核酸探針在畜禽疾病診斷中的應(yīng)用

高 旭

（黑龍江省蘿北縣畜牧獸醫(yī)局，黑龍江蘿北 154200）

核酸探針在畜禽疾病診斷中的應(yīng)用

高 旭

（黑龍江省蘿北縣畜牧獸醫(yī)局，黑龍江蘿北 154200）

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)水平的上升，生物科學(xué)技術(shù)也不斷發(fā)展進(jìn)步，在各個(gè)行業(yè)領(lǐng)域當(dāng)中的應(yīng)用越來越廣泛。在畜禽的疾病診斷過程中，使用生物技術(shù)制備的核算探針也越來越多，核算探針具有非常多的優(yōu)勢，幫助畜禽疾病的診斷工作更加精確、可靠。本文主要分析核算探針的診斷特點(diǎn)及其實(shí)際應(yīng)用。

核算探針；疾病診斷；實(shí)際應(yīng)用

當(dāng)前，生物醫(yī)學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展進(jìn)步，在畜禽疾病診斷領(lǐng)域當(dāng)中得到非常廣泛的應(yīng)用，使畜禽疾病的診斷方式發(fā)生巨大轉(zhuǎn)變。使用生物核酸探針技術(shù)對畜禽疾病進(jìn)行診斷，具有特異性強(qiáng)、敏感度高以及簡單快捷的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)還能夠避免由于培養(yǎng)困難、或者是混合污染的現(xiàn)象，能夠快速直接的對畜禽的體液、分泌物等進(jìn)行檢測，不僅為相關(guān)工作人員的共組提供方便，同時(shí)對于畜禽疾病早期診斷與控制起到非常重要的意義，幫助獸醫(yī)選擇最佳的方式進(jìn)行治療，杜絕大面積傳染病的發(fā)生。

1 核算探針在畜禽感疾病診斷中的特點(diǎn)

1.1 特異性強(qiáng)

使用核酸探針進(jìn)行檢測是基于病原微生物的核酸堿基配對原理，通過核酸序列與標(biāo)本中的另外的核酸發(fā)生互補(bǔ)以及結(jié)合，所以不會(huì)發(fā)生雜交的現(xiàn)象，更不會(huì)出現(xiàn)假陽性或者是假陰性，所以其特異性非常強(qiáng)，不會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng)和其他干擾現(xiàn)象。

1.2 靈敏性強(qiáng)

相較于傳統(tǒng)的放射免疫等方式，DNA或者是RNA探針具有更強(qiáng)的靈敏度，能夠檢測出10-12g的抗原含量，在很早以前，美國基因探針公司生產(chǎn)的軍團(tuán)菌探針就已經(jīng)能夠在0.4mg的肝臟組織中檢測出4000個(gè)以上的細(xì)菌。有學(xué)者使用通過生物素標(biāo)記的流產(chǎn)布氏桿菌全基因組的DNA探針能夠在質(zhì)量為1g的大鼠肝混合物當(dāng)中檢測出105個(gè)細(xì)菌，同時(shí)還能夠檢測出通過試驗(yàn)接種的小鼠質(zhì)量為1g的組織中存在的107個(gè)布氏桿菌。在抗原性不強(qiáng)的情況下，使用常規(guī)的檢測方式靈敏度較低，此時(shí)利用核酸探針進(jìn)行檢測非常有效，其靈敏度非常高，對畜禽疾病的診斷具有重要意義。

1.3 檢測速度快

使用常規(guī)的方式需要經(jīng)過病原分離、培養(yǎng)等方式耗費(fèi)大量的時(shí)間才能夠得出檢測結(jié)果，但是之用核酸探針可以在45min之內(nèi)就能夠得到結(jié)果。有學(xué)者使用探針進(jìn)行斑點(diǎn)免疫印跡雜交測試，在感染初期，家禽體內(nèi)開始血清學(xué)應(yīng)答前能夠檢出體內(nèi)的敗血霉形體，采樣之后最多4d就能夠得到試驗(yàn)結(jié)果，如果使用培養(yǎng)的方式則需要更長的時(shí)間。這樣就能夠在早期進(jìn)行快速的診斷、縮短時(shí)間，幫助工作人員及時(shí)治療和控制病情。

