒石蠟包埋腦組織中的弓形蟲，擴(kuò)增出13例陽性結(jié)果（43.3%）。

3 展望

近幾年通過大量的試驗(yàn)研究，弓形蟲病診斷研究方面已取得較大進(jìn)展，一些研究成果已經(jīng)或正在對弓形蟲病的防控產(chǎn)生積極影響，但是今后應(yīng)為檢測提供可靠的診斷抗原或抗體，加快解決試劑的標(biāo)準(zhǔn)化問題，建立綜合的檢測系統(tǒng)來彌補(bǔ)單一檢測系統(tǒng)的不足。

［1］ 張二營，周金颯，李維維，等.弓形蟲病免疫學(xué)診斷方法研究進(jìn)展［J］.科學(xué)大眾：科學(xué)教育，2014，（7）：155-155.

［2］ 杜夏夏，徐鵬.弓形蟲病免疫學(xué)診斷方法的研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2015，（2）：55-58.