陳沁韻，萬延民，丁相卿 ，任艷琴，肖健，徐建青

1.復旦大學附屬公共衛(wèi)生臨床中心，上海 201508；2.復旦大學生物醫(yī)學研究院，上海 200032；3.廣西中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院，南寧 530200

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·論著·

融合表達小鼠IgG2b-Fc可增強人類免疫缺陷病毒1型 Gag DNA 疫苗的免疫原性

陳沁韻1,2，萬延民1，丁相卿1,2，任艷琴1，肖健3，徐建青1,2

1.復旦大學附屬公共衛(wèi)生臨床中心，上海 201508；2.復旦大學生物醫(yī)學研究院，上海 200032；3.廣西中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院，南寧 530200

摘要：為闡明小鼠IgG2b-Fc對DNA疫苗免疫原性的增強作用，首先構建表達人類免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1，HIV-1)CN54Gag基因的DNA疫苗及表達Gag與小鼠IgG2b-Fc融合基因的DNA疫苗，限制性酶切和DNA測序結果表明這兩個疫苗均構建成功，蛋白免疫印跡結果也顯示其正確表達。然后，利用上述DNA疫苗接種C57BL/6小鼠，比較兩個DNA疫苗所誘導的特異性體液免疫反應和特異性細胞免疫反應。結果顯示，融合表達小鼠IgG2b-Fc對特異性細胞免疫和體液免疫反應均有增強作用，但只有對特異性體液免疫反應的增強作用有統(tǒng)計學意義。

關鍵詞：人類免疫缺陷病毒1型；人類免疫缺陷病毒疫苗；Gag；IgG-Fc

艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)是由人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)引起的人體免疫系統(tǒng)方面的疾病。截至2014年底，全球約有3 690萬名HIV攜帶者。2014年全球新發(fā)HIV感染200萬例，AIDS相關死亡120萬例?？狗崔D錄病毒治療是目前AIDS的主要治療手段，可顯著改善HIV感染者的生活質量、延長生存期，但不能完全清除病毒[1-2]?；颊唔毥K身用藥，一旦停止用藥，病毒載量快速反彈[3-4]；而長期用藥可導致耐藥性產生、藥物相關毒副作用增加、患者依從性不佳、經濟負擔重等問題[5-6]。因此，研制HIV疫苗是最終預防和控制AIDS的關鍵。

DNA疫苗因安全性好、易于制備及可同時刺激機體產生特異性體液和細胞免疫應答[7-8]等特點而廣泛用于HIV疫苗研究，但其免疫原性較弱。因此，探索提高 DNA 疫苗免疫原性的策略和方法是 DNA 疫苗研制的重要環(huán)節(jié)。提高DNA疫苗免疫原性的途徑主要有改進疫苗設計、添加佐劑、改進免疫途徑和免疫方案等[9-11]。其中，利用生物分子佐劑增強免疫應答被認為是最有效的途徑之一[12-13]。本研究采用小鼠IgG2b-Fc作為佐劑，構建HIV-1 Gag融合小鼠IgG2b-Fc DNA疫苗，通過小鼠免疫實驗觀察IgG2b-Fc對HIV-1 Gag特異性免疫反應的增強作用。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1菌株、細胞、質粒和蛋白大腸埃希菌Top10感受態(tài)和轉染用HEK293T細胞為本室保存；空載質粒pSVl.0、DNA疫苗質粒pSVl.0-CN54Gag均為本室保存。HIV-1 Gag(CN54株)原核表達蛋白購自北京安百勝生物科技有限公司。

1.1.2工具酶和主要試劑各種限制性內切酶、4 DNA連接酶和其他工具酶均購自Thermo Fisher Scientific公司，2×EasyTaq PCR SuperMix 購自北京全式金生物技術有限公司，Eastep TM 凝膠及聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)回收試劑盒購自上海普洛麥格生物產品有限公司，真核細胞轉染試劑TurboFect購自Thermo Fisher Scientific公司，RPMI 1640培養(yǎng)基、DMEM培養(yǎng)基購自Corning公司，不含血清細胞培養(yǎng)基FreeStyle 293 Expression Medium購自Gibco公司，Protein A+G Agarose購自碧云天生物技術，6×Protein Loading Buffer購自北京全式金生物技術有限公司，質粒大量提取試劑盒(EndoFree Plasmid Giga Kit)購自德國Qiagen公司，小鼠γ干擾素(interferon γ，IFN-γ)酶聯(lián)免疫斑點(enzyme-linked immunospot，ELISPOT)試劑盒購自美國BD公司，ELISPOT所用HIV-1 CN54Gag蛋白肽庫由吉爾生化(上海)有限公司合成。

