肖雪 于天泉

哈藥集團(tuán)制藥六廠 150000

超高效液相色譜法測定羅紅霉素分散片的溶出度

肖雪 于天泉

哈藥集團(tuán)制藥六廠 150000

目的：利用超高效液相色譜法測定羅紅霉素分散片的溶出度。方法：使用AgilentXDB-C18的色譜柱，流動(dòng)相是磷酸二氫銨溶液(用三乙胺調(diào)pH值至7.5)-乙腈(50∶50)，檢測的波長是205nm，流動(dòng)相的流速是0.65mL/min，而且柱溫是35℃。結(jié)果：這種方法有著較好的專屬性，濃度還要在25.2ˉ225.2μg/mL的這一范圍內(nèi)，濃度和峰面積有著良好的線性關(guān)系，R2=0.999而且羅紅霉素的平均回收率為99.5%，RSD達(dá)到了0.93%。結(jié)論：這種方法是極為便捷的，也較為簡單，重復(fù)性和準(zhǔn)確性都較好，可以用于羅紅霉素分散片溶出度的測定。

超高效液相色譜法；羅紅霉素分散片；溶出度

羅紅霉素是一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，羅紅霉素分散片的溶出度在檢查方法上主要是利用高效液相色譜法，但是還沒有使用超高效液相色譜法來進(jìn)行羅紅霉素分散片溶出度的研究，超高效液相色譜法主要是用于藥品行業(yè)進(jìn)行分析，因此要根據(jù)超高效液相色譜法的特點(diǎn)來進(jìn)行羅紅霉素分散片溶出度的測定，這樣就可以快速的實(shí)現(xiàn)藥品的檢測。本文就是對超高效液相色譜法測定羅紅霉素分散片溶出度進(jìn)行分析，為相關(guān)的研究提供借鑒。

一、儀器與試藥

超高效液相色譜儀使用的是Agilent1200超高效液相色譜儀，藥物溶出儀是天津大學(xué)的智能藥物溶出儀。

羅紅霉素分散片的樣品主要是由四川科倫藥業(yè)提供的，羅紅霉素分析所使用的試劑是乙腈，羅紅霉素的對照品是EP標(biāo)準(zhǔn)的，批號是00BV47，色譜用水是自制的純化水，而其他的試劑是分析純，所有的儀器都要達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，滿足基本的試驗(yàn)需要，否則就會影響到試驗(yàn)的效果。

二、方法與結(jié)果

（一）色譜條件

使用的色譜柱是AgilentXDB-C18色譜柱，標(biāo)準(zhǔn)是50mm×4.6mm，1.8μm，流速是0.65mL/min，流動(dòng)相是0.067mol/L磷酸二氫銨溶液-乙腈，要用三乙胺將 pH值調(diào)到 7.5，柱溫為 35℃，檢測的波長是205nm，進(jìn)樣量為10μL。

（二）溶出度的測定方法

在進(jìn)行溶出度測定的時(shí)候，需要按照2015年版的《中國藥典》進(jìn)行溶出度的測定。溶出介質(zhì)是醋酸鹽緩沖液，pH值為5.5（取醋酸鈉溶液0.04moL/L,利用冰醋酸進(jìn)行調(diào)節(jié)，將醋酸鹽緩沖液的pH值調(diào)到5.5），需要緩沖液900mL為溶出介質(zhì)，依法操作，轉(zhuǎn)速為100r/min，在經(jīng)過了45min時(shí)，就要將溶液取出適量進(jìn)行過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，另取羅紅霉素的對照品適量，經(jīng)過了精密的稱定之后，加溶出介質(zhì)進(jìn)行溶解并且定量稀釋，稀釋成為約0.16mg/ml的溶液，這一溶液就是對照品溶液，在這樣的情況下，就可以按照相應(yīng)的色譜條件進(jìn)行上述兩種溶液的測定，進(jìn)樣量為10μl，將其注入到液相色譜儀中，并且要對色譜圖進(jìn)行記錄和分析，使用外標(biāo)法對峰面積進(jìn)行計(jì)算，這樣就可以得到每片的溶出度。

（三）方法學(xué)驗(yàn)證

1.輔料干擾試驗(yàn)

在進(jìn)行羅紅霉素分散片干擾試驗(yàn)的時(shí)候，要按照羅紅霉素分散片處方比例來稱取樣品，樣品是不含有主藥的空白輔料，進(jìn)行精密的稱定后，在里面加入醋酸鹽緩沖液適量，并且利用超聲震蕩的方式進(jìn)行稀釋，定容到相應(yīng)的濃度，還要進(jìn)行搖勻和濾過處理，續(xù)濾液要按照相應(yīng)的色譜條件進(jìn)行測定，在此條件下，空白輔料會在1min內(nèi)出峰，這樣的試驗(yàn)方式是不會影響樣品測定的。

2.專屬性試驗(yàn)

