包志鵬

摘 要：目的：建立高效液相色譜法，并對(duì)氨酚曲馬多口腔崩解片中的已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)進(jìn)行精準(zhǔn)測(cè)定。方法：采用BDS-C18柱來(lái)進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)測(cè)定，以醋酸-醋酸鈉緩沖液-甲醇為流動(dòng)相A，以甲醇為流動(dòng)相B，嚴(yán)格遵照實(shí)驗(yàn)程序梯度來(lái)進(jìn)行洗脫，實(shí)驗(yàn)檢測(cè)波長(zhǎng)為271nm，流速為1.0mL/min。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)研究表明，各種雜質(zhì)都呈現(xiàn)較好的分離狀態(tài)，氨基酚和順式鹽酸曲馬多的最低檢測(cè)率滿足實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，平均回收率普遍在99.5%以上。結(jié)論：采用HPLC法來(lái)對(duì)氨酚曲馬多口腔崩解片中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，具有良好的應(yīng)用效果，并且具有一定的便捷性和準(zhǔn)確性，值得加以推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：氨酚曲馬多口腔崩解片；對(duì)乙酰氨基酚；對(duì)氨基酚；高效液相色譜法；有關(guān)物質(zhì)

對(duì)乙酰氨基酚屬于苯胺類(lèi)解熱鎮(zhèn)痛藥物，其半衰期大多在1-4小時(shí)之間。鹽酸曲馬多屬于合成阿片類(lèi)的中樞性鎮(zhèn)痛藥，減小較快，實(shí)際鎮(zhèn)痛時(shí)間能夠持續(xù)5小時(shí)左右。國(guó)外市售的氨酚曲馬多片即是由對(duì)乙酰氨基酚和鹽酸曲馬多的相互配合所制成的，在中度和重度急性疼痛中得到比較廣泛的應(yīng)用，尤其是術(shù)后疼痛和晚期癌性疼痛的之來(lái)哦，具有良好的鎮(zhèn)痛效果。臨床實(shí)驗(yàn)研究顯示，此種復(fù)方制劑的鎮(zhèn)痛效果較強(qiáng)，與同等劑量的單獨(dú)組分相比，見(jiàn)效快且維持時(shí)間長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)研究表明，HPLC測(cè)定方式具有一定的精準(zhǔn)性和高效性，能夠?qū)Π狈忧R多口腔崩解片中的已知雜質(zhì)對(duì)氨基酚、順式鹽酸勿罵多和其他類(lèi)型的未知雜質(zhì)進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，從而在保證檢測(cè)效果的基礎(chǔ)上，提高了有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的簡(jiǎn)便性和準(zhǔn)確性。

1 儀器與試藥

在本次實(shí)驗(yàn)研究中，主要選用標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的高效液相色譜儀來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，確保甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。試藥方面，確保對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品和鹽酸曲馬多對(duì)照品的質(zhì)量滿足實(shí)驗(yàn)的實(shí)際藥品要求，對(duì)氨基酚對(duì)照品的含量應(yīng)當(dāng)在95%以上，順式鹽酸曲馬多對(duì)照品選自中國(guó)藥品生物制品檢定所，氨酚曲馬多口腔崩解片是研究人員自制而成的。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備溶液

供試品溶液的制備過(guò)程中，取適量樣品進(jìn)行研磨，至細(xì)粉末狀態(tài)后進(jìn)行精密稱取，置于50mL的容量瓶中，加入流動(dòng)相A，在超聲環(huán)境下對(duì)其進(jìn)行溶解處理，稀釋至刻度后進(jìn)行搖勻和過(guò)濾，去適量濾液作為供試品溶液。

對(duì)照品溶液的制備過(guò)程中，精密稱取適量氨基酚對(duì)照品后，加入流動(dòng)相A制成標(biāo)準(zhǔn)含量的溶液，作為對(duì)照品溶液1；另外精密稱取順式鹽酸曲馬多對(duì)照品適量后，同樣加入流動(dòng)相A制成標(biāo)準(zhǔn)含量的對(duì)照品溶液2。在此基礎(chǔ)上，精密稱取供試品溶液、對(duì)照品溶液1各1mL，對(duì)照品溶液2取3mL，將三者之于統(tǒng)一100mL容量瓶中，加入流動(dòng)相A進(jìn)行稀釋，作為對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件及測(cè)定方法

在本次實(shí)驗(yàn)研究中，采用采用BDS-C18色譜柱來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并以以醋酸-醋酸鈉緩沖液-甲醇為流動(dòng)相A，以甲醇為流動(dòng)相B，嚴(yán)格遵照實(shí)驗(yàn)程序梯度來(lái)進(jìn)行洗脫。測(cè)定方法上，取適量對(duì)照溶液注入到液相色譜儀中，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況來(lái)對(duì)其靈敏度進(jìn)行調(diào)節(jié)，確保對(duì)乙酰氨基酚的峰高滿足實(shí)驗(yàn)滿量程的80%，在此基礎(chǔ)上取適量供試品溶液注入到液相色譜儀中，對(duì)色譜圖內(nèi)鹽酸曲馬多的保留時(shí)間進(jìn)行精準(zhǔn)的記錄。相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究人員應(yīng)當(dāng)注意的是，供試品溶液的色譜圖中若有對(duì)氨基酚和順式鹽酸曲馬多保留時(shí)間愛(ài)你相一致的色譜峰，應(yīng)當(dāng)對(duì)其面積進(jìn)行合理化控制，應(yīng)當(dāng)小于對(duì)照品溶液中相應(yīng)的峰面積，并保證其他雜質(zhì)峰面積的和在對(duì)照溶液主峰面積之和。

