趙曉云，邵　凱

山東大學(xué)　齊魯醫(yī)院(青島)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心，山東青島 266000

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·論著·

微小RNA- 21在胰島素抵抗和糖尿病伴發(fā)非酒精性脂肪肝發(fā)病中的作用

趙曉云，邵凱

山東大學(xué)齊魯醫(yī)院(青島)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心，山東青島 266000

摘要：目的應(yīng)用高脂喂養(yǎng)分別誘導(dǎo)胰島素抵抗(IR)和糖尿病(DM)伴發(fā)非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠模型，探討肝臟微小RNA- 21(miR- 21)表達(dá)改變?cè)贜AFLD發(fā)病中的作用。方法實(shí)驗(yàn)分3組：對(duì)照組、IR組和DM組；記錄小鼠體質(zhì)量，腹腔糖耐量實(shí)驗(yàn)確定糖代謝異常，行肝臟病理切片檢查，檢測(cè)空腹血糖、血清胰島素、血脂、腫瘤壞死因子α含量的變化，檢測(cè)肝臟miR- 21表達(dá)和肝臟過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體亞型(PPAR-γ、PPAR-α)和脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白(aP2)基因和蛋白表達(dá)改變。結(jié)果IR組體質(zhì)量、血清胰島素水平和穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)較對(duì)照組明顯上升(P<0.01，P<0.05)，DM組空腹血糖濃度上升，而血清胰島素水平明顯下降(P<0.05)，其他指標(biāo)較對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；IR組血清胰島素水平較對(duì)照組增加而DM組明顯降低 (P<0.01，P<0.05)；IR組和DM組葡萄糖曲線下面積較對(duì)照組顯著增加(P<0.01)。IR組和DM組血清腫瘤壞死因子-α水平呈明顯上升趨勢(shì)(P<0.05，P<0.01)。IR組和DM組伴隨著NAFLD加重，肝臟組織miR- 21表達(dá)水平進(jìn)一步下調(diào)(P<0.05)，與IR組PPAR-α、aP2和PPAR-γ基因表達(dá)上調(diào)呈負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.696、-0.664和-0.766，P<0.05)，與DM組PPAR-α和PPAR-γ基因表達(dá)上調(diào)也呈負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.676和-0.550，P<0.05)；蛋白表達(dá)改變僅IR組PPAR-γ和aP2較對(duì)照組明顯上調(diào)(P<0.05，P<0.01)。結(jié)論IR和DM伴發(fā)NAFLD時(shí)肝組織均出現(xiàn)miR- 21表達(dá)降低，可能通過(guò)調(diào)節(jié)PPAR-α和PPAR-γ的基因表達(dá)參與NAFLD發(fā)病。

關(guān)鍵詞：非酒精性脂肪肝；微小RNA- 21；胰島素抵抗；糖尿??；過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體亞型

ActaAcadMedSin，2016,38(2)：144-149

非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是一種臨床病理綜合征，表現(xiàn)為肝臟內(nèi)過(guò)多的脂肪堆積。NAFLD發(fā)展從脂肪變性到脂肪肝炎和肝硬化，已證實(shí)代謝綜合征相關(guān)如肥胖、2型糖尿病(diabetic mellitus，DM)和血脂異常為其主要危險(xiǎn)因素。NAFLD不僅提高肝臟相關(guān)疾病的發(fā)病率或死亡率，也能增加冠狀動(dòng)脈心臟病及其他心血管并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)[1- 2]。二次打擊假說(shuō)可以部分解釋非酒精性肝損傷、脂肪變性和脂肪肝炎的發(fā)病過(guò)程，但NAFLD的發(fā)病機(jī)制尚未闡明。研究顯示NAFLD發(fā)病與多元代謝紊亂有關(guān)，伴有高三酰甘油血癥是其重要特點(diǎn)[3- 4]。過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferater-activated receptor，PPAR)亞型及其靶基因參與了脂質(zhì)分解代謝的多個(gè)方面[5]。小分子核糖核酸對(duì)代謝途徑、細(xì)胞應(yīng)激、免疫防御和炎癥反應(yīng)發(fā)揮重要的調(diào)控作用。有研究顯示NAFLD發(fā)病伴有肝臟微小RNA(microRNA，miR)- 21的表達(dá)改變[6- 9]，但近期臨床檢測(cè)NAFLD患者血清miR- 21水平與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與之前研究結(jié)論[10- 11]相反。本研究應(yīng)用高脂飼料分別誘導(dǎo)胰島素抵抗(insulin resistance，IR)和2型DM小鼠模型，通過(guò)檢測(cè)肝臟miR- 21的表達(dá)變化，探討其在IR和DM伴發(fā)NAFLD發(fā)病中的作用。

