金 鑫郝金萍馬應錦吳宏武（海南省公安廳刑警總隊 海南 海口 5700；公安部物證鑒定中心 北京 0008；儋州市公安局刑警支隊 海南 儋州 57700；東方市公安局 海南 東方 57600）

一種ABO血型快速檢驗試紙條在法醫(yī)學檢驗中的應用評估

金 鑫1郝金萍2馬應錦3吳宏武4
（1海南省公安廳刑警總隊 海南 海口 570203；2公安部物證鑒定中心 北京 100038；3儋州市公安局刑警支隊 海南 儋州 571700；4東方市公安局 海南 東方 572600）

研究評估ABO血型快速檢驗技術在法醫(yī)學領域中的應用可行性，溶解生物斑跡中所含的ABO血型物質(zhì)，利用ABO血型膠體金試劑條，觀察其準確度、靈敏度、種屬特異性，得出ABO血型快速檢驗技術檢驗快速、操作簡便、結果準確的結果，該方法可用于法醫(yī)工作中ABO血型檢驗。

法庭科學 ABO血型 膠體金試劑條

伴隨DNA技術在法醫(yī)學中應用的快速推廣和普及，ABO血型檢驗技術因檢驗操作步驟繁瑣、對操作的技術要求較高[1]而漸漸退出實踐應用。但ABO血型檢驗技術同DNA技術在法醫(yī)學中的發(fā)展應用并不矛盾，反之可以起到補充、簡繁DNA檢驗技術工作的作用。本實驗對研究ABO血型快速檢驗技術的靈敏度、種屬特異性和準確性進行研判，評估ABO血型快速檢驗技術在法醫(yī)學領域中的應用可行性。

1 樣本制備

1.1 血痕

127 份，在醫(yī)院用棉簽采集靜脈血，血型已知，室溫晾干，放置1～2年。

1.2 唾液斑

73份，血型已知的志愿者漱口后用唾液采集器收集唾液，涂于濾紙，室溫放置1～2年。

1.3 動物血痕

分別取3份豬血、10份牛血、13份羊血，涂于濾紙上，晾干后常溫保存。

2 材料和方法

2.1 材料

ABO試劑條（Testlagret AB公司，瑞典），ABO血型物質(zhì)溶解液（自制，含1%吐溫80及4%吐溫20）。

2.2 方法

（1）取0.3cm2血斑或唾液斑，剪碎后置于eppendorf試管中。在試管中加130μL血型物質(zhì)溶解液，溶解5min，震蕩混勻。

（2）檢驗前將試劑條從袋子中取出，如有冷藏保存的，必須平衡到室溫，平置于臺面上。

（3）吸取100μL待檢樣本溶解液，加入到試劑條的加樣孔中，觀察結果，結果判讀參考[2]（陳舊斑跡10min后觀察結果，最遲不要超過15min；新鮮斑跡10min內(nèi)即可觀察結果）。

3 實驗結果

3.1 準確度結果

200 份志愿者的血斑和唾液斑經(jīng)檢驗，有188份與志愿者事先報告的ABO血型分型一致，其余12份不一致的分型結果如下表所示，其中5份樣本（82號、84號、91號、93號、109號）經(jīng)試劑條多次檢驗分型明確，且與志愿者事先報告的分型不一致，懷疑有可能是志愿者報告錯誤；有4份樣本（118號、121號、130號、133號）經(jīng)試劑條多次檢驗分型不明確，且與志愿者事先報告的分型不一致，經(jīng)DNA基因型檢測后證實其基因型與志愿者事先報告的分型一致；有3份樣本（136號、145號、152號）試劑條測定的分型與基因型一致，與志愿者報告的分型不一致。簡而言之，200份樣本中有4份樣本采用研發(fā)的試劑條出現(xiàn)分型錯誤，8份樣本為志愿者提供信息錯誤，準確率為98%。

表ABO血型分型結果不一致的樣本

3.2 種屬特異性實驗結果

26份非人樣本均未檢出A、B血型物質(zhì)，如下圖所示。

圖 牛、羊、豬ABO血型檢測結果

3.3 靈敏度驗證實驗結果

新鮮采集的已知A型及B型人血，倍比稀釋后取5μL經(jīng)ABO血型快速檢測系統(tǒng)檢測，A型血檢測靈敏度為1∶64，B型血檢測靈敏度為1∶32。

4 討論

4.1 準確度

臨床上，為使ABO血型檢測結果準確，應進行正反兩個試驗來分型：一是用標準A、B、O型血清鑒定紅細胞上的抗原，為正向定型；另一種是用標準A、B、O型紅細胞鑒定血清中的抗體，為反向定型。當正反試驗的結果與常規(guī)的ABO分型原則不符的時候，提示可能是弱亞型或變異型。本實驗使用的為血型正定型檢測試劑條。有4份樣本出現(xiàn)分型錯誤，其原因可能是：①樣本濃度過低：導致大量膠體金液通過檢測線，增加了在檢測線上假陽性信號的可能性，以及在檢測期后，它也會提高膠體金標粒子回流的可能性；②當花費很多時間來觀測檢測結果（通常是超過15min）時，膜就會變干，多余的金標粒子很有可能開始從吸附區(qū)向干燥后膜回流；③樣品中含有可能與金標粒子或捕捉抗體發(fā)生非特異性結合的物質(zhì)，例如細菌碎片也可能與捕捉抗體和金標粒子發(fā)生交叉反應。

4.2 種屬特異性

動物的血型很復雜，例如狗的血型有5種，貓的血型有6種，羊的血型有9種，馬的血型為9～10種，豬的血型有15種，牛的血型達40種以上，植物也有血型[3]。通過對26份豬、牛、羊血液的研究發(fā)現(xiàn)，所研發(fā)的ABO血型快速檢測系統(tǒng)具有種屬特異性。

4.3 靈敏度

A、B血型抗原的檢測靈敏度分別為1∶64、1∶32，完全可以應用到實際案件檢驗中。因為紅細胞的數(shù)量男性400～550萬/μL，女性350～500萬/μL[4]，在1∶32至1∶64倍比稀釋之間表明本實驗的靈敏度在紅細胞數(shù)量10～40萬/μL，而現(xiàn)場血痕量通常在1mL以上，高靈敏度表明檢驗能力更強。

綜上，ABO血型快速檢驗技術的準確性、種屬特異性、靈敏度符合法醫(yī)檢驗工作的需要。此項技術為法醫(yī)實踐檢案工作提供有效快捷的輔助技術手段，可提高基層檢驗部門的工作效率；避免了檢材和耗材的浪費，質(zhì)量安全有保證，有助于基層辦案單位經(jīng)濟效益和社會效益的雙提升。

[1]侯一平.法醫(yī)物證學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:316.

[2]郝金萍,金鑫,周毅,等.膠體金技術檢測ABO血型的應用[J].刑事技術,2014(2):17-18.

[3]王艷芝,李志仁,等.動植物的血型[J].河北農(nóng)業(yè)科技,1989(3):19-20.

[4]王庭槐.生理學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2013:328.

D918.3

A

2095-7939(2016)01-0069-02

2015-09-17

金鑫（1981-），女，吉林榆樹人，海南省公安廳刑警總隊技術處主檢法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)遺傳學研究。

孟凡騫）