EMT患者血清和腹腔液中CA125、VEGF、炎性細胞因子水平的變化及意義

曹偉麗, 陳 紅

(武漢大學中南醫(yī)院婦產科,湖北 武漢 430071)

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·臨床研究·

EMT患者血清和腹腔液中CA125、VEGF、炎性細胞因子水平的變化及意義

曹偉麗, 陳 紅

(武漢大學中南醫(yī)院婦產科,湖北 武漢 430071)

目的 探討子宮內膜異位癥(endometriosis, EMT)患者血清及腹腔液中CA125、VEGF及其炎性細胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平的變化及意義。方法 選擇取2011年1月至2015年6月均經病理證實為EMT的109例患者為EMT組(r-AFS Ⅰ～Ⅱ期45例,Ⅲ～Ⅳ期64例),選擇同期病理確診為婦科良性病變患者79例為對照組。檢測并分析EMT組、對照組患者血清及腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平的變化。結果 EMT組患者血清和腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平均高于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；且隨著r-AFS分期的增加,EMT Ⅲ～Ⅳ患者血清和腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論 EMT患者血清和腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α均明顯高表達,且隨著r-AFS分期的增加,患者血清和腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平均提高。

子宮內膜異位癥； 血清； 腹腔液

子宮內膜異位癥(endometriosis, EMT)指子宮內膜組織在子宮腔被覆內膜及子宮肌層以外的部位生長、浸潤及反復出血,形成結節(jié)或包塊,具有侵襲性和易復發(fā)等特點,臨床引起疼痛和不育等,是育齡期婦女常見婦科良性病變,其發(fā)病率為10%～15%,嚴重影響婦女身心健康和生活質量[1]。此病臨床表現(xiàn)多樣,早期診斷多困難,約25%病例無任何癥狀,僅在腹腔鏡或開腹手術時發(fā)現(xiàn),臨床上常引起誤診。研究[2]指出,EMT為一種血管生成依賴性疾病,內膜的種植過程是免疫應答異常、產生局部炎癥反應和新生血管的過程,患者血清和腹腔液中巨噬細胞的數(shù)量明顯增多,活性增強,分泌的細胞因子活性物質增加,且血清和腹腔液中CA125及TNF-α的濃度與正常人存在明顯差異。本研究探討EMT患者血清及腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平的變化及意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月至2015年1月在武漢大學中南醫(yī)院婦產科行腹腔鏡手術,術后均經病理證實為EMT的109例患者為EMT組,年齡23～44歲,平均(31±2)歲；體質量指數(shù)(BMI)平均為(22.9±2.5)kg/m2,平均生育次數(shù)為(2±1)次,盆腔手術史為(2±2)次；根據(jù)美國生育協(xié)會評分標準(r-AFS)進行分期,其中Ⅰ～Ⅱ期45例,Ⅲ～Ⅳ期64例。將r-AFⅠ～Ⅱ期45例分為EMT重癥組,Ⅲ～Ⅳ期64例為EMT輕癥組。另選取同期在我院行腹腔鏡手術治療,且術后病理確診為婦科良性病變女性患者79例為對照組,年齡23～47歲,平均(34±4)歲,BMI為(23.1±2.4)kg/m2；平均生育次數(shù)為(1±1)次,盆腔手術史為(1±1)次。兩組患者年齡、BMI、平均生育次數(shù)、盆腔手術史差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),均簽署知情同意書。

1.2 納入及排除標準

納入標準: 符合相關疾病的診斷標準；無嚴重肝腎疾??；平素月經規(guī)則；無子宮內膜癌；無盆腔炎；無其他嚴重腦部器質性病變。排除標準: 內分泌疾病者；近3個月內接受激素治療者；免疫疾病患者；子宮腺肌患者；代謝性疾病患者；子宮肌瘤患者；生殖道結核患者；卵巢癌患者；有其他嚴重精神疾病者；有酒精藥物濫用史。

1.3 方法

兩組患者均于術前空腹抽取外周靜脈血,常溫下靜置,離心半徑10cm,3000r/min,離心12min,取上清液置-80℃冰箱凍存待測。EMT組和對照組患者均在全身麻醉下行腹腔鏡手術,通過穿刺針或注射器直視下抽取子宮膀胱陷凹和子宮直腸陷凹腹腔液,常溫下靜置,離心半徑10cm,3000r/min,離心12min,取上清液置于-80℃冰箱凍存待測。

