六味參花顆粒劑的制備及質(zhì)量標準研究

涂　星，周昌園，文德鑒，郜紅利

湖北民族學院中醫(yī)藥學院(湖北 恩施 445000)

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六味參花顆粒劑的制備及質(zhì)量標準研究

涂星，周昌園，文德鑒，郜紅利

湖北民族學院中醫(yī)藥學院(湖北 恩施 445000)

【摘要】目的研究六味參花顆粒劑的制備工藝及質(zhì)量標準。方法以成型率和引濕性為指標，采用正交法篩選六味參花顆粒劑的最佳成型工藝，并進行驗證；采用薄層色譜法對六味參花顆粒劑中的竹節(jié)參和三百棒進行了定性鑒別。結(jié)果最佳制粒工藝條件為浸膏∶混合輔料=1∶4，糊精∶淀粉=1∶6，干燥溫度60℃，成品顆粒的成型率好、溶化性優(yōu)；六味參花顆粒劑薄層色譜鑒別特征明顯。結(jié)論本實驗所制定的制備工藝可行，對顆粒劑中的成分可進行定性、定量檢測。

【關(guān)鍵詞】六味參花顆粒；制備工藝；質(zhì)量標準；薄層色譜

中藥顆粒劑是將處方內(nèi)藥物或部分藥物的提取物，與適宜的定量輔料混合，經(jīng)特定工藝制成含量均勻的顆粒，既保持了傳統(tǒng)湯劑吸收快、顯效迅速等優(yōu)點，又克服了湯劑服用前臨時煎煮、費時耗能、久置易霉敗變質(zhì)等不足[1]。顆粒劑雖然利于患者口服，且性能穩(wěn)定，易于吸收、安全性高、計量準確、方便保管[2-3]，但在制取過程中存在著溶化性、水分不符合規(guī)定，色澤不均勻，含量測定不合格[4]等問題。

目前研究發(fā)現(xiàn)，土家苗藥竹節(jié)參、落新婦、拐子藥、三百棒等均對類風濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)具有較好的治療作用[5-9]。本研究選用湖北民族學院附屬民大醫(yī)院名老中醫(yī)臨床使用10余年，療效確切，未見明顯不良反應的六味參花湯(竹節(jié)參、落新婦、七葉一枝花、拐子藥、三百棒、虎刺)為研究對象，以顆粒劑成型率和引濕性為考察指標，采用正交設計對制劑工藝中輔料的種類及配比、干燥溫度等因素進行考察，篩選出最佳制備工藝。

1材料與試藥

1.1儀器BSA2245-CW電子分析天平(賽多利斯科學儀器(北京)有限公司)；DL-1電子萬用爐(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)；LK-1000A搖擺式中藥粉碎機(上海隆拓儀器設備有限公司)；ZNHW電熱套(鞏義市予華儀器有限責任公司)；GZX-9140MBE電熱鼓風干燥箱(上海博迅事實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠)；TD5A-WS湘儀離心機(湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)公司)；WT-MV330CDI-彩色CCD顯微鏡數(shù)字攝像機(上海微圖儀器科技發(fā)展有限公司)。

1.2試藥落新婦(安徽亳州國藥堂大藥房，批號20150801)；三百棒(安徽亳州國藥堂大藥房，批號20150801)；七葉一枝花(恩施仁德藥房，批號RD15-07-02035)；四川虎刺(恩施仁德藥房，批號RD15-07-09012)；竹節(jié)參(自采于恩施椿木營竹節(jié)參種植基地，經(jīng)湖北民族學院中醫(yī)藥學院郜紅利老師鑒定為五加科植物竹節(jié)參PanaxjaponicusC.A.Mey的干燥根莖)；拐子藥(自采于恩施州利川市汪營鎮(zhèn)星斗坪自然森林保護區(qū)，經(jīng)湖北民族學院中醫(yī)藥學院郜紅利教授鑒定為毛茛科植物單葉鐵線蓮ClematishenryiOliv的干燥根)；可溶性淀粉(國藥集團化學試劑有限公司，批號20150313)；α-乳糖(國藥集團化學試劑有限公司，批號20150209)；麥芽糊精(鄭州特正商貿(mào)有限公司，批號20150725)。

2方法與結(jié)果

2.1六味參花浸膏的制備按六味參花湯處方稱取各味中藥，適當粉碎，加10倍藥材量的水浸泡1 h后煎煮2 h，濾過，濾渣加6倍量水煎煮1.5 h，濾過，合并濾液，濃縮至含生藥量3 g/g的浸膏，-4℃儲存?zhèn)溆谩?/p>