材料和方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組8周齡雄性C57/BL6小鼠36只(購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司)，維持室溫25℃、相對(duì)濕度60%，自由進(jìn)水進(jìn)食適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、IR組和DM組，每組12只。各組動(dòng)物以不同飼料喂養(yǎng)8周：對(duì)照組直接飼以低脂飼料(10%脂肪、35%蔗糖)；IR組用高脂飼料喂養(yǎng)(60%脂肪、7%蔗糖)；DM組高脂喂養(yǎng)4周后按50 mg/kg體質(zhì)量一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(購(gòu)于美國(guó)Sigma公司，使用前溶于pH 4.5的檸檬酸緩沖液)，繼續(xù)高脂喂養(yǎng)4周。所有飼料均購(gòu)于美國(guó)Research Diets，Inc.(RDI) 公司，產(chǎn)品貨號(hào)分別為D12450B和D12492。觀察小鼠進(jìn)食情況和日常狀態(tài)，每周測(cè)量體質(zhì)量，每2周測(cè)空腹血糖。

IR和DM組小鼠模型確定各組實(shí)驗(yàn)小鼠喂養(yǎng)8周，禁食12 h后尾尖采血，用快速血糖測(cè)定儀(美國(guó)，強(qiáng)生)測(cè)定空腹血糖含量；進(jìn)行腹腔葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)確定IR模型成功，給小鼠2.5 g/kg劑量腹腔注射50%葡萄糖，分別測(cè)定30、60和90 min血糖值；計(jì)算葡萄糖曲線下面積。血清空腹胰島素(serum free insulin，F(xiàn)INS)應(yīng)用羅氏電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定，試劑采用羅氏配套試劑。按公式計(jì)算穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(homeostasis model assessment of insulin resistance，HOMA-IR)=(空腹血糖× FINS)/22.5；以空腹血糖高于7.0 mmol/L納入DM組。

生化指標(biāo)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)第8周后，小鼠禁食12 h后斷頸處死，腹主動(dòng)脈采血，離心(轉(zhuǎn)子半徑9.5 cm，4℃，3 000 r/min，10 min)。取血清在羅氏701全自動(dòng)生化分析儀上檢測(cè)FINS、三酰甘油和總膽固醇，使用羅氏配套試劑。ELISA法測(cè)定血清中腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)含量，試劑盒購(gòu)于美國(guó)R&D公司。

肝臟組織病理檢查將取出的新鮮肝組織用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察肝臟組織形態(tài)并拍照。

miRNA和PPAR-γ等基因表達(dá)應(yīng)用miRNA提取試劑盒(美國(guó)ABI 公司)提取肝臟組織miRNA，應(yīng)用miR- 21特異反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增引物(均在美國(guó)ABI 公司合成)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；miR- 21反轉(zhuǎn)錄序列5’-CTAAT-GAAGCACTGGUCACUAAUUAUAAGUUTGTCTTCGGTG-TGGAGGTAGAAAATTATA- 3’，定量PCR引物序列5’-TCAGTGCATGACAGA- 3’。使用Trizol一步法提取各組小鼠肝臟組織總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，PPAR-γ、脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白2(adipocyte fatty acid binding protein 2，aP2)、PPAR-γ和GADPH的qPCR引物由上海生工生物工程技術(shù)公司合成(表1)。于ABI 公司Prism 7000熒光定量PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)條件：95℃ 10 min，1個(gè)循環(huán)；95℃ 15 s，60℃ 30 s，72℃ 30 s，40個(gè)循環(huán)，于72℃ 延伸10 min。擴(kuò)增結(jié)束后，以限制點(diǎn)的循環(huán)數(shù)計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。

