朱旭　魏高文　陳書　唐源苑

摘 要 目的：探討蜂膠軟膠囊對(duì)小鼠免疫功能的影響。方法：分別以175、350、700 mg/kgBW劑量的總黃酮灌胃后檢測(cè)各項(xiàng)免疫指標(biāo)。結(jié)果： 蜂膠黃酮能刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞的增值、轉(zhuǎn)化，也能促進(jìn)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，且作用隨著劑量的增加而增強(qiáng)。結(jié)論：蜂膠軟膠囊能提高小鼠的細(xì)胞免疫功能。

關(guān)鍵詞 蜂膠黃酮 細(xì)胞免疫 小鼠

中圖分類號(hào)：GR587.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.16400/j.cnki.kjdks.2016.02.027

糖尿?。―iabetes mellitus，DM）是因胰島素絕對(duì)或者相對(duì)不足而引起的體內(nèi)糖、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)代謝紊亂的一種疾病，目前尚無有效的治療措施。隨著生活方式的改變和老齡化進(jìn)程的加速，我國(guó)DM的患病率正在呈快速上升趨勢(shì)，成為繼心腦血管疾病、惡性腫瘤之后的另一種嚴(yán)重危害人民健康的慢性非傳染性疾病。①2007年全國(guó)成年人糖尿病調(diào)查顯示，糖尿病患病率為9.7%，估計(jì)我國(guó)現(xiàn)有糖尿病患者9240萬，居全球第l位。②長(zhǎng)期的高血糖可導(dǎo)致CD4、CD4/CD8、B細(xì)胞、NK細(xì)胞顯著性減低，③機(jī)體免疫功能下降，從而引起糖尿病并發(fā)癥如肺結(jié)核、腎病等疾病的發(fā)生。糖尿病并發(fā)癥累及多個(gè)器官，致殘、致死率高，嚴(yán)重影響患者的身心健康，并給個(gè)人、家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。

蜂膠是蜜蜂采集植物的樹脂，并混和自身的唾液和蜂蠟，咀嚼而成的一種有粘性的膠狀物質(zhì)。具有抗菌消炎、抗病毒、抗真菌、排除毒素、增強(qiáng)免疫、軟化血管、凈化血液、改善微循環(huán)、抗氧化、抗腫瘤、抗細(xì)胞毒素、局部麻醉、促進(jìn)組織再生等廣泛的生物學(xué)作用。

本實(shí)驗(yàn)以蜂膠類黃酮為處理因素，以糖尿病小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，觀察蜂膠類黃酮對(duì)糖尿病小鼠免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)機(jī)制的影響，以動(dòng)物實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)，推論蜂膠對(duì)糖尿病患者的作用，為減少糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料

以健康的清潔級(jí)CD-1昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，全部為雄性，體重均為18～22g之間，以減少實(shí)驗(yàn)中的誤差。

蜂膠軟膠囊為湖南明園蜂業(yè)生產(chǎn)的不含其他藥物成份的純蜂膠制劑，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為Q/OKDE 006，衛(wèi)生許可證號(hào)為湘衛(wèi)食準(zhǔn)字[2006]第430000-000077號(hào)，安慰劑為湖南明園蜂業(yè)生產(chǎn)的不含蜂膠成分的蜂膠溶劑油膠囊。

1.2 試驗(yàn)方法

（1）先將小鼠造模，造模采用試劑為四氧嘧啶，將小鼠禁食12小時(shí)后，腹腔注射四氧嘧啶185mg/Kg，一周后測(cè)血糖，隨機(jī)血糖>11.1mmol/L者為糖尿病小鼠，連續(xù)四周監(jiān)測(cè)所有小鼠，直到所有小鼠出現(xiàn)糖尿病癥狀或者死亡。造模成功后，將糖尿病小鼠隨機(jī)分配到四個(gè)不同的處理組，以0.2ml/10g·BW的容量給小鼠灌胃，A組為對(duì)照組，對(duì)照組灌胃不含蜂膠的溶媒；B組、C組和D組分別灌胃低劑量（175mg/Kg·BW）、中劑量（350mg/Kg·BW）和高劑量（700mg/Kg·BW）的蜂膠，灌胃30天。

（2）實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，無菌取脾后制成細(xì)胞懸液，使用“MTT法”檢測(cè)淋巴細(xì)胞的增殖轉(zhuǎn)化能力。采用加ConA孔的光密度值D（570nm）減去不加ConA孔的光密度值D（570nm）指標(biāo)表示。

（3）使用二硝基氟苯誘導(dǎo)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH），比較各組小鼠耳廓腫脹度。具體步驟：在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前6d將小鼠腹部皮膚脫毛約3cm？cm的范圍，將DNFB均勻涂抹于小鼠脫毛部分的腹部皮膚致敏，6d后再次將DNFB涂抹于小鼠耳部，24h后處死小鼠，剪下小鼠耳殼，稱重，以小鼠耳殼的重量來表示遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)是否發(fā)生及其發(fā)生程度如何。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

收集到的資料類型為計(jì)量資料，采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析，各組之間的比較采用方差分析的統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 小鼠初始體重的比較

在實(shí)驗(yàn)前測(cè)量小鼠體重，比較各劑量組小鼠實(shí)驗(yàn)前的體重均數(shù)，發(fā)現(xiàn)各組小鼠體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），小鼠初始體重在各組間分布均衡；造模后，由于糖尿病對(duì)小鼠的影響，小鼠出現(xiàn)體重比造模前減輕的情況。