1.4 方法簡單

核酸探針的方式能夠?qū)π笄莼铙w、死體甚至是體液和分泌物等進(jìn)行檢測，不需要進(jìn)行體外擴(kuò)增培養(yǎng)，更不需要使用其他設(shè)備輔助觀察，流程非常簡單。

2 核酸探針在畜禽疾病診斷中的實(shí)際應(yīng)用

2.1 對雞傳染性法氏囊病毒的檢測

早前有學(xué)者使用生物素對合成寡合苷酸探針進(jìn)行標(biāo)記，將雞法式囊組織在硝酸纖維膜上進(jìn)行印記，然后與被生物素標(biāo)記的探針進(jìn)行雜交，隨后對人工方式感染的雞的機(jī)體進(jìn)行檢測，取得非常滿意的效果。之后又有學(xué)者使用26CI探針進(jìn)行斑點(diǎn)雜交，對血清1型和2型的不同IBDV實(shí)施檢測，結(jié)果顯示探針沒有與病毒發(fā)生交叉反應(yīng)。且該探針檢測病毒與核算的最小量可以達(dá)到1mg，同時(shí)能夠檢測出注射疫苗2～3d之后雞的機(jī)體中雞法氏囊病毒以及組織當(dāng)中存在的IBDV。

2.2 對雞馬立克氏病毒的檢測

我國生物研究者使用光敏的生物素對特定基因文庫中的L片斷進(jìn)行標(biāo)記，制備出雞馬立克氏病毒的光敏核酸探針，然后對培養(yǎng)物當(dāng)中的病毒實(shí)施檢測，發(fā)現(xiàn)探針對病毒中的血清1型馬立克氏病毒中的DNA分子發(fā)生雜交，而2型和3型都不發(fā)生雜交反應(yīng)。然后使用血清1型和血清2型對雛雞進(jìn)行接種，在第14天及30d使用斑點(diǎn)雜交法實(shí)施病毒DNA的檢測，結(jié)果血清1型的結(jié)果呈現(xiàn)陽性，而血清2性的結(jié)果呈現(xiàn)陰性，證明制備的核酸探針能夠?qū)﹄u馬立克氏病毒的強(qiáng)毒株進(jìn)行診斷。

2.3 對雞減蛋綜合癥病毒的檢測

研究在使用制備的光敏性生物素探針對雞減蛋綜合癥病毒感染的鴨胚尿囊液提取物實(shí)時(shí)監(jiān)測，結(jié)果能夠證實(shí)該探針對于雞減蛋綜合癥病毒具有很強(qiáng)的特異性，同時(shí)能夠檢測到至少1pg的雞減蛋綜合癥病毒DNA；但是在正常的鴨胚尿囊液的提取物不會(huì)與無質(zhì)粒的受體菌DNA發(fā)生雜交反應(yīng)。

2.4 對雞新城疫病素的檢測

國外的相關(guān)研究人員使用人工合成的寡合核苷酸DVA制備的探針進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對環(huán)境及其他條件非常嚴(yán)格，然后試試狹縫印跡雜交實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示該探針能夠識(shí)別出被檢出的15個(gè)NDV。該探針的序列來源于雞新城疫病素基因組高度保守區(qū)域，具有非常強(qiáng)的特異性，與其他病毒如禽流感病毒、傳染性法氏囊病毒等不發(fā)生交叉反應(yīng)。

3 結(jié)束語

總而言之，核酸探針是一項(xiàng)具有很多優(yōu)點(diǎn)的畜禽疾病診斷方式，能夠快速、準(zhǔn)確的檢測出畜禽體內(nèi)的病毒，幫助獸醫(yī)及時(shí)采取針對性的措施進(jìn)行處理，提高畜禽的生產(chǎn)質(zhì)量，減少死亡率。

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