張 婷（中國刑事警察學(xué)院 遼寧 沈陽 110035）

調(diào)味料中罌粟殼的主要生物堿LC-MS檢驗(yàn)

張 婷
（中國刑事警察學(xué)院 遼寧 沈陽 110035）

罌粟作為一類麻醉類物質(zhì)被非法添加在調(diào)味料及食品中會危害人體的健康。建立罌粟殼中5種生物堿成分的液相色譜-質(zhì)譜檢驗(yàn)（LC-MS）方法，且用于調(diào)味料的檢測。結(jié)果表明該方法具有前處理操作簡便，測定靈敏度高等特點(diǎn)，對食品安全的檢驗(yàn)和監(jiān)督有一定作用。

罌粟 調(diào)味料 LC-MS

食品中使用罌粟殼(籽)將被追究為違法行為。調(diào)味料中的罌粟殼(籽)常被研磨成細(xì)粉末狀而喪失外觀檢驗(yàn)的條件，因此，其化學(xué)物質(zhì)檢測是證明此類違法行為的重要證據(jù)。有關(guān)罌粟殼中幾種生物堿的化學(xué)檢測方法包括有薄層色譜法、化學(xué)顯色法、電化學(xué)法、免疫分析法、以及氣相色譜法(GC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC/MS)、高效液相色譜(HPLC)和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)等儀器分析方法[1-4]。調(diào)味料中的罌粟殼物質(zhì)檢測容易受到調(diào)味料中其他組分的干擾，因此，本文選用液相色譜-串聯(lián)離子阱質(zhì)譜（LC-IT-MS/MS）建立了罌粟殼中生物堿的快速分析方法，同時在網(wǎng)絡(luò)及市場上隨機(jī)購買了8批次的調(diào)料進(jìn)行方法的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。通過本文的研究以期對調(diào)味料中罌粟類物質(zhì)的檢測提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 設(shè)備及材料

液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜聯(lián)用儀；漩渦混合器；高速冷凍離心機(jī)。

食用調(diào)味料：麻辣火鍋底料，4批次（超市購買）；調(diào)味粉料，4批次（網(wǎng)絡(luò)購買）。

嗎啡、罌粟堿、那可汀、可待因、蒂巴因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均購置于公安部物證鑒定中心，純度大于97%。

罌粟殼：現(xiàn)場繳獲的罌粟殼，每枚重約3.5克。

1.2 檢材前處理

取樣品1g加入2mL水將檢材稀釋，加0.2%鹽酸溶液3滴，加入環(huán)己烷0.5mL，渦旋混合，高速離心后，棄去有機(jī)相，取水相清液于另一個試管，加入pH8.9的緩沖溶液0.5mL，并用乙醚分2次進(jìn)行提取，合并提取液，經(jīng)N2氣流下濃縮揮干，加0.5mL流動相溶液復(fù)溶，將溶液通過0.22μm濾膜過濾后，取10μL進(jìn)LC-MS分析。

1.3 儀器分析條件

液相色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)由Finnigan的液相色譜儀和Thermo Fisher的LXQ離子阱質(zhì)譜儀組成。色譜條件：色譜柱Thermo Gold ODS C18（150mm×2.1mm，5μm）；色譜柱溫：35℃；流動相組成及配比：甲醇0.2%，冰醋酸5mmol/L，醋酸銨水溶液（pH 4.0）（60∶40，v/v），流速為0.2mL/min。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子化源，正離子方式檢測（ESI+）二級質(zhì)譜全離子掃描，掃描范圍：50～450Da；毛細(xì)管溫度：350℃，霧化氣、加熱輔助氣和吹掃氣流量分別為30.00、8.00和2.00arb；源電壓、毛細(xì)管電壓和套管透鏡補(bǔ)償電壓分別為5.00kv、20.0v 和10.0v。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

取生物堿的標(biāo)準(zhǔn)溶液混合后進(jìn)樣分析，經(jīng)質(zhì)譜全掃描后確定5種生物堿基峰強(qiáng)度最高的母離子，在選定各自母離子后，進(jìn)行二級質(zhì)譜全掃描的檢測，其中嗎啡的母離子為m/z286，可待因的母離子為m/z 300，蒂巴因的母離子為m/z312，罌粟堿的母離子為m/z340，那可汀的母離子為m/z414，LC-MS分析的SRM色譜及質(zhì)譜圖如圖1，圖2所示。

圖1 5種生物堿的SRM色譜圖

圖2 5種生物堿的SRM質(zhì)譜圖

3 結(jié)果及討論

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

罌粟殼中含有20多種生物堿，其中罌粟堿、那可汀、嗎啡、可待因、蒂巴因5種具有代表性的生物堿含量較高。5種生物堿的含量不相同，在儀器中響應(yīng)能力和抗干擾能力不同，結(jié)合多種因素，最終建立了4種生物堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍，以生物堿的濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，以色譜的吸收峰面積為縱坐標(biāo)，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線見表1。