1.2方法

1.2.1IgG2b-Fc片段的設計與合成在美國國立生物技術信息中心(National Center of Biotechnology Information，NCBI)數據庫中檢索獲得C57BL/6小鼠IgG2b重鏈鉸鏈區(qū)、CH2區(qū)和CH3區(qū)的編碼區(qū)序列(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/FJ232994.1)，總長720 bp，在序列5′端引入XbaⅠ酶切位點和保護堿基，3′端引入BamHⅠ酶切位點和保護堿基，序列由上海捷瑞生物工程有限公司合成。按常規(guī)分子克隆法將XbaⅠ和BamHⅠ雙酶切的IgG2-Fc基因連入空載質粒pSVl.0，酶切鑒定正確的質粒送鉑尚生物技術(上海)有限公司測序，鑒定無誤后命名為pSV-IgG2b。

1.2.2pSV-Gag-IgG2b融合質粒的構建為有利于免疫原Gag的分泌與表達，在Gag基因前添加分泌型信號肽(secretory signal peptide)基因：人IgG1分泌型信號肽基因序列為GGATGGTC-ATGTATCATCCTTTTTCTAG TAG CAACTGC-AACC(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/218533931)。采用重疊延伸 PCR(overlap extension PCR)，以pSVl.0-CN54Gag為模板，引入SalⅠ酶切位點、XbaⅠ酶切位點及相應的保護堿基，設計第1輪PCR上游引物F1：CATCCTTTTTCTAGTA-G CAACTG CAACCGCCGCCAGGGCCAGCAT；第2輪PCR上游引物F2：ACGCGTCGACATG-GGATGGTCATGTATCATCC TTTTTC TAGTA-GC；下游引物R：CTAGTCTAGATTCCTGGCT-GCTGGGGTCGTT。引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成，工作濃度均為10 μmol/L。第1輪PCR反應體系：模板1 μL、2×EasyTaq PCR SuperMix 10 μL、F1 0.8 μL、R 0.8 μL、滅菌水7.4 μL。反應條件： 95 ℃ 25 s，66 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min 20 s，30個循環(huán)。第2輪PCR反應體系：第1輪PCR擴增產物1 μL、2×EasyTaq PCR SuperMix 10 μL、F2 0.8 μL、R 0.8 μL、滅菌水7.4 μL。反應條件： 95 ℃ 25 s，66 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min 20 s，30個循環(huán)。按常規(guī)分子克隆法將SalⅠ和XbaⅠ雙酶切的Gag基因連入質粒pSV-IgG2b，酶切鑒定正確的質粒送鉑尚生物技術(上海)有限公司測序，鑒定無誤后命名為pSV-Gag-IgG2b。

1.2.3pSV-Gag質粒的構建構建不融合IgG2基因的對照組pSV-Gag質粒。以pSV-Gag-IgG2b融合質粒構建過程中第2輪PCR產物作為模板，設計下游引物R2：CTAGTCTAGATTATTCCTG-GCTGCTGGG。引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成，工作濃度為10 μmol/L。PCR反應體系：模板1 μL、2×EasyTaq PCR SuperMix 10 μL、F2 0.8 μL、R2 0.8 μL、滅菌水7.4 μL。反應條件：95 ℃ 25 s，66 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min 30 s，30個循環(huán)。按常規(guī)分子克隆法將SalⅠ和XbaⅠ雙酶切的Gag基因連入空載質粒pSV1.0，酶切鑒定正確的質粒送鉑尚生物技術(上海)有限公司測序，鑒定無誤后命名為pSV-Gag。

1.2.4pSVl.0質粒、pSV-IgG2b質粒、pSV-Gag-IgG2b質粒和pSV-Gag質粒的體外轉染在6孔板中接種6×105/mL HEK293T細胞2 mL，培養(yǎng)過夜，至細胞融合90%～95%，換不含血清的細胞培養(yǎng)基FreeStyle 293 Expression Medium，每孔2 mL。將4 μL質粒(1 μg/μL)加入400 μL不含血清和抗生素的DMEM培養(yǎng)基中，取轉染試劑TurboFect 6 μL加入上述混合液中，渦旋振蕩，室溫放置20 min，加入6孔板。37 ℃、5% CO2孵育48 h后進行檢測。