2.2單一輔料的預選根據(jù)相關(guān)文獻報道[10-12]，確定單一輔料的種類，以浸膏∶輔料=1∶5均勻混合，考察軟材情況及軟材過篩情況，過一號篩(10目)擠出制粒，50℃烘干，分別計算成型率和引濕性，并參照中國藥典2015年版四部0105要求[13]測定其溶化性。選取能通過一號(10目)篩但不能通過五號(80目)篩的為合格顆粒。以合格顆粒量除以總顆粒量即為成型率。成型率(%)=能通過一號篩和不能通過五號篩的顆粒重/總顆粒重 ×100%。參考《中國藥典》四部 9103 藥物引濕性試驗指導原則[13]測定其引濕率。引濕率(%)=(吸濕顆粒重-樣品顆粒重)/樣品顆粒重×100%，見表1。

表1　單一輔料篩選結(jié)果

由結(jié)果可見，以乳糖為輔料的成型率、引濕性和溶化性最好；以糊精為輔料制軟材結(jié)塊明顯，不易成型，其原因可能是糊精的粘性過大；以可溶性淀粉為輔料制得的顆粒劑成型率較可溶性淀粉的成型率稍低，其原因可能與可溶性淀粉的粘性較差有關(guān)。乳糖和可溶性淀粉為輔料時其引濕增重小于2%，表明所制備的顆粒略具引濕性。因此在選用輔料時有兩種選擇，即單純用乳糖作為輔料或以可溶性淀粉為輔料，適當添加糊精改善其粘性。而考慮到生產(chǎn)時乳糖的成本較高，且RA屬于慢性疾病需長期用藥，以乳糖作為輔料時可能會導致糖尿病、齲齒，甚至會導致乳糖不耐受患者出現(xiàn)嚴重腹瀉等癥狀，基于此，本研究擬選用糊精與可溶性淀粉為混合輔料。

2.3正交法優(yōu)選成型工藝

2.3.1實驗因素與水平的設計選擇浸膏與混合輔料比例、糊精與可溶性淀粉用量的比例、干燥溫度作為考察因素，以成型率和引濕性作為評價指標，用L9(34)正交表安排實驗，見表2。

表2　L9(34)正交試驗設計因素水平表

2.3.2實驗方法與結(jié)果每份取4 mL浸膏，按表3、4確定浸膏與混合輔料比例、糊精與可溶性淀粉用量的比例制成軟材，過10目篩，將通過篩的顆粒于表3、4所示的溫度下干燥，然后測定能通過一號篩且不能通過五號篩的顆粒重，以成型率和引濕率作為考察指標，進行正交試驗，并對結(jié)果進行分析，見表3、表4。

由上表可見以成型率考察，最佳工藝為A2B2C3；以引濕率考察，最佳工藝A2B1C2?？紤]到生產(chǎn)成本等問題，故選擇價格相應便宜的淀粉，故最佳制劑工藝為A2B2C3，即浸膏∶混合輔料(1∶4)，糊精∶淀粉(1∶6)，干燥溫度60℃。

表3　L9(34)正交試驗設計及測定結(jié)果

表4　引濕率、成型率方差分析表

2.4優(yōu)選工藝驗證按最佳成型工藝制備3份六味參花顆粒劑，測定顆粒成型率、引濕率及溶化性，見表5。

表5　最佳工藝驗證

其結(jié)果與制備成型工藝研究結(jié)果基本一致，依上述條件制成的顆粒為淺棕黃色，色澤均勻一致。表明六味參花顆粒制備工藝合理、可行，可用于六味參花顆粒的制備及供工業(yè)生產(chǎn)參考。

2.5質(zhì)量標準研究

2.5.1三百棒的薄層色譜鑒別①毛兩面針素的鑒別：分別取優(yōu)選工藝制備的3批次樣品2 g，研磨粉碎，加70%乙醇40 mL超聲1 h濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL溶解作為供試品溶液。另取優(yōu)選工藝制備的缺三百棒的陰性樣品2 g，同法制備陰性對照品溶液。精密稱取毛兩面針素5.0 mg，加甲醇溶解并定容至10 mL，即得含毛兩面針素0.5 mg/mL的對照品溶液。照薄層色譜法[14]試驗，吸取供試品溶液、缺當歸陰性對照溶液、對照品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-氯仿-甲醇-氨水(2∶13∶1∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的黃色的熒光斑點，陰性對照無干擾，結(jié)果見圖1A。②氯化兩面針堿的鑒別：分別取優(yōu)選工藝制備的3批次樣品2 g，研磨粉碎，加稀鹽酸20 mL，超聲提取30 min，濾過，濾液用三氯甲烷提取3次，每次15 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL溶解作為供試品溶液。另取優(yōu)選工藝制備的缺三百棒的陰性樣品2 g，同法制備陰性對照品溶液。精密稱取氯化兩面針堿5.0 mg，加甲醇溶解并定容至10 mL，即得含氯化兩面針堿0.5 mg/mL的對照品溶液。按照薄層色譜法[14]試驗，吸取供試品溶液、缺三百棒陰性對照溶液、對照品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨溶液 (30∶1∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的藍綠色的熒光斑點，陰性對照無干擾，見圖1B。