表1 梯度洗脫程序表

2.3 專屬性實(shí)驗(yàn)

2.3.1 各雜質(zhì)的分離。精密量取對(duì)照溶液及對(duì)照品與供試品混合溶液各適量，按上述色譜條件分別進(jìn)樣，結(jié)果見(jiàn)圖1。各己知物質(zhì)與相鄰峰均基線分離，理論板數(shù)均不低于2000。輔料對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2.3.2 破壞性試驗(yàn)。精密稱取樣品研細(xì)粉末適量（約相當(dāng)于鹽酸曲馬多37.Smg），置50mL量瓶中，共稱5份，分別經(jīng)過(guò)高溫、光照、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、強(qiáng)氧化等條件破壞后，照供試品溶液制備方法處理，按色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果見(jiàn)圖2。各破壞條件下的降解產(chǎn)物與主成分峰均有良好的分離度。

3 討論與結(jié)論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選取。實(shí)驗(yàn)研究顯示，檢測(cè)波長(zhǎng)的選取，應(yīng)當(dāng)分別取適量已知物質(zhì)對(duì)招聘適量，加入流動(dòng)相A進(jìn)行溶解后，在標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)其進(jìn)行掃描，對(duì)乙酰氨基酚、鹽酸曲馬多以及對(duì)氨基酚等的最大吸收波長(zhǎng)詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)圖3。通過(guò)觀察和分析可知，樣品中鹽酸曲馬多的量較少，并且其最大吸收波長(zhǎng)與已知雜質(zhì)對(duì)氨基酚和順式鹽酸曲馬多比較接近，在此種情況下，為了更好的提高鹽酸曲馬多以及其有關(guān)雜質(zhì)的實(shí)際檢測(cè)靈敏度，應(yīng)當(dāng)以271nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，以保證實(shí)驗(yàn)研究的精準(zhǔn)性和可靠性。

3.2 色譜柱的選擇從文獻(xiàn)來(lái)看，對(duì)乙酸氨基酚和鹽酸曲馬多的色譜分析都采用C18柱。但經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，對(duì)乙酸氨基酚和鹽酸曲馬多在不同品牌C18柱中的保留行為有很大的差異。曾采用Zorbax C18和HypersilODS柱進(jìn)行分析，前者對(duì)乙酰氨基酚和鹽酸曲馬多都有拖尾現(xiàn)象，理論塔板數(shù)也不夠理想，后者對(duì)乙酸氨基酚峰形有了很大改善，鹽酸曲馬多拖尾卻更嚴(yán)重?？赡苁欠治鑫锱cC18柱硅膠擔(dān)體表面的殘余硅經(jīng)基發(fā)生了相互作用，使樣品峰形極差，拖尾嚴(yán)重，這樣會(huì)導(dǎo)致一些小峰埋沒(méi)于前一拖尾峰的尾巴中，對(duì)雜質(zhì)檢查非常不利。因此嘗試使用BDS-C18柱，BDS硅膠擔(dān)體鍵合前經(jīng)過(guò)專門(mén)的堿鈍化處理，將殘余硅輕基降至極限，可以大大降低硅輕基與分析物之間的相互作用，改善色譜峰形。

3.3 流動(dòng)相的選擇

曾參照BP 2002收錄的鹽酸曲馬多有關(guān)物質(zhì)檢查方法配制流動(dòng)相：但經(jīng)測(cè)定，該流動(dòng)相pH值小于2，對(duì)一般色譜柱損傷較大。后參照中國(guó)藥典2005版收錄的鹽酸曲馬多片有關(guān)物質(zhì)檢查191流動(dòng)相：醋酸一醋酸鈉緩沖液（pH4.5）一甲醇（65：35）。但該色譜條件下，對(duì)乙酰氨基酚與相鄰雜質(zhì)峰的分離度不佳，因此嘗試將流動(dòng)相中甲醇比例逐漸降低。當(dāng)緩沖液與甲醇比例達(dá)80：20時(shí)，對(duì)乙酸氨基酚與相鄰雜質(zhì)的分離度符合要求，但鹽酸曲馬多保留時(shí)間太長(zhǎng)（約45min），峰對(duì)稱性較差，檢測(cè)靈敏度降低。為了使對(duì)乙酸氨基酚和鹽酸曲馬多都得到理想的保留時(shí)間和分離度，使用梯度洗脫作為流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果令人滿意?！?/p>

參考文獻(xiàn)

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