1.2.5DNA疫苗表達效果的檢測重懸pSVl.0質粒、pSV-IgG2b質粒、pSV-Gag質粒和pSV-Gag-IgG2b質粒轉染的HEK293T細胞，1 000 離心10 min，分別收取細胞和細胞培養(yǎng)上清液。細胞用磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)洗1遍，加入6×Protein Loading Buffer進行裂解，沸水煮10 min制成十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)樣品。將40 μL Protein A+G磁珠加入pSV-Gag-IgG2b質粒轉染的細胞培養(yǎng)上清液中，4 ℃孵育過夜進行富集，1 000 離心5 min，棄上清液，加入6×Protein Loading Buffer進行裂解，沸水煮10 min制成SDS-PAGE樣品。將5 μL HIV-1 p55小鼠單克隆抗體(簡稱單抗)加入pSV-Gag質粒轉染的細胞培養(yǎng)上清液中，4 ℃孵育過夜，加入40 μL Protein A+G磁珠，4 ℃孵育4 h，1 000 離心5 min，棄上清液，加入6×Protein Loading Buffer進行裂解，沸水煮10 min制成SDS-PAGE樣品。將細胞裂解液樣品和細胞培養(yǎng)上清液樣品進行10% SDS-PAGE。電泳所得凝膠濕轉(200 mA電流，120 min)至聚偏氟乙烯(polyvinylidene fluoride，PVDF)膜，5%脫脂奶粉封閉1 h。pSVl.0質粒、pSV-Gag質粒和pSV-Gag-IgG2b質粒轉染后的樣品封閉結束后，按1∶200加入HIV陽性患者血清(健康人血清作為陰性對照)，室溫反應2 h，用含吐溫20的PBS(PBS with Tween 20，PBST)洗3次，加入1∶2 000稀釋的辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)標記的山羊抗人IgG抗體，室溫反應1 h，PBST洗3次，加入底物進行膜上顯色。pSV-IgG2b質粒轉染后的樣品封閉結束后，按1∶2 000加入HRP標記的山羊抗小鼠IgG抗體，室溫反應l h，PBST洗3次，加入底物進行膜上顯色。1.2.6DNA疫苗的制備用EndoFree PlasmidGiga Kit試劑盒對pSV-Gag質粒和pSV-Gag-IgG2b質粒進行大量制備，所有操作按說明書進行。制備好的無內毒素的質粒溶于無菌生理鹽水中，調整濃度為l mg/mL。

1.2.7動物免疫體重為18～22 g的無特定病原體(specific pathogen free，SPF)級雌性C57BL/6小鼠購自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司。將C57BL/6小鼠按體重編號，采用隨機數字表法分為兩組，每組5只，分別接種pSV-Gag-IgG2b質粒和pSV-Gag質粒。接種時間分別設定在第0、2、4周，接種途徑為肌內注射，接種劑量為每次每只小鼠50 μg DNA。免疫結束后2周，用頸椎脫臼法處死小鼠，分離脾細胞和小鼠血漿。

1.2.8細胞免疫反應的檢測HIV-1 CN54Gag蛋白肽庫均包含122條單肽，按N端到C端的排列順序，將Gag蛋白全肽庫按40條/段分解為3段，配制成3個肽庫：Gag-1、Gag-2和Gag-3，其中最后一個肽庫包含42條肽。每個肽庫設復孔進行ELISPOT檢測。在ELISPOT平板每孔加100 μL IFN-γ包被抗體，4 ℃包被過夜。用RPMI 1640完全培養(yǎng)基200 μL/孔洗1次，加封閉液室溫封閉2 h；棄封閉液，將分離的小鼠脾細胞按2×105/孔加入ELISPOT 96孔板中，實驗孔加多肽至5 μg/mL，陽性孔加PMA(終濃度50 ng/mL)和離子霉素(ionomycine)(終濃度1 μg/mL)，空白對照孔只加脾細胞，補充RPMI 1640完全培養(yǎng)基至100 μL/孔，37 ℃、5% CO2孵育24 h；甩去細胞，每孔加200 μL冰預冷的去離子水，冰浴10 min，甩干，PBST洗3次；每孔加100 μL生物素化抗體，室溫孵育2 h，棄反應液，PBST洗3次，甩干；每孔加100 μL鏈霉親和素(streptavidin)-HRP，室溫孵育1 h，棄反應液，PBST洗4次，PBS洗2次，甩干；每1 ml顯色緩沖液加1滴顯色底物，混勻后，按每孔100 μL加入，室溫避光反應15～30 min，出現(xiàn)斑點后用自來水沖洗終止反應。待板干燥后，用北京賽智ChampSpot HI酶聯(lián)斑點分析儀進行計數分析。

