張年田

【摘 要】 目的 建立HPLC法測(cè)定丹芪益腎膠囊中淫羊藿的含量。方法 樣品采用超聲處理的方法提取。色譜柱為CenturySIL C18-BDS（250*4.6mm），流動(dòng)相乙腈——水（30：70），檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm，流速為1.0ml/min。結(jié)果 淫羊藿苷平均回收率為104.2%，RSD為1.4%（n= 6）。結(jié)論 含量測(cè)定的方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，穩(wěn)定性好，靈敏度高，能夠有效地控制丹芪益腎膠囊的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 丹芪益腎；淫羊藿苷；高效液相色譜法

丹芪益腎膠囊為山西省中醫(yī)院制劑品種。功能主治：益腎健脾，活血化瘀。用于糖尿病、腎病，屬脾腎兩虛者。處方為太子參、黃芪、白術(shù)、薏苡仁、芡實(shí)、地黃、金櫻子、淫羊藿、丹參、葛根、當(dāng)歸、大黃等十二味藥。規(guī)格為每粒0.5g?？刂瀑|(zhì)量的原有標(biāo)準(zhǔn)為薄層色譜測(cè)定大黃、黃芪、葛根三個(gè)鑒別項(xiàng)目。為了提高醫(yī)院制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，山西省食品藥品監(jiān)督管理局規(guī)定，所有醫(yī)院制劑品種，必須有含量測(cè)定項(xiàng)目控制質(zhì)量[1]。為此，在原有測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上新增加了淫羊藿的含量測(cè)定。并對(duì)新增加的項(xiàng)目進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。

1 資料與方法

1.1 儀器 Waterse2695高效液相色譜儀；檢測(cè)器：Waterse 2998，柱溫箱：4.2—680。AU200D型電子天平；KQ—300E型超聲波清洗機(jī)（功率250w，頻率33kHz）；容量瓶、漏斗等普通玻璃器皿。

1.2試劑 乙腈、甲醇為色譜純，水為純凈水自制，乙醇為分析純，淫羊藿苷（供含量測(cè)定使用，中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所，批號(hào)為110737- -200414）。丹芪益腎膠囊為山西省中醫(yī)院醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)為 20100615，20110813，20110814。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件與適用性試驗(yàn)

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水（30∶70）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500[2]。

1.3.2 對(duì)照品溶液的制備

取淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

1.3.3 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，稱定重量，超聲處理1個(gè)小時(shí)，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取1ml置10ml的容量瓶，加乙醇至刻度，取續(xù)濾液，即得。

1.3.4 線性關(guān)系學(xué)考察

分別精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品，0.25mg，0.5mg，1mg，2mg，5mg，分別置10ml容量瓶中加甲醇溶解并稀釋至刻度搖勻即得。制成每1ml含0.025mg、0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.5mg的溶液，各取20ul注入色譜儀中測(cè)定，按色譜條件測(cè)得峰面積積分值，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=18685649.34X-10481727.20 r=0.9993淫羊藿苷在0.025-0.5mg/ml呈良好的線性關(guān)系。

1.3.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液（0.1mg/ml）10ul重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定淫羊藿苷峰面積積峰值分別為1160509，1198036，1164502，1166923，1174455，1162996。平均值為1171236.9，RSD為1.2%.結(jié)果表明，進(jìn)樣與儀器檢測(cè)精密度良好。

1.3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取供試樣品溶液分別在0、2、4、8、12、24小時(shí)進(jìn)樣10ul，測(cè)得樣品峰面積積峰值為9673570，9678452，96013666，95165892，95597162，93690956。平均值為95664653，RSD為1.2%。結(jié)果表明，24小時(shí)內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定。

1.3.7 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取3個(gè)不同批號(hào)丹芪益腎膠囊，按供試品溶液制備方法制備6份，分別進(jìn)樣10ul測(cè)定峰面積積峰值，并計(jì)算含量（mg/g）34.5504，35.6062，34.4649，34.231 2，34.8349，35.1666。平均值為34.8090mg/g，RSD為1.5%。結(jié)果表明，儀器與試驗(yàn)方法可行。

1.3.8 回收率

采用加樣回收法。取已知含量的樣品，批號(hào)為（2110814）6份，分別加入一定量的淫羊藿苷對(duì)照品，照含量測(cè)定項(xiàng)下方法制備測(cè)試溶液，按上述色譜條件測(cè)定淫羊藿苷的含量，計(jì)算回收率。

2 結(jié)果

淫羊藿苷的回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果，平均回收率為104.2%，按照擬定的含量測(cè)定方法測(cè)定3批樣品淫羊藿苷的含量平均值為34.7mg。根據(jù)測(cè)定范圍的限量規(guī)定[3]，34.7×80%=27.7mg。本品以淫羊藿計(jì)算淫羊藿苷不得少于28.0mg。

3 討論

3.1 測(cè)定成分的選擇

該品種中最大處方量為：太子參、黃芪、芡實(shí)、丹參。黃芪為補(bǔ)氣諸藥之最，逐五臟之淤血，因此，原有標(biāo)準(zhǔn)上已有黃芪的薄層色譜方法控制質(zhì)量。太子參、芡實(shí)、丹參，由于它們的化學(xué)成分較多，專屬性不強(qiáng)。淫羊藿的醇浸出液及從200%淫羊藿水浸膏中提取的非氨基酸部分，能顯著增加心臟的冠狀動(dòng)脈流量，并可促進(jìn)血小板解聚，紅血球積壓明顯減少。因此，最終選擇了淫羊藿測(cè)定丹芪益腎膠囊中有效成分淫羊藿苷。

3.2 流量的考察

參照相關(guān)文獻(xiàn)[1]《中國(guó)藥典》選擇色譜條件適應(yīng)性系統(tǒng)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水（30∶70）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，使淫羊藿保留時(shí)間合適，分離效果較好。

3.3 提取方法的考察

丹芪益腎膠囊中淫羊藿為水煎煮液減壓壓縮至浸膏狀，低溫干燥，粉碎成細(xì)粉。由于淫羊藿醇浸出液及從200%淫羊藿水浸膏中提取出淫羊藿苷，因此，選擇了加稀乙醇超聲處理，簡(jiǎn)易可行。

3.4 方法探討

在建立方法時(shí)，排除黃芪甲苷、丹參酮、葛根素、大黃素等其它成分干擾，因它們都是經(jīng)過(guò)水煎液濃縮，只有淫羊藿苷直接醇浸從水浸中能完全提出，而且在270nm波長(zhǎng)處無(wú)法測(cè)定其它幾味藥。所以，經(jīng)過(guò)考察，該方法可用于丹參益腎膠囊的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010： 306.

[2] 劉源，石繼偉.高效液相色譜法測(cè)定安神補(bǔ)腦片中淫羊藿苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2014，23（1）：14-15.

[3] 邢婧，任紅，汪軒等.HPLC法同時(shí)測(cè)定淫羊藿-川芎藥對(duì)8種化學(xué)成分的含量[J].藥物分析雜志，2015，35（6）：960-965.