范才良，雒　茂，李　慧，晏升勇，李陽春

（1.重慶市榮昌區(qū)畜牧獸醫(yī)局，重慶榮昌　402460；2.西南大學榮昌校區(qū)動物醫(yī)學系，重慶榮昌　402460；3.重慶市榮昌區(qū)清江鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶榮昌　402466；4.重慶澳龍生物制品有限公司，重慶榮昌　402460）

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羊棘球蚴病疫苗免疫山羊后的抗體水平檢測

范才良1，雒茂2，李慧2，晏升勇3，李陽春4

（1.重慶市榮昌區(qū)畜牧獸醫(yī)局，重慶榮昌402460；2.西南大學榮昌校區(qū)動物醫(yī)學系，重慶榮昌402460；3.重慶市榮昌區(qū)清江鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶榮昌402466；4.重慶澳龍生物制品有限公司，重慶榮昌402460）

摘要：棘球蚴病又叫包蟲病，是人和動物感染細粒棘球絳蟲及多房棘球絳蟲幼蟲所致的疾病。本試驗采用不同的免疫程序分兩次免疫羊包蟲病疫苗，并于免疫后4、8、12、20、28、42周分別采集血清用間接ELISA法檢測抗體水平。結(jié)果顯示：首次免疫后4周抗體水平達到最高并維持一定時間，第28周抗體水平處于臨界值；兩次免疫的羊在42周時的抗體陽性率仍達到88.9%。

關(guān)鍵詞：羊細粒棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗；羊包蟲；人畜共患??；免疫效果

棘球蚴病又叫包蟲病，是人和動物感染細粒棘球絳蟲幼蟲所致的疾病。本試驗用羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗對試驗羊進行了不同免疫程序的免疫，然后用間接ELISA法檢測不同時期的血清抗體水平，現(xiàn)將結(jié)果報告如下：

1　材料與方法

1.1主要藥品羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗（重慶澳龍生物制品有限公司生產(chǎn)，疫苗批號：20140201）；羊棘球蚴（包蟲）ELISA抗體檢測試劑盒（重慶澳龍生物制品有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：120150402）。

1.2主要儀器PhysioCare多導移液器，Concept移液器，LRH-250生化培養(yǎng)箱，Mu1tiskan MK3酶標儀，XK96-A/B快速混勻器。

1.3試驗動物2月齡以上臨床檢查健康，包蟲病抗體檢測呈陰性的羊30只。

1.4試驗分組從榮昌縣銅鼓、吳家鎮(zhèn)三個養(yǎng)殖戶家中各選取試驗羊10只，共30只。試驗組1隨機取三個養(yǎng)殖戶各5只羊，共15只；試驗組2為余下的15只羊。

1.5免疫程序及操作方法試驗1、2組每只羊均注射1mL（1頭份）羊包蟲疫苗，并作好記錄。間隔4周后對試驗組2進行二次免疫注射，試驗組1不再免疫。操作方法：每只試驗羊頸部皮下注射1頭份。

1.6被檢血清的采集免疫后4周（二免前）、8、12、20周分別對試驗羊進行頸部靜脈采血，分離血清、統(tǒng)一編號后送實驗室冷凍保存?zhèn)錂z。血清采集情況詳見表1、表2。

1.7血清免疫抗體的測定用間接ELISA法檢測抗體水平，操作方法參見ELISA試劑盒說明書。結(jié)果判定標準如下：

1.7.1試驗結(jié)果同時滿足下列條件，方為有效：標準陽性對照孔平均OD450nm≥0.6±0.02；標準陰性對照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。

表1　一免后被檢血清采集表　份

表2　二免后被檢血清采集表　份

1.7.2疫苗免疫后抗體水平檢測結(jié)果判定：樣品OD450nm≤0.3，判為細粒棘球蚴（包蟲）抗體陰性；樣品OD450nm>0.3，判為細粒棘球蚴（包蟲）抗體陽性。

2　試驗結(jié)果

試驗組1和2的抗體檢測結(jié)果、抗體陽性率和抗體消長情況詳見表3～表6和圖1。

表3　試驗組1（一免）抗體檢測結(jié)果

表4　試驗組2（二免）抗體檢測結(jié)果

表5　試驗組1抗體檢測陽性率

3　結(jié)果分析

3.1抗體水平分析由表3可知，進行一次免疫的羊在第4周時抗體水平達到最高值（0.558），此后抗體水平逐漸下降，第20周時為0.361，第28周（0.294）已低于臨界值0.3，抗體為陰性，截至第42周抗體水平降為0.254。由表4可知，進行二次免疫的羊在第8周時抗體水平達到最高值（1.452），第12周～20周時的抗體水平均在1.0以上，第28周時為0.890，截至第42周最后一次采血時其抗體水平已降為0.620。由圖1可知，用該包蟲疫苗進行二免后其抗體水平明顯高于一免的抗體水平。