PPAR-α等蛋白表達(dá)用Western blot檢測(cè)肝臟組織PPAR-α、aP2和PPAR-γ蛋白表達(dá)，取肝臟組織30 μg樣本蛋白行12%SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，水浴式恒壓80V電轉(zhuǎn)膜，一抗為兔抗鼠PPAR-α、aP2和PPAR-γ多克隆抗體(1∶1 000)，二抗為辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的羊抗兔IgG(1∶1 000)，壓片后進(jìn)行放射自顯影，顯影定影底片，掃描保存。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。正態(tài)分布變量多組間比較應(yīng)用方差分析，組間差異采用t檢驗(yàn)，不同指標(biāo)間采用直線相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

小鼠體質(zhì)量及糖耐量變化4周時(shí)IR組和DM組小鼠較對(duì)照組體質(zhì)量明顯增加(P<0.05)；IR組5～8周 體質(zhì)量繼續(xù)增加(P<0.01)，DM組雖然繼續(xù)進(jìn)食高脂飼料，但體質(zhì)量與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(圖1A)。4周時(shí)IR組和DM組空腹血糖與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；8周時(shí)DM組空腹血糖明顯高于IR組和對(duì)照組(P<0.05)(圖1B)；IR組FINS和HOMA-IR較對(duì)照組明顯升高(P<0.05)，而DM組FINS明顯降低(P<0.05)(表2)；IR組和DM組葡萄糖曲線下面積 (34.73+3.11和52.43+3.87)均較對(duì)照組(22.19+3.76)明顯上升(P<0.01)。

小鼠生化指標(biāo)及肝臟質(zhì)量IR組小鼠三酰甘油和總膽固醇較對(duì)照組明顯上升(P<0.05)，DM組較對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；IR組和DM組血清TNF-α較對(duì)照組明顯增高(P<0.05，P<0.01)。IR組和DM組肝臟組織占體質(zhì)量比例較對(duì)照組明顯降低(P<0.05，P<0.01)(表2)。

肝臟病理改變光鏡檢查對(duì)照組小鼠肝臟，匯管區(qū)中央靜脈區(qū)界限清楚，未見(jiàn)肝細(xì)胞脂變(圖2A)；IR組小鼠可見(jiàn)不同程度彌漫性肝細(xì)胞脂肪變性，胞漿內(nèi)充滿大小不等脂肪空泡，以中央靜脈周圍明顯，肝細(xì)胞腫脹，無(wú)炎癥、壞死(圖2B)；DM組小鼠均出現(xiàn)較嚴(yán)重的彌漫性肝細(xì)胞脂肪變性，以中央靜脈周圍最為明顯，極度腫脹呈圓形，體積較正常明顯增加，胞漿內(nèi)充滿大量脂肪空泡，其中出現(xiàn)3例小葉內(nèi)炎癥和2例匯管區(qū)炎癥，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)以單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞為主，并有少量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)(圖2C)。

表 1　PPAR-α、aP2 和 PPAR-γ定量PCR引物

PPAR：過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體；aP2：脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白2

PPAR：peroxisome proliferater-activated receptor；aP2：adipocyte fatty acid binding protein 2

CN：對(duì)照組；IR：胰島素抵抗組；DM：糖尿病組；與對(duì)照組比較，aP<0.05，bP<0.01

CN：control group；IR：insulin resistance group；DM：diabetes mellitus group；aP<0.05，bP<0.01 compared with control group

圖 13組小鼠體質(zhì)量(A)和空腹血糖(B)的比較

Fig 1Comparison of body mass (A)and free blood glucose (B)of mice among three groups

