易火春，朱建輝，王思瑜，謝　芳，劉亞黎

(廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.胸外科，福建廈門 361004)

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·臨床研究·

AQT90 FLEX分析儀檢測全血肌鈣蛋白I的方法學(xué)評價

易火春1，朱建輝1，王思瑜1，謝芳1，劉亞黎2

(廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.胸外科，福建廈門 361004)

摘要:目的對AQT90 FLEX分析儀檢測全血標(biāo)本肌鈣蛋白I(TnI)進(jìn)行方法學(xué)評價。方法通過測定TnI的精密度、準(zhǔn)確度、分析測量范圍、攜帶污染率、功能靈敏度和參考區(qū)間來評價其性能。結(jié)果中、高值質(zhì)控品總不精密度分別為5.27%、4.49%，均小于CLIA′88規(guī)定的允許誤差范圍的1/2(15%)；國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會臨檢中心5個質(zhì)評物檢測結(jié)果，有4個在CLIA′88規(guī)定的允許誤差范圍的1/2(15%)內(nèi)，結(jié)果為可接受；在0.011～16.6 μg/L范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)方程為Y=0.996X-0.524；攜帶污染率小于10%；功能靈敏度為0.011 μg/L，在參考區(qū)間(TnI<0.023 μg/L)范圍內(nèi)；試劑說明書建議參考區(qū)間(TnI<0.023 μg/L)驗(yàn)證通過。結(jié)論該系統(tǒng)檢測全血標(biāo)本TnI精密度高，正確度好，并具有良好的線性，參考區(qū)間驗(yàn)證合格，分析靈敏度及攜帶污染率能夠達(dá)到實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量要求，能滿足臨床需求。

關(guān)鍵詞:心肌梗死；肌鈣蛋白I；方法學(xué)

急性心肌梗死(AMI)是冠狀動脈急性、持續(xù)性缺血缺氧所引起的心肌壞死，起病急，病死率高。如何從胸痛患者中快速識別出AMI患者，從而及時進(jìn)行治療，是降低病死率和改善預(yù)后的關(guān)鍵。研究表明心肌肌鈣蛋白I(TnI)對AMI診斷的特異度可達(dá)90%以上，敏感度為85%以上，可作為心肌梗死突發(fā)時的快速輔助診斷指標(biāo)，被越來越多地應(yīng)用[1]。目前,臨床上檢測TnI大都采用血漿標(biāo)本，離心等前處理過程需要花10多分鐘，影響了TnI的報告時間。本科室最近引進(jìn)Radiometer AQT90 FLEX分析儀,能夠檢測全血標(biāo)本TnI，減少了離心過程所需要的時間，縮短了報告時間?，F(xiàn)就該系統(tǒng)檢測全血TnI 的方法學(xué)進(jìn)行評價,報道如下。

1材料與方法

1.1標(biāo)本本院門、急診及住院患者經(jīng)乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝的靜脈血標(biāo)本。

1.2儀器和試劑儀器采用丹麥Radiometer AQT90 FLEX 免疫分析儀，試劑為配套TnI測試卡(批號10397)。

1.3方法

1.3.1精密度試驗(yàn)根據(jù)EP-5A文件[2],選擇低、中兩個濃度的質(zhì)控品，每天上、下午分兩批進(jìn)行試驗(yàn)，每批做雙份檢測，連續(xù)檢測20 d,共40對,80個數(shù)據(jù)。根據(jù)所得到的數(shù)據(jù)計(jì)算出批內(nèi)不精密度的標(biāo)準(zhǔn)差(s批內(nèi))、批間變異估計(jì)值(A)、批間不精密度的標(biāo)準(zhǔn)差(s批間)、天間變異估計(jì)值(B)、天間不精密度的標(biāo)準(zhǔn)差(s天間),最后按照方差和的方式將批內(nèi)、批間和天間標(biāo)準(zhǔn)差結(jié)合起來求出總不精密度。