1.2.9體液免疫反應的檢測用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測抗原特異性體液免疫反應。用終濃度為1 μg/mL的HIV-1 CN54Gag蛋白包被96孔板，每孔50 μL，4 ℃過夜。次日PBST洗3次，每孔加100 μL封閉液(5%脫脂奶粉)，37 ℃封閉1 h，PBST洗3次；倍比稀釋小鼠血清，每孔加 50 μL，37 ℃孵育1 h；PBST洗5次，按1∶2 000加入HRP標記的山羊抗小鼠IgG抗體，每孔50 μL，37 ℃孵育1 h；PBST洗5次，OPD顯色系統(tǒng)避光顯色15 min，最后用2 mol/L H2SO4終止反應，測量492。

1.3統(tǒng)計學方法

2結果

2.1pSV-Gag和pSV-Gag-IgG2b的酶切鑒定

兩種DNA疫苗構建模式如圖1A所示。將重組質粒pSV-Gag和pSV-Gag-IgG2b分別用SalⅠ+XbaⅠ及 SalⅠ+BamHⅠ雙酶切，酶切產物進行1%瓊脂糖凝膠電泳。pSV-Gag質粒雙酶切電泳結果顯示，在5 kb附近和1.5 kb附近各出現(xiàn)一條帶，與預期的4 992 bp和1 533 kp一致。pSV-Gag-IgG2b質粒雙酶切電泳結果顯示，在5 kb附近和2.5 kb與2 kb之間各出現(xiàn)一條帶，與預期的4 977 bp和2 256 bp一致。

A:Schematic representation of DNA vaccines.B:Enzyme identification of pSV-Gag and pSV-Gag-IgG2b.1,DL15000 marker;2,pSV-Gag digested with SalI and XbaI.3,pSV-Gag-IgG2b digested with SalI and BamHI;4,DL2000 marker.

圖1DNA疫苗構建模式及鑒定

Fig.1Construction and identification of DNA vaccines

2.2外源基因表達的蛋白免疫印跡結果

用TurboFect將質粒pSV1.0、pSV-IgG2b、pSV-Gag和pSV-Gag-IgG2b轉染至HEK293T細胞，培養(yǎng)48 h后收集細胞和細胞培養(yǎng)上清液，制備SDS-PAGE樣品，進行蛋白免疫印跡檢測。以HIV陽性患者血清為一抗，在轉染質粒pSV1.0的細胞裂解液樣品中未出現(xiàn)條帶；在轉染質粒pSV-Gag的細胞裂解樣品和細胞培養(yǎng)上清液樣品中出現(xiàn)了一條相對分子質量(Mr)60 000左右的條帶；在轉染質粒pSV-Gag-IgG2b的細胞裂解樣品和細胞培養(yǎng)上清液樣品中出現(xiàn)了一條Mr95 000左右的條帶。以山羊抗小鼠IgG抗體為一抗，在轉染質粒pSV-IgG2b的細胞裂解液樣品中出現(xiàn)Mr25 000左右的條帶。質粒pSV-Gag和質粒pSV-IgG2b均可正常表達，融合質粒pSV-Gag-IgG2b的蛋白Mr符合預期。以健康人血清為一抗對照，在轉染質粒pSV-Gag和pSV-Gag-IgG2b的細胞裂解液樣品中未出現(xiàn)特異性條帶(圖2)。