表 2　3組小鼠生化指標(biāo)和肝臟占體質(zhì)量比例的比較(x-±s)

CN：對(duì)照組；IR：胰島素抵抗組；DM：糖尿病組；與對(duì)照組比較，aP<0.05，bP<0.01

CN：control group；IR：insulin resistance group；DM：diabetes mellitus group；aP<0.05，bP<0.01 compared with control group

A.對(duì)照組；B.胰島素抵抗組；C.糖尿病組

A. control group；B. insulin resistance group；C.diabetes mellitus group

圖 23組小鼠肝臟病理改變(×400)

Fig 2Changes of hepatic pathology among three groups(×400)

miR- 21和PPAR-α等基因和蛋白表達(dá)變化IR組和DM組小鼠肝臟組織miR- 21表達(dá)水平較對(duì)照組明顯下調(diào)(P<0.05)。IR組肝臟組織PPAR-α、aP2和PPAR-γ基因表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.01)，與miR- 21表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.696、-0.664和-0.766，P<0.05)；PPAR-γ和aP2蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.05，P<0.01)，而PPAR-α蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。DM組肝臟組織PPAR-α和PPAR-γ基因表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.01)，與miR- 21表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.676和-0.550，P<0.05)；而PPAR-α、aP2和PPAR-γ蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(圖3)。

miR-21：微小RNA；Mr：相對(duì)分子質(zhì)量；與對(duì)照組比較，aP<0.05，bP<0.01

miR-21：microRAN；Mr：relative molecular mass；aP<0.05，bP<0.01 compared with control group

A. 基因表達(dá)；B. 蛋白表達(dá)；C.蛋白電泳圖

A. genetic expression；B. protein expression；C. protein electrophoretogram

圖 3各組肝組織miR- 21和PPAR亞型基因和蛋白表達(dá)

Fig 3Expressions of miR- 21and PPAR subtype gene and protein in liver

討論

高脂喂養(yǎng)小鼠4周后體質(zhì)量均明顯增加，IR組第8周體質(zhì)量增加67.16%，遠(yuǎn)高于對(duì)照組的39.0%，DM組較對(duì)照組體質(zhì)量無(wú)增加；病理學(xué)觀察DM組肝細(xì)胞脂肪變性嚴(yán)重程度較IR組明顯增加；DM組和IR組肝臟組織占體質(zhì)量比例較對(duì)照組顯著降低；以上結(jié)果均提示在8周造模時(shí)間內(nèi)DM伴發(fā)NAFLD較IR嚴(yán)重。NAFLD的發(fā)病基礎(chǔ)是肝細(xì)胞內(nèi)三酰甘油聚集，有研究表明NAFLD患者總膽固醇和三酰甘油含量均明顯增加，高密度脂蛋白膽固醇降低，尤其是三酰甘油水平增加者達(dá)49.24%，遠(yuǎn)高于膽固醇含量升高者17.93%[3- 4]，提示NAFLD發(fā)病與血清中三酰甘油水平上升有直接關(guān)系。本研究IR組小鼠血清三酰甘油和總膽固醇均明顯上升，是高脂誘導(dǎo)NAFLD發(fā)病的必然結(jié)果；本研究觀察到DM較IR組伴發(fā)更嚴(yán)重的NAFLD，TNF-α水平明顯增加，肝臟病理中一半病例有肝組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，也符合肝臟脂肪變性伴發(fā)肝小葉炎癥反應(yīng)的特點(diǎn)。