1.3.2準(zhǔn)確度驗(yàn)證根據(jù)EP15-A文件[3]，選擇國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(簡稱衛(wèi)計(jì)委)臨檢中心2015年發(fā)放的心肌標(biāo)志物第1次室間質(zhì)評物作為參考物質(zhì)。每個質(zhì)評物分別測定2次，取平均值，5個質(zhì)評物結(jié)果，若有4個或4個以上在允許范圍內(nèi)，結(jié)果為可接受。

1.3.3分析測量范圍(AMR)評價根據(jù)EP-6A文件[4]，選擇TnI 濃度靠近廠家提供線性范圍上限的患者全血標(biāo)本作為高值濃度(H)，TnI 濃度低的患者全血標(biāo)本作為低值濃度(L)，按4H+0L、3H+1L、2H+2L、1H+3L、0H+4L的關(guān)系各自配制，形成系列檢測標(biāo)本，用AQT90 對系列濃度標(biāo)本進(jìn)行TnI檢測，每個濃度測定2 次。對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行可靠性分析后,利用SPSS13.0軟件進(jìn)行多項(xiàng)式回歸分析。

1.3.4攜帶污染率的評價取高濃度TnI全血標(biāo)本連續(xù)測定3 次，測定值分別為H1、H2、H3；再取低濃度TnI全血標(biāo)本連續(xù)測定3次，測定值分別為L1、L2、L3，按公式計(jì)算攜帶污染率：攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%

1.3.6參考區(qū)間驗(yàn)證參考美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)C28-A2文件《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室參考區(qū)間的定義和確認(rèn)》[6]，從本院體檢人群中選取 20 份臨床診斷基本正常，心電圖、B超以及血液常規(guī)、生化、免疫檢驗(yàn)結(jié)果均正常的健康人標(biāo)本(男女各 10 例，年齡20～70 歲)，進(jìn)行TnI檢測，對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，參照參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，檢測結(jié)果落在參考區(qū)間內(nèi)的數(shù)量達(dá)到(或超過)90%，表示可以接受，驗(yàn)證通過，否則進(jìn)行參考區(qū)間確認(rèn)試驗(yàn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2000軟件和SPSS 13．0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，進(jìn)行多項(xiàng)式回歸分析。

2結(jié)果

2.1精密度驗(yàn)證結(jié)果中、高濃度質(zhì)控品的TnI總CV均小于CLIA′88規(guī)定的允許誤差范圍的1/2(15%)，說明試驗(yàn)估計(jì)的總不精密度屬于可接受范圍。見表1。

表1　　TnI精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.2準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果衛(wèi)計(jì)委臨檢中心5個質(zhì)評物檢測結(jié)果，有4個在CLIA′88規(guī)定的允許誤差范圍的1/2(15%)內(nèi)，結(jié)果為可接受。見表2。

表2　　TnI準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果

2.3分析測量范圍評價結(jié)果根據(jù)配制關(guān)系可以計(jì)算出5例標(biāo)本的TnI水平，作為這些標(biāo)本的預(yù)期值，以預(yù)期值為橫坐標(biāo)，實(shí)測平均值為縱坐標(biāo)，行直線回歸分析，觀察其線性范圍，結(jié)果顯示：該法在0.011～16.6 μg/L線性良好(r=0.996)，相關(guān)方程為Y=0.996X-0.524(圖1)。

圖1　　TnI線性范圍散點(diǎn)圖(μg/L)

2.4攜帶污染率H1、H2、H3分別為23.250、23.020、23.400 μg/L，L1、L2、L3分別為 0.034、0.032、0.038 μg/L，攜帶污染率為 0.017%。

2.5功能靈敏度使用 2.3 中的線性范圍中下限標(biāo)本連續(xù)檢測20次，濃度為0.011 μg/L的CV值為16.50%，小于20%，在可接受范圍內(nèi)，因此，TnI 的功能靈敏度為0.011 μg/L。