A:Western blotting of pSV1.0,pSV-Gag and pSV-Gag-IgG2b.M,protein marker;1 and 6,cell lysates of HEK293T cells transfected with pSV1.0;2 and 3,cell supernatants of HEK293T cells transfected with pSV-Gag;4 and 5,cell lysates of HEK293T cells transfected with pSV-Gag;7 and 8,cell lysates of HEK293T cells transfected with pSV-Gag-IgG2b;9 and 10,cell supernatants of HEK293T cells transfected with pSV-Gag-IgG2b.B:Western blotting of pSV-IgG2b.M,protein marker;1,cell lysates of HEK293T cells transfected with pSV-IgG2b.C.Western blotting of pSV-Gag and pSV-Gag-IgG2b with serum form healthy people.1,cell lysates of HEK293T cells transfected with pSV-Gag;2,cell lysates of HEK293T cells transfected with pSV-Gag-IgG2b.

圖2蛋白免疫印跡結果

Fig.2Western blotting results

2.3免疫后小鼠的體液免疫反應檢測

DNA免疫C57BL/6小鼠(50 μg/只)，采用ELISA檢測免疫結束后2周的小鼠特異性體液免疫反應，結果見圖3。對Gag特異性總IgG效價以10為底取對數，pSV-Gag-IgG2b疫苗免疫組抗體效價為4.05±0.06，顯著高于pSV-Gag疫苗免疫組的3.14±0.36(P=0.039 0)。

圖3ELISA檢測Gag特異性總IgG效價

Fig.3Gag specific total IgG titers detected by ELISA

2.4免疫后小鼠的細胞免疫反應檢測

由于特異性T細胞在體外響應多肽刺激原時可分泌IFN-γ，基于該原理本研究采用ELISPOT檢測DNA疫苗免疫小鼠誘發(fā)的特異性T細胞免疫反應。ELISPOT反應<50 SFC/106脾細胞視作無特異性T細胞反應。實驗結果顯示，HIV-1 Gag誘發(fā)了明顯的特異性細胞免疫反應，其中pSV-Gag-IgG2b疫苗免疫組激發(fā)的針對CN54Gag肽庫的總T細胞反應強度為(589.0±191.0)SFC/106脾細胞(圖4A)，高于對照組pSV-Gag疫苗免疫組的(344.0±68.59)SFC/106脾細胞，但兩者間無統(tǒng)計學差異。

分析3個Gag肽庫誘發(fā)的特異性T細胞反應，發(fā)現(xiàn)針對Gag-2肽庫的T細胞反應強度最高，pSV-Gag-IgG2b疫苗免疫組為(411.0±154.0)SFC/106脾細胞，高于pSV-Gag疫苗免疫組的(245.5±64.64)SFC/106脾細胞(圖4B)。針對Gag-3肽庫的T細胞反應強度最低，兩組均無特異性T細胞反應。pSV-Gag-IgG2b疫苗免疫組針對Gag-1肽庫的T細胞反應強度為(138.8±8.93)SFC/106脾細胞，高于pSV-Gag疫苗免疫組的(98.00±47.40)SFC/106脾細胞。雖然表達HIV-1 Gag融合IgG2b-Fc基因的DNA疫苗可引起T細胞平均反應強度增高，但無統(tǒng)計學差異。

A:Total T cell responses of DNA vaccines.B:T cell responses after stimulation of three peptides.

圖4T反應強度

Fig.4T cell response

3討論

DNA疫苗進入動物或人體中，被局部體細胞(肌細胞、角質化細胞和成纖維細胞)或專職抗原呈遞細胞(antigen presenting cell，APC)攝取，抗原基因編碼的蛋白得以表達而作為疫苗的抗原。局部體細胞攝取抗原后，可通過主要組織相容性復合體(major histocompatibility complex，MHC)Ⅰ類途徑呈遞抗原。專職APC捕獲肌肉細胞分泌或凋亡肌肉細胞釋放的抗原蛋白，快速轉移至引流淋巴結，通過MHCⅡ類途徑呈遞抗原，或通過MHCⅠ類途徑交叉呈遞。樹突細胞(dendritic cell，DC)作為最強大的專職APC，表面表達多種IgG受體(FcγR)。當抗原肽與IgG-Fc融合后，抗原肽-IgG-Fc融合蛋白可通過Fc片段與FcγR結合，介導抗原肽的呈遞。這種方式可同時通過MHCⅠ和Ⅱ類途徑呈遞抗原，激活CD4+T細胞和CD8+T細胞，呈遞效率遠高于單個抗原[14-15]。因此，構建抗原肽與IgG-Fc的重組DNA疫苗可提高抗原肽的免疫原性[16]。例如，Zaharatos等[17]將HIV-1 p24抗原與小鼠IgG1-Fc和IgG2a-Fc片段進行基因融合，構建重組疫苗，結果顯示融合小鼠IgG2a-Fc片段重組疫苗誘導機體產生的抗原特異性體液免疫應答提升了近10倍，而細胞免疫應答在各組間無顯著差異。Wang等[18]將改造的人乳頭瘤病毒58型(human papillomavirus 58,HPV58)E6 和E7基因融合人IgG-Fc及錨定蛋白糖基磷脂酰肌醇(glycosylphos-phatidylinositol，GPI)，重組疫苗免疫小鼠后能產生有效的體液免疫應答和細胞免疫應答，人IgG Fc段增強了融合基因的免疫原性且利于鑒定。