A　毛兩面針素 B　氯化兩面針堿1，2，3為3批次樣品供試液，4為缺三百棒陰性對照溶液，5為毛兩面針素，5′為氯化兩面針堿。圖1　TLC圖譜

2.5.2竹節(jié)參的薄層色譜鑒別分別取優(yōu)選工藝制備的3批次樣品2 g，研磨粉碎，置于50 mL具塞錐形瓶中，加60%甲醇25 mL，500 W，40 kHz超聲提取40 min，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取優(yōu)選工藝制備的缺竹節(jié)參的陰性樣品2 g，同法制備陰性對照品溶液。精密稱竹節(jié)人參皂苷IVa 5.0 mg，加甲醇溶解并定容至10 mL，即得含竹節(jié)人參皂苷IVa 0.5 mg/mL的對照品溶液。照薄層色譜法[14]試驗，吸取供試品溶液、缺竹節(jié)參陰性對照溶液、對照品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水 (9∶3∶0.2∶0.6)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，以10%硫酸乙醇溶液加熱顯色至斑點清晰，置日光和紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾。日光燈下檢視結(jié)果見圖2A，紫外光燈下檢視結(jié)果見圖2B。

A　日光燈下檢視 B　紫外光燈下檢視　　1，2，3為3批次樣品供試液，4為缺竹節(jié)參陰性對照溶液，5為竹節(jié)人參皂苷IVa。圖2　竹節(jié)參不同光源檢視圖譜

3討論

本實驗采用正交法對六味參花顆粒的制備工藝中輔料、干燥溫度等因素進行考察，由于所制備的顆粒劑中含大量多糖成分，久放易吸潮引濕，糖粉雖然是可溶性的優(yōu)良賦形劑，但易吸潮，不宜用于本顆粒制備，因此選擇了乳糖、糊精和淀粉三種稀釋劑作為輔料進行研究，綜合考慮吸濕性、成型率和成本等各方面因素，最終選擇了以糊精-淀粉混合物作為輔料。在篩選最佳制備工藝時發(fā)現(xiàn)在制備軟材時應先將糊精與可溶性淀粉充分混合均勻后再加入主藥浸膏，否則糊精會與主藥浸膏黏結(jié)成團塊，影響制軟材的效果。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)[15-17]，毛兩面針素和氯化兩面針堿具有一定的抗腫瘤、強行、降血壓、抗真菌、抗炎鎮(zhèn)痛等作用，因此選擇該兩種成分作為飛龍掌血的薄層鑒別指標。由于竹節(jié)人參皂苷Ⅳa為三萜皂苷，極性較大，本研究中選用三氯甲烷-甲醇-甲

酸-水(9∶3∶0.2∶0.6)的下層溶液為展開劑，并簡化了郭琳等[18]關(guān)于竹節(jié)參TLC鑒別中供試品溶液的制備方法，分離度較高，斑點較清晰。

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責任編輯：艾茜

A Study on the Preparation and Quality Standards of Liuweishenhua granules

Tu Xing，Zhou Changyuan，Wen Dejian，Gao Hongli

(SchoolofTCMinHubeiUniversityforNationalities，Enshi445000,China)

【Abstract】Objective To establish the feasible preparation technology of Liuweishenhua granules and to study its quality standards.Methods Orthogonal design was used to screen the best excipients and formation techniques of Liuweishenhua granules with indexes such as granule molding ratio and hygroscopicity.Thin-layer chromatography was used to make a qualitative identification for Panaxjaponicus C.A.Meyerand Toddaliaasiatica (L.) Lam.Results The feasible preparation technology of Liuweishenhua granules was as follows: maltodextrin and soluble starches (1∶6 by weight) was used as the excipients, the liquid extrac-excipients was one to four (vol∶weight), and the drying temperature was 60℃. Three batches of Liuweishenhua granules all achieved higher modeling rate and lower hygroscopicitywith good solubility prepared by the feasible preparation technology.Conclusion The preparation technology is feasible to be used for reference in the large industrial production.

【Key words】Liuweishenhhua granules;preparation process;quality standard;thin-layer chromatography(TLC)

作者簡介涂星(1987- )，男，湖北黃岡人，博士，研究方向：中藥制劑開發(fā)與安全性評價。

【中圖分類號】R285.5

【文獻標識碼】A

【文章編號】1008-8164(2016)01-0056-04

收稿日期：2015-11-13