表6　試驗組2抗體檢測陽性率

圖1　兩個試驗組抗體水平的消長情況

3.2抗體陽性率分析由表5可知，一次免疫的羊在第4周時抗體陽性率為88.9%，第8周時為77.8%，第12周時為66.7%，第20周時為55.6%，第28周時為44.4%，第42周時抗體降為0。由表6可知，二次免疫的羊在第4周時抗體陽性率為88.9%，第8周～28周時的抗體陽性率均為100%，第42周時抗體陽性率為88.9%。由此可見，二次免疫的保護效果比一次免疫的保護效果更好。

3.3包蟲病疫苗的作用原理包蟲病疫苗是使用DNA重組生物技術(shù)，把能表達棘球絳蟲Eg95蛋白的基因定向?qū)氪竽c桿菌，通過細菌發(fā)酵表達Eg95蛋白，經(jīng)破碎純化提取Eg95蛋白而制成的基因工程亞單位疫苗[2]。該疫苗具有產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、不含感染性物質(zhì)、生物安全性高、免疫效果好等特點。生產(chǎn)上于該疫苗中加入了免疫佐劑Qui1 A（皂素的純化物），對疫苗有免疫增強作用，從根本上解決了免疫效果差的問題[3-4]。

4　包蟲病的危害

4.1對人的危害包蟲病是人獸共患疾病，對人的危害很大。一是寄生于肝、肺、骨骼、腦部，產(chǎn)生機械性壓迫損害引起腹疼、呼吸困難，易發(fā)骨折和癲癇等癥狀；二是在蟲體生長發(fā)育過程中不斷釋放抗原及毒性物質(zhì)，使機體產(chǎn)生一系列中毒癥狀；三是當包囊破裂或囊液外漏入周圍組織和體腔時，大量原頭蚴種植于組織器官引起繼發(fā)性包蟲病；四是該病一旦在體內(nèi)發(fā)生可以終身存在，因為包蟲形成囊膜后藥物難以進入囊內(nèi)根治，常常需要手術(shù)摘除，如果摘除不完全容易復發(fā)。該病最終以慢性消耗為主，使患者喪失勞動力，長期經(jīng)受病痛折磨。

4.2包蟲病對動物的危害消耗動物體內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)，造成機械損傷，飼料利用率下降，導致動物生長緩慢，抵抗力下降，最終影響生產(chǎn)性能和畜產(chǎn)品質(zhì)量。

5　結(jié)論

該包蟲病疫苗對羊的棘球蚴感染具有很好的免疫保護效果，且經(jīng)兩次免疫注射后產(chǎn)生的抗體水平更高，抗體持續(xù)時間更長。因此，生產(chǎn)實踐中應(yīng)在首次免疫后適時進行二次免疫。

參考文獻：

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[4]Frederick R.Improving vaccine performance with adjuvants[J].C1in Infect Dis，2000，30（S3）：266-227.

Detection of the Antibody Levels after Immuned Hydatid Disease Vaccine in Goats

FAN Cai1iang1，LUO Mao2，YAN Shengyong3，et a1.
（1.Anima1 Husbandry and Veterinary Bureau of Rongchang District，Chongqing Rongchang 402460；2.Department of Veterinary Medicine，Rongchang Campus of Southwest University，Chongqing Rongchang 402460；3.Anima1 Husbandry and Veterinary Station of Qingjiang Town in Rongchang District，Chongqing Rongchang 402466；4.Chongqing Au1eon Bio1ogica1s Co.Ltd.，Chongqing Rongchang 402460，China）

Abstract：Hydatidosis was caused by the 1arvae of E.granulosus and E.multilocularis on the human and anima1s.In this experiment，two different immunization program were conducted（once immunization，twice immunization）after 4、8、12、20、28、42 th weeks，serum antibody 1eve1s were detected by ELISA method.The resu1ts showed that once immunization’s antibody reached to the highest after 4th weeks and maintained a certain time，the antibody 1eve1's critica1 va1ue appeared at 28th weeks.Twice immunization's antibody positive rate was 88.9% at 42th weeks.

Key words：Recombinant hydatid subunit vaccine；Zoonosis；Immune effect

作者簡介：范才良（1967—），男，四川隆昌人，高級獸醫(yī)師，從事預防獸醫(yī)、臨床獸醫(yī)、中草藥研究。

收稿日期：2015-09-25

中圖分類號：S852.52

文獻標識碼：B

文章編號：1001-8964（2016）02-0035-03