由于不同 IgG亞類的Fc與不同種類的 FcγR親和力不同[19]，推測不同IgG亞類的Fc佐劑活性可能存在差異。本研究主要探討了融合小鼠IgG2b-Fc片段對HIV-1 Gag DNA疫苗免疫原性的影響，結果顯示pSV-Gag-IgG2b誘導機體產生的抗體效價與不融合Fc段的pSV-Gag疫苗相比，提升了近10倍(P=0.039 0)，特異性T細胞反應在兩組間無統(tǒng)計學差異，與Zaharatos等[17]報道的IgG2a-Fc佐劑效果相似。以往研究表明，雖然小鼠IgG2a和IgG2b均可與FcγRⅠ和FcγRⅣ結合，但IgG2a與這兩種Fc受體的親和力高于IgG2b，特別是IgG2b與活化性受體FcγRⅠ的親和力比IgG2a低1 000倍[20]。然而，本研究發(fā)現(xiàn)IgG2b-Fc對HIV-1 Gag DNA疫苗免疫原性的增強作用與文獻報道相近，提示Fc片段的佐劑活性并非由FcγRⅠ介導，也與Zaharatos等[17]對IgG2a-Fc的突變研究結果相符，他們發(fā)現(xiàn)通過突變使IgG2a喪失與FcγRⅠ的結合能力并未降低特異性免疫反應強度。此外，還不能排除其他可能提升免疫反應強度的途徑，如融合Fc片段后可延長目標抗原的半衰期[21]。

綜上所述，雖然IgG-Fc的佐劑活性機制尚未完全闡明，但本研究明確提示IgG2b-Fc與IgG2a-Fc具有相似的佐劑活性，為今后抗原-Fc融合疫苗的研究奠定了基礎。

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Fusion expression of mouse IgG2b-Fc improves immunogenicity of human immunodeficiency virus type 1 Gag DNA vaccine

CHEN Qinyun1,2,WAN Yanmin1,DING Xiangqing1,2,REN Yanqin1,XIAO Jian3,XU Jianqing1,2

1.Shanghai Public Health Clinical Center Affiliated to Fudan University,Shanghai 201508,China；2.Institute of Biomedical Sciences,Fudan University,Shanghai 200032,China;3.School of Basic Medical Science,Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning 530200,China

Abstract:To explore the immunogenicity of DNA vaccine expressing IgG2b-Fc,eukaryotic expression vectors pSV-Gag and pSV-Gag-IgG2b were constructed.The constructed DNA vaccines were validated by restriction enzyme digestion and DNA sequencing.Western blotting results showed both of the two DNA vaccines could be expressed at appreciable levels .C57BL/6 mice were injected with these two DNA vaccines by intramuscular injection and their antigen-specific humoral responses and T cell responses were compared after the last immunization.The results showed that human immunodeficiency virus type 1(HIV-1)Gag fused with mouse IgG2b-Fc elicited superior Gag-specific humoral responses and T cell responses,but there was only significant increase in antigen-specific humoral responses between the two DNA vaccines.

Key words:Human immunodeficiency virus type 1;Human immunodeficiency virus vaccine;Gag;IgG-Fc

基金項目：廣西自然科學基金(2012GXNSFAA053120)

通信作者：徐建青

Corresponding author.XU Jianqing,E-mail：xujianqing2014@126.com

(收稿日期：2016-01-19)