2.2 蜂膠對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響

從表1可見，各劑量組的耳廓腫脹度相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），在此基礎(chǔ)上進(jìn)行兩兩比較，四組兩兩比較P值均等于0.000，這意味著四組兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且隨著蜂膠劑量的增加，耳廓腫脹度越大，表示遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)越明顯。

2.3 蜂膠對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的影響

如表2所示，比較四組差值d的大小，結(jié)果顯示四組差值總的來說有差別（P<0.05），在此基礎(chǔ)上進(jìn)行兩兩比較發(fā)現(xiàn)，高劑量組與中劑量組比較P值為0.025，高劑量組與低劑量組比較P值為0.000，高劑量組與對(duì)照組比較P值為0.000，中劑量組與低劑量組比較P值為0.017，中劑量組與對(duì)照組比較P值為0.003，低劑量組與對(duì)照組比較P值為0.536.除低劑量組與對(duì)照組差值d差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外（P = 0.536>0.05），其余各組兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），即各劑量組間均有差別。

3 討論

蜂膠（Propolis）是醫(yī)學(xué)寶庫的古典名藥， 已有數(shù)千年的歷史。近年來許多科學(xué)家對(duì)蜂膠的成分進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)蜂膠中包含300多種已知的物質(zhì)，其主要成份為黃酮類、萜類 、酚類 、酯類 、礦物質(zhì)、維生素、脂肪酸等。④⑤黃酮類物質(zhì)是人體所必需的營(yíng)養(yǎng)素之一，也是蜂膠最主要的活性成分種類之一。黃酮分子量小，易被人體吸收，能通過血管屏障，進(jìn)入脂肪組織，它對(duì)人體的健康具有廣泛的作用，當(dāng)體內(nèi)缺乏黃酮時(shí)，易導(dǎo)致大腦和心臟功能不全，血管硬化，脆性增強(qiáng)。⑥⑦⑧糖尿病在全國(guó)乃至全世界已經(jīng)逐漸成為一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病，其并發(fā)癥累及多個(gè)器官，致殘、致死率高，嚴(yán)重影響患者的身心健康，并給個(gè)人、家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)，因此尋求方法幫助糖尿病患者抵抗抵抗疾病本身及其并發(fā)癥成為了已經(jīng)迫不及待。在本次研究旨在以動(dòng)物為研究對(duì)象，目的是推斷蜂膠黃酮能否對(duì)糖尿病有積極的作用，在實(shí)驗(yàn)中，我們將小鼠分成四組，分別以零劑量，低劑量（175mg/Kg·BW）、中劑量（350mg/Kg·BW）和高劑量（700mg/Kg·BW）的蜂膠黃酮灌胃，發(fā)現(xiàn)蜂膠黃酮確實(shí)對(duì)糖尿病小鼠的細(xì)胞免疫功能有提升的作用，它能促進(jìn)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，且能促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化功能，且蜂膠黃酮對(duì)細(xì)胞免疫的提升作用隨著灌胃濃度的升高而上升。如果能證實(shí)蜂膠對(duì)人類也有相同的作用，那么蜂膠對(duì)細(xì)胞免疫的促進(jìn)作用不僅能幫助糖尿病患者抵抗疾病，在許多其他的疾病治療中，如感染、惡性腫瘤、自身免疫系統(tǒng)疾病等，也會(huì)產(chǎn)生十分重要的影響。

我國(guó)是一個(gè)蜂膠產(chǎn)品生產(chǎn)的大國(guó)，資源豐富，這是蜂膠類產(chǎn)品生產(chǎn)的堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)，但蜂膠成分復(fù)雜，在蜂膠的醫(yī)用道路上，還需要大量的研究。

注釋

① 羅美莊，魏高文，黃丹丹等.蜂膠軟膠囊輔助綜合干預(yù)對(duì)糖尿病高危人群生命質(zhì)量的影響[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008.15（6）.

② 魏高文，馮務(wù)群，夏曉凱等.蜂膠軟膠囊對(duì)小鼠糖尿病預(yù)防作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2007.14（2）：530-531.

③ 毛達(dá)勇，周有利，朱名安等.2型糖尿病伴感染患者細(xì)胞免疫和體液免疫的研究[J].鄖陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003.22（5）：274-277.

④ 高暢，楚勤英，唐志雄等.蜂膠對(duì)糖尿病大鼠創(chuàng)面愈合的影響[J].感染、炎癥、修復(fù)，2008.9（1）：25-28.

⑤ 李雅晶，茹建甫.蜂膠桑葉復(fù)合片對(duì)2型糖尿病病人糖脂代謝的調(diào)節(jié)作用[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010.38（36）：20611-20613.

⑥ 孔慶峰，許志形，鄧玉文.國(guó)內(nèi)蜂膠黃酮的藥理學(xué)研究近況[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志，2006.23（8）：1003-1004.

⑦ 于琴，董文賓，王順民.甘草渣中黃酮類成分提取工藝的研究[J].食品工業(yè)，2005（3）：20-22.

⑧ 閆亞美，吳珍紅，繆曉青.蜂膠黃酮特性及其提取鑒定研究[J].毒理學(xué)雜志，2007.21（2）：163-164.