許慶 何繼祥 肖植國

【摘要】目的：建立高效液相色譜法（HPLC）測定消化膠囊中橙皮苷的含量。方法：采用十八烷基鍵合硅膠色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；以乙腈-水（20∶80）為流動相，流速為1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：284nm。結(jié)果：橙皮苷含量在10.15～81.20μg（r=0.9995）范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系；平均回收率為98.50%（RSD為0.46%）。結(jié)論：本方法準(zhǔn)確、快速、簡便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于消化膠囊中橙皮苷的含量測定。

【關(guān)鍵詞】消化膠囊；橙皮苷；高效液相色譜法

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號】1007-8517（2016）07-0019-02

Abstract：Objective To establish high performance liquid chromatography （HPLC） determination of hesperidin in digestive capsule.Methods Using octadecyl bonded silica gel chromatography column （4.6mm×250mm，5μm）； With acetonitrile - water （0） were as mobile phase， flow rate of 1.0ml/min； Column temperature：30℃； detection wavelength 284 nm.Results Concentration of hesperidin in 10.15～81.20μg （r=0.9995） range and peak area showed a good linear relationship. The average recovery rate was 98.5% （RSD was 0.51%）.Conclusion This method is simple and reliable， rapid， accurate and stable results and can be used for determination the content of hesperidin in digestive capsule.

Keywords：Digestive capsule； hesperidin； HPLC

消化膠囊是曲靖市第一人民醫(yī)院的醫(yī)院制劑，由陳皮、炒枳殼、厚樸、木香等九味藥經(jīng)過粉碎、過篩、混合后裝入膠囊制得。臨床用于治療胸腹脹滿、食欲不化、嘔吐腹瀉腹痛等癥狀。消化膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]中以兩項薄層色譜來鑒別其中部分藥材，未建立制劑中中藥成分含量測定方法。處方中陳皮、炒枳殼兩味藥均含橙皮苷[2]，本文采用高效液相色譜法對其中橙皮苷進(jìn)行含量測定，為有效控制“消化膠囊”質(zhì)量提供可靠且簡便易行的方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent1260型高效液相色譜儀（包括G1311C系列四元泵，G1314F VWD檢測器，G1316A柱溫箱，G1329B自動進(jìn)樣器）；KQ-300UDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；METTLE MS205DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；PURELAB Flex 3超純水儀（英國ELGA公司）。

1.2 材料 橙皮苷對照品（批號：110721-201115，中國食品藥品檢定研究院）；消化膠囊（批號：201409102、20140302、201109151，曲靖市第一人民醫(yī)院）。甲醇、乙腈為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈-水（20∶80）；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：284nm；進(jìn)樣量10μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液制備 取本品裝量差異項下內(nèi)容物，混勻，取約0.2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲（頻率：45KHz；功率：240W）60min，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品儲備液的制備 精密稱取橙皮苷對照品20.30mg置20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度（作為加標(biāo)溶液，濃度為1.015mg/ml），再精密量取5ml置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得濃度為0.203mg/ml的對照品儲備液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按原處方制備不含炒枳殼、陳皮的陰性樣品，并按“2.2.1”項下制備陰性樣品溶液。

2.3 專屬性試驗 將陰性樣品溶液按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，見圖1。色譜圖中在橙皮苷的保留時間處，無其它成分干擾。

2.4 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取“2.2.2”項下橙皮苷對照品儲備液0.5、1、2、3、4ml，分別置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，以對照品濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），計算線性回歸方程，得橙皮苷的回歸方程Y=16.9963X+9.0488（r=0.9995）。結(jié)果表明：橙皮苷含量在10.15～81.20μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗 精密吸取同一質(zhì)量濃度的橙皮苷對照品溶液在“2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積值，RSD為0.8%。

2.6 重復(fù)性試驗 取同一批消化膠囊5份，按“2.2.1”項下的方法處理，考察方法的重復(fù)性。供試品中橙皮苷含量RSD為1.2%。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液（批號：201409102），分別于0、2、4、8、12、24h按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行分析。結(jié)果橙皮苷的RSD為1.3%。表明供試品溶液在室溫下放置24h基本穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗 分別取已知含量的同一批消化膠囊（批號201409102）約0.1g，精密稱定，共6份，分別精密加入對照品溶液（濃度為1.015mg/ml）1ml，按“2.2.1”項下的方法處理，制備供試液，分別測定，計算回收率。平均回收率為98.50%，RSD為0.46%。見表1。

2.9 樣品含量測定 取不同批號的供試品3批按“2.2.1”項下的方法處理，制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，按上述色譜條件測定峰面積積分值，以外標(biāo)法計算橙皮苷含量。見表2。

3 討論

3.1 流動相的選擇 實驗先后試用文獻(xiàn)[3]中甲醇-醋酸-水不同比例作為流動相測定，對照品及樣品中橙皮苷的峰形及與其他雜質(zhì)的分離效果均不滿意。結(jié)果選用文獻(xiàn)[4]的乙腈-水（20∶80）為流動相，能得到對稱性較好的橙皮苷峰，并且樣品中橙皮苷與其它雜質(zhì)能很好地分離，故選用乙腈-水（20∶80）為流動相。

3.2 提取方法的選擇 ①提取方法的確定：試驗比較了甲醇水浴回流提取和超聲提取，結(jié)果回流提取雜質(zhì)較多，超聲處理簡便快速，雜質(zhì)較少，且加標(biāo)回收率較好，故選用超聲提取。②超聲時間的確定：精密稱取樣品（批號201409102）5份，每份約0.2g，精密加入甲醇50ml，分別超聲（頻率：45KHz；功率：240W）處理20、30、50、60、70 min，結(jié)果超聲50 min后，橙皮苷含量基本不變，證明樣品超聲處理50min后，能將樣品中的橙皮苷提取完全，所以超聲（頻率：45KHz；功率：240W）時間確定為60 min。

3.3 結(jié)論 該方法準(zhǔn)確、快速、簡便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于消化膠囊中橙皮苷的含量測定。

參考文獻(xiàn)

[1] 云南省食品藥品監(jiān)督管理局.云南醫(yī)院制劑標(biāo)準(zhǔn)[S].云南：云南科學(xué)技術(shù)出版社，2005：543.

[2] 呂武清，龍新華.中成藥中的藥材薄層色譜鑒別[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：327-328.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：176-177.

[4] 蘇紅，劉淇，薛平.橘葉中陳皮苷含量測定[J].中國現(xiàn)代中藥，2006（4）：19-20.

（收稿日期：2016.01.18）