取羅紅霉素分散片適量，仔細(xì)研磨成細(xì)粉，精密稱取適量，相當(dāng)于羅紅霉素50mg，放入50ml的容量瓶中，之后就可以分別的按照以下的條件進(jìn)行破壞：（1）堿破壞：要加入5ml的氫氧化鈉溶液，氫氧化鈉溶液必須要達(dá)到 0.1mol/L的濃度，將其放下室溫下，放置30min，之后利用0.1mol/L的鹽酸溶液5ml進(jìn)行中和，之后向里面加入流動(dòng)相進(jìn)行溶解，就可以將其稀釋為0.16mg/mL的相應(yīng)溶液。（2）酸破壞：加入0.1mol/L的鹽酸溶液5mL，于室溫放置30min，用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液 5mL中和至中性，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成約含0.16mg/mL的溶液。（3）氧化破壞：加入30%的過氧化氫溶液5mL，于室溫放置30min，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成約含0.16mg/mL的溶液。（4）高溫破壞：在105℃條件下放置2h，取出冷卻至室溫，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成約含0.16mg/mL的溶液。（5）光照破壞：在照度為(4500±500)lx的條件下放置 10d，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成約含0.16mg/mL的溶液。

按上述色譜條件分別進(jìn)樣測定，結(jié)果表明，羅紅霉素分散片在各破壞條件下均明顯產(chǎn)生降解產(chǎn)物，各降解峰與羅紅霉素能有效分離，且主峰均為單峰(峰純度參數(shù)均在999以上)，該法專屬性較強(qiáng)。

3.線性關(guān)系與范圍

取羅紅霉素對照品適量，精密稱定，加醋酸鹽緩沖液(pH5.5)溶解并稀釋制成濃度分別為25.2、50.4、81.5、100.7、162.9和225.2μ g/mL的溶液，搖勻，進(jìn)行色譜條件測定，記錄色譜圖。以羅紅霉素濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)(x)，以主峰峰面積為縱坐標(biāo)(y)，做線性回歸計(jì)算，得出回歸方程：y=2941.2x+3036.8；R2=0.9999。結(jié)果表明，羅紅霉素在25.2～225.2μg/mL(相當(dāng)于測定濃度的15%—140%)范圍內(nèi)，其濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

4.對照品重復(fù)性與供試液穩(wěn)定性

取羅紅霉素對照品溶液，按色譜條件進(jìn)樣10μL，重復(fù)測定6次的峰面積RSD為0.48%。取供試品溶液，分別于0，1，2，4，8，12和24h進(jìn)樣考察，結(jié)果表明，24h內(nèi)主峰面積沒有明顯變化，供試品溶液穩(wěn)定。

5.回收率實(shí)驗(yàn)

按處方比例分別精密稱取相當(dāng)于樣品標(biāo)示量的50%，80%，100%和120%的主藥及相應(yīng)量的空白輔料，加醋酸鹽緩沖液(pH5.5)適量，振搖使羅紅霉素溶解，并加醋酸鹽緩沖液(pH5.5)稀釋至規(guī)定濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液按以上色譜條件測定，平均回收率為99.5%，RSD為0.93%(n=12)。

6.溶出曲線的繪制

取本品，在5，10，15，20，45和60min時(shí)，分別取溶液5mL濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，并及時(shí)在溶出杯中補(bǔ)充溶出介質(zhì)5mL。另取羅紅霉素對照品適量，精密稱定，用上述溶出介質(zhì)溶解并稀釋制成0.16mg/mL的溶液，作為對照品溶液。將上述2種溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算每片在不同時(shí)間的溶出度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1和圖1。

表1 6個(gè)時(shí)間點(diǎn)溶出度考察試驗(yàn)結(jié)果

圖1 羅紅霉素分散片溶出曲線

三、討論

測定方法比較

在本品溶出度研究過程中發(fā)現(xiàn)，以《中國藥典》的溶出度測定色譜條件進(jìn)行測定，羅紅霉素主峰的保留時(shí)間約15min，而UPLC方法的主峰保留時(shí)間約為 5min，即將原來溶出度測定的工作量縮減為1/3左右。在當(dāng)前國家高度重視藥品質(zhì)量的大環(huán)境下，溶出曲線對比將成為固體制劑質(zhì)量評價(jià)的一個(gè)重要指標(biāo)，將會有越來越多的企業(yè)開展仿制藥一致性評價(jià)工作，采用UPLC法測定本品的溶出度，將極大地縮短了分析時(shí)間，有利于高效、快速、準(zhǔn)確的開展該項(xiàng)工作，必將大大減少成本，促進(jìn)節(jié)能環(huán)保，應(yīng)用前景廣闊。

[1]洪利婭,孫曉明,王建.高效液相色譜法測定羅紅霉素片與羅紅霉素分散片溶出度[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2011,30(2):251-253

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[S].2015年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015:651-652.

S567.23+9

A

1672-5018（2016）12-152-01