表1 4種生物堿LC-MS檢測的線性范圍及檢出

3.2 檢材提取

調(diào)味品和麻辣火鍋湯料中油脂和色素含量較高，樣品的前處理方法以及雜質(zhì)去除的程度對測定結(jié)果有影響。

近些年，食品中罌粟生物堿的提取方法中應(yīng)用固相萃取法較多，所用的固相萃取材料如ChemElut、PCX、MCX、PSA和無水硫酸鎂等，檢材經(jīng)過固相萃取材料后，收集洗脫液再濃縮或者直接過膜后分析測試。上述操作過程存在步驟較繁瑣，固相萃取材料價格高，各種生物堿極性差異富集效果不理想等問題。

采用簡便的液液提取方法是利用了生物堿具有在堿性條件下可溶于有機(jī)溶劑，在酸性條件下溶于水的反應(yīng)原理。據(jù)文獻(xiàn)報道[5-10]，液液萃取法中有機(jī)萃取溶劑多選用混合溶劑，如三氯甲烷-甲醇（3∶1）溶液、三氯甲烷-異丙醇（4∶1）溶液、三氯甲烷-乙醇（9∶1）溶液等，但文獻(xiàn)方法中有機(jī)溶劑用量較大，提取和旋轉(zhuǎn)揮發(fā)等操作次數(shù)多，較為繁瑣。

因此，本文采用了冷凍去油及酸堿反提的液液提取法。在冷凍先去除部分油脂后，再在溶液中加酸性溶液和有機(jī)溶劑，離心后再次去除油脂，在剩余的水相體系中調(diào)節(jié)pH值為8.9，此時可以兼顧提取屬于兩性化合物的嗎啡和堿性的生物堿成分。

3.3 調(diào)味料及火鍋底料的檢測

采用本文所建立的方法對從網(wǎng)絡(luò)上及超市中購買的調(diào)味料進(jìn)行LC-MS檢測，結(jié)果如表2所示。

表2 8種調(diào)味料中生物堿的LC-MS檢測結(jié)果

上述調(diào)味料的檢測中，生物堿測定的含量差別較大，其中嗎啡含量最高的3號和4號樣品，除嗎啡物質(zhì)，3號樣品中還檢測有可待因成分，4號樣品中檢測出罌粟堿成分。

此次檢測中火鍋底料的結(jié)果好于調(diào)味料，原因一是火鍋底料均為超市購得，而調(diào)味料均為有針對性的網(wǎng)絡(luò)購得，安全保障差些。另外的原因是火鍋底料的油脂含量遠(yuǎn)高于調(diào)味料，前處理凈化方法的選擇中，如果選用強(qiáng)凈化方法，生物堿易在凈化中損失，如果選用普通凈化方法，雜質(zhì)易干擾生物堿的測定。

據(jù)文獻(xiàn)[11,13,14]報道，分析火鍋底料中生物堿的檢驗(yàn)均采用極性的色譜HILIC柱，并在討論中提及C18色譜柱對生物堿保留較差，但通過本文及其他文獻(xiàn)的[12,15]的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，C18柱對生物堿成分的檢驗(yàn)結(jié)果良好、重現(xiàn)性好。

3.4 調(diào)味料中生物堿檢測的其他問題

長期以來，在歐美發(fā)達(dá)國家，罌粟籽（粉）及其制品主要作為制作面包、漢堡、餡料、沙律醬等的添加物[16，17]。

據(jù)報道[18，19]匈牙利成年人們每日食用源自食物中的嗎啡含量為78.6μg/kg左右，兒童是116.9μg/kg。在食用者的尿液中均會檢出生物堿成分，咖喱飯中食用的嗎啡含量為200.4μg～1002μg；可待因?yàn)?5.9μg～479.5μg，這些食用者的尿液中會檢測到的嗎啡濃度范圍在0.12μg/mL～1.27μg/mL，可待因的濃度范圍為0.04μg/mL～0.73μg/mL從此可見，調(diào)味料中少量罌粟殼（籽）的食用是否會產(chǎn)生成癮性，其生物檢材中代謝物的含量與毒理作用的研究還有很多空缺。

隨著檢測儀器靈敏性的顯著提高，是否可以對食品中罌粟類物質(zhì)的各種成分規(guī)定一定的檢測閾值將既保證食品的安全，又保證法律的嚴(yán)肅性。

綜上添加在食品中的罌粟所含有生物堿的檢驗(yàn)方法存在標(biāo)準(zhǔn)方法制定滯后、自建檢驗(yàn)方法存在科學(xué)性未驗(yàn)證，以及檢驗(yàn)鑒定結(jié)論表述針對性和指導(dǎo)性差等多方面問題，這些問題制約了對食品安全違法行為的有效監(jiān)督和管理。希望有關(guān)部門能盡快從標(biāo)準(zhǔn)制定、快速檢驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)室確證檢驗(yàn)、安全性閾值設(shè)定、實(shí)驗(yàn)室間能力驗(yàn)證等幾個方面深入研究和討論，盡可能保障食品安全。

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D918.93

A

2095-7939(2016)01-0074-03

2015-09-29

張婷（1975-），女，遼寧沈陽人，中國刑事警察學(xué)院法化學(xué)系講師，博士，主要從事刑事毒物毒品分析研究。

孟凡騫）