有研究證實(shí)miR- 21表達(dá)改變與NAFLD相關(guān)。由Li等[6]研究顯示肥胖伴NAFLD小鼠肝臟miR- 21表達(dá)下調(diào)，而直接注射鏈脲佐菌素復(fù)制1型DM時(shí)盡管血糖顯著上升，不伴有NAFLD時(shí)，肝臟miR- 21表達(dá)無(wú)改變。Ahn等[10]觀察高脂喂養(yǎng)老鼠的肝臟和用硬脂酸干預(yù)的Hepa1- 6細(xì)胞中miR- 21的表達(dá)均減少，miR- 21 表達(dá)改變明顯阻止了硬脂酸誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累。有研究調(diào)查NAFLD體內(nèi)和體外模型的miR- 21表達(dá)變化，結(jié)果顯示在NAFLD患者的血清miR- 21水平減低；HepG2細(xì)胞培養(yǎng)基中加入軟脂酸和油酸，模仿游離脂肪酸毒性、脂肪變性疾病的發(fā)生時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境，數(shù)據(jù)顯示在NAFLD的體外模型miR- 21也減少，與其體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致[11]。Yamada等[12]檢測(cè)92例NAFLD患者血清微小RNA的表達(dá)顯示：miR- 21 水平較健康對(duì)照組升高，按照性別分析結(jié)果揭示：男性患者血清miR-21水平上升，而女性無(wú)差異；也有結(jié)果相反的報(bào)道，檢測(cè)34例NAFLD患者血清miR- 21水平無(wú)改變[13]。小分子核糖核酸是一類新發(fā)現(xiàn)的監(jiān)管RNA信使，可綁定核糖核酸3’端區(qū)域發(fā)揮沉默RNA作用。miR- 21參與NAFLD發(fā)病的具體機(jī)制尚不清楚。

PPAR-α和PPAR-γ及其靶基因參與NAFLD脂代謝紊亂[5，10]，NAFLD小鼠模型給予PPAR-α激動(dòng)劑可以減少肝臟脂肪變性[7]。研究顯示給HuH7細(xì)胞超表達(dá)和抑制miR- 21或miR- 27b 發(fā)現(xiàn)，PPAR-α蛋白質(zhì)含量增加，但不影響PPAR-α的mRNA水平。熒光素酶分析顯示miR- 21的靶點(diǎn)是PPAR-α的3’端地區(qū)。在人類肝臟，PPAR-α蛋白質(zhì)與mRNA表達(dá)不直接相關(guān)，但與miR- 21水平呈負(fù)相關(guān)性，表明miR- 21對(duì)PPAR-α產(chǎn)生重大影響，其中不能排除miR- 27b的貢獻(xiàn)[14]。本研究顯示IR伴發(fā)NAFLD的肝組織miR- 21表達(dá)明顯下調(diào)，與PPAR-α、aP2和PPAR-γ基因表達(dá)上調(diào)呈負(fù)相關(guān)；DM伴發(fā)更嚴(yán)重NAFLD時(shí)肝組織中miR- 21表達(dá)進(jìn)一步下調(diào)，與PPAR-α和PPAR-γ基因表達(dá)上調(diào)呈負(fù)相關(guān)；證實(shí)在NAFLD的肝組織中miR- 21對(duì)PPAR-γ基因表達(dá)也有調(diào)節(jié)作用，豐富了NAFLD的發(fā)病機(jī)制。另有報(bào)道m(xù)iRNA依賴性的影響PPAR-α下游基因的表達(dá)，miR- 21通過(guò)控制其下游目標(biāo)脂肪酸結(jié)合蛋白7參與肝臟脂肪變性[10]。也有報(bào)道m(xù)iR- 21監(jiān)管三酰甘油和膽固醇的代謝，可通過(guò)抑制三羥基三甲基輔酶A還原酶的表達(dá)實(shí)現(xiàn)[11]?？梢?jiàn)miR- 21通過(guò)調(diào)節(jié)脂代謝的多個(gè)環(huán)節(jié)，參與NAFLD的發(fā)病。