2.6參考區(qū)間驗(yàn)證20例健康人標(biāo)本TnI結(jié)果均低于0.01 μg/L，全部在參考區(qū)間(TnI<0.023 μg/L)范圍內(nèi)，參考區(qū)間驗(yàn)證通過。

3討論

AQT90使用時間分辨熒光免疫分析法檢測全血或血漿中的TnI濃度，其原理是將生物素?；膯慰寺】筎nI抗體預(yù)先固化到檢測杯里的鏈霉素蛋白表面。在捕獲抗體表面分別加上分隔層和示蹤抗體。分析過程中，標(biāo)本和分析液自動進(jìn)入含特應(yīng)試劑的試杯中。孵育期間，示蹤和捕獲抗體把TnI夾在中間，形成三明治樣結(jié)構(gòu)。孵育結(jié)束后，分析液沖洗試杯并烘干。干燥試杯表面的銪標(biāo)記示蹤抗體信號利用時間分辨熒光法(TRF)測定，被分析物質(zhì)的濃度通過銪標(biāo)記信號直接測定。測得的信號根據(jù)儀器中的定標(biāo)曲線轉(zhuǎn)化成濃度[6]。

與實(shí)驗(yàn)室的大型檢驗(yàn)設(shè)備相比，AQT90免疫分析儀具有易用、檢測速度快、全程無污染等特點(diǎn)。檢測過程不涉及管道系統(tǒng)和加樣針，不需標(biāo)本準(zhǔn)備，從標(biāo)本采集到出報告只需要20 min，尤其適用于急診胸痛心TnI的快速檢測[7-10]。

本文詳細(xì)評價了AQT90免疫分析儀檢測TnI的精密度、準(zhǔn)確度、測量范圍、攜帶污染率、功能靈敏度。根據(jù)NCCLS EP5-A文件對批內(nèi)、批間、天間及總不精密度的評估,在EP-5A文件中指出測定的總CV最為重要,它代表了整個分析系統(tǒng)的可重復(fù)程度。試驗(yàn)結(jié)果顯示:TnI在0.038 μg/L和1.070 ng/L時,總不精密度分別為5.27%和4.49%,均小于CLIA′88規(guī)定的允許誤差范圍的1/2(15%)，說明該方法的總不精密度屬于可接受范圍。根據(jù)EP15-A文件，選擇衛(wèi)計(jì)委臨檢中心2015年發(fā)放的心肌標(biāo)志物第1次室間質(zhì)評物作為參考物質(zhì)。每個質(zhì)評物分別測定2次，取平均值。5個質(zhì)評物結(jié)果，有4個在CLIA′88規(guī)定的允許誤差范圍的1/2(15%)內(nèi)，結(jié)果為可接受。根據(jù)NCCLS EP6-A文件對TnI的分析測量范圍進(jìn)行評價,結(jié)果顯示，該法在0.011～16.6 μg/L范圍內(nèi)線性良好，符合臨床TnI檢測的需要。在攜帶污染率檢測中，該系統(tǒng)攜帶污染率小于10%，認(rèn)為高濃度標(biāo)本對低濃度標(biāo)本攜帶污染程度低，在可接受范圍內(nèi)。本方法的功能靈敏度為0.011 μg/L，在參考區(qū)間(TnI<0.023 μg/L)范圍內(nèi)，在臨床檢測中對于低值結(jié)果的報告具有一定的參考價值。本試驗(yàn)通過對 20 例健康體檢者進(jìn)行參考區(qū)間的驗(yàn)證，結(jié)果顯示90%以上在參考區(qū)間范圍內(nèi)，滿足性能要求。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)室新引進(jìn)的Radiometer AQT90 FLEX 免疫分析儀精密度高，正確度好，并具有良好的線性，參考區(qū)間驗(yàn)證合格，分析靈敏度及攜帶污染率能夠達(dá)到實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量要求，能滿足臨床需求。

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(收稿日期：2016-01-06)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.06.030

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)06-0788-03