核轉(zhuǎn)錄因子κB是炎性細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的核轉(zhuǎn)錄因子，研究證實(shí)，核轉(zhuǎn)錄因子-κB上調(diào)miR- 21前體轉(zhuǎn)錄，在肝臟再生的早期階段miR- 21表達(dá)上調(diào)；miR- 21的靶目標(biāo)Peli1 可能提供一個(gè)負(fù)面反饋循環(huán)調(diào)節(jié)核轉(zhuǎn)錄因子-κB信號(hào)[15]。本研究顯示IR或DM伴發(fā)NAFLD時(shí)，miR- 21表達(dá)改變與TNF-α呈負(fù)相關(guān)，推測(cè)NAFLD發(fā)病時(shí)miR- 21表達(dá)與參與調(diào)節(jié)TNF-α的生成，有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。有研究嘗試給肥胖鼠應(yīng)用抗miR- 21治療，研究顯示安全有效，心臟功能不受影響，也無(wú)肝毒性；此外，miR- 21抑制脂肪細(xì)胞變小，血清三酰甘油水平顯著降低，可以有效減輕肥胖鼠體質(zhì)量[16]。

綜上，IR和DM小鼠誘導(dǎo)NAFLD均出現(xiàn)miR- 21表達(dá)降低，可能通過(guò)調(diào)節(jié)PPAR亞型表達(dá)參與NAFLD發(fā)病。miR- 21是一個(gè)有用的診斷和治療NAFLD的生物標(biāo)志物，未來(lái)可以進(jìn)行更大樣本的臨床研究加以確定。

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Roles of MicroRNA- 21 in the Pathogenesis of Insulin Resistance and Diabetic Mellitus-induced Non-alcoholic Fatty Liver Disease

ZHAO Xiao-yun，SHAO Kai

Laboratory Medicine Center of Qilu Hospital(Qingdao)，Shandong University，Qingdao，Shandong 266000，China

ABSTRACT：ObjectiveTo investigate the roles of microRNA- 21 (miR- 21) in the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) with high-fat diet-induced insulin resistance (IR) and diabetes mellitus (DM) mice model. MethodsEight-week-old C57BL/6 mice were allocated into control group，IR group，and DM group. Body mass was recorded. Intraperitoneal glucose tolerance test was performed to determine any abnormal glucose metabolism. The liver pathological changes were detected by biopsy. Changes in free blood glucose，free serum insulin，blood fat and tumor necrosis factor α level were measured. Differences in miR- 21 expression and peroxidase proliferator-activated receptor subtypes (PPAR-γ and PPAR-α) and adipocyte fatty acid binding protein (aP2) in the liver were detected both at the mRNA and protein levels. ResultsAfter one 8-week high-fat diet，the body mass，free serum insulin，and homeostasis model IR index significantly increased in the IR group (P<0.01，P<0.05，compared with control group)，while the free blood glucose increased and the free serum insulin decreased in DM group(P<0.05). Free serum insulin level were significantly increased in IR group (P<0.05). Serum tumor necrosis factor-α levels exhibited an upward trend in control group，IR group，and DM group (P<0.05，P<0.01). With exacerbation in NAFLD，liver miR- 21 expression level went further down in both IR and DM groups (P<0.05). The downregulated miR- 21 expression level showed negative correlation with upregulated PPAR-α,αP2，and PPAR-γ genetic expression (r=-0.696，r=-0.664，and r=-0.766，respectively；P<0.05) in IR group and with upregulated PPAR-α and PPAR-γ genetic expression in DM group (r=-0.676 and r=-0.550，respectively；P<0.05). In terms of the changes in protein expression level，only on the protein expressions of aP2 and PPAR-γ in IR group showed significant change (P<0.05，P<0.01，compared with control group). ConclusionsThe miR- 21 expression is downregulated in both IR and DM-induced NAFLD mice. It may be involved in the pathogenesis of NAFLD by regulating the expressions of PPAR subtypes.

Key words：non-alcoholic fatty liver disease；microRNA- 21；insulin resistance；diabetes mellitus；peroxisome proliferator-activated receptor subtypes

(收稿日期：2015- 05- 07)

Corresponding author：ZHAO Xiao-yunTel：0532- 66850879，E-mail：welcomedoctor@126.com

DOI：10.3881/j.issn.1000- 503X.2016.02.004

中圖分類號(hào):R587.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào)：1000- 503X(2016)02- 0144- 06

通信作者：趙曉云電話：0532- 66850879，電子郵件：welcomedoctor@126.com