采用ELISA試劑盒檢測血清和腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的含量,操作嚴格按照說明書進行。檢測在相同實驗條件下完成,均使用同一批試劑。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結 果

2.1 EMT組與對照組患者血清CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

EMT組患者血清CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平均顯著高于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表1。

表1 EMT組與對照組患者血清CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

2.2 EMT組與對照組患者腹腔液CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

EMT組患者腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平均顯著高于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表2。

2.3 不同疾病分期EMT患者血清CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

EMT Ⅲ～Ⅳ期患者血清CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期患者,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表3。

2.4 不同疾病分期EMT患者腹腔液CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

EMT Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期患者,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表4。

表2 EMT組與對照組患者腹腔液CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

表3 不同疾病分期EMT患者血清CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

表4 不同疾病分期EMT患者腹腔液CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平

3 討 論

EMT為育齡期婦女婦科常見疾病，臨床表現(xiàn)為盆腔慢性疼痛、不孕等，有侵襲性生長、反復發(fā)作及轉移等特點，嚴重影響婦女的身心健康，其發(fā)病機制目前還未完全闡明，主要與經血逆流種植學說、靜脈和淋巴播散學說、免疫學說等[3-4]。研究[5]發(fā)現(xiàn)，逆流經血中的子宮內膜細胞能夠成功異位種植和存活，與腹腔免疫功能紊亂、炎性細胞因子分泌增加及盆腔內無菌性炎癥反應增強有關。EMT患者血清和腹腔液中多種細胞因子參與機體的免疫調節(jié)功能，降低了對異位免疫的監(jiān)視，促進血管生成，導致異位內膜的種植與生長。研究表明，異位內膜本身及其周圍組織血液供應的建立和維持是EMT的發(fā)病基礎。目前已發(fā)現(xiàn)許多肽類生長因子以自分泌或旁分泌形式促進血管內皮細胞增殖與分化，誘導新生血管形成，而EMT患者異位內膜上血管內皮細胞增生活躍，細胞因子水平明顯增高。正常腹腔液中存在大量巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞等，其中巨噬細胞占90%以上，異位內膜可激發(fā)機體產生相應細胞免疫及體液免疫，導致腹腔液中巨噬細胞數(shù)量增加，活化程度增強，被激活的單核巨噬細胞產生大量的細胞因子，參與機體炎癥反應與抗感染作用。

VEGF主要由腹腔內活化的巨噬細胞分泌，是目前發(fā)現(xiàn)特異性最高、作用最強的促血管生成因子，在血管生成、炎癥反應及組織重構中起重要作用。在EMT的發(fā)生發(fā)展中，VEGF與血管內皮細胞表面特異性受體結合，促進毛細血管增生，為異位的腺上皮細胞提供營養(yǎng)支持，促進異位內膜的種植與生長[6]。本研究發(fā)現(xiàn)，EMT 患者血清和腹腔液中VEGF水平明顯高于對照組，隨著分期的增加，VEGF水平也相應升高，說明VEGF參與著EMT的發(fā)病過程，并與疾病的發(fā)展相關。比較腹腔液和血清中VEGF含量時發(fā)現(xiàn)， 腹腔液中VEGF 水平明顯高于血清中水平， 推測與EMT 多發(fā)生在腹腔有關，腹腔微環(huán)境改變與EMT 發(fā)病及嚴重程度相關。

CA125是一種高分子糖蛋白，存在于胚胎體腔上皮，在子宮內膜、子宮頸管內膜及腹膜、胸膜組織中均可檢測出[7-8]。血清CA125是上皮性卵巢腫瘤的標志物，與子宮內膜異位癥密切相關。在本研究中，EMT組血清和腹腔液中CA125水平均高于對照組，隨著分期的增加，CA125水平也相應升高，說明CA125參與EMT的發(fā)病過程。

當子宮內膜種植入腹腔時,常引起局部炎癥環(huán)境,導致局部免疫功能減弱,不能清除逆流的內膜碎片,從而引發(fā)腹腔液中炎癥反應。在此過程中，巨噬細胞等分泌的多種細胞因子分如IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等濃度增高。

IL-1家族包括IL-1α、IL-1β及IL-1Ra，其中IL-1β多出現(xiàn)在血循環(huán)中，促進免疫應答,參與炎癥反應。IL-6 可由表皮細胞和單核巨噬細胞表達，在機體免疫調節(jié)、炎癥反應及組織修復過程中起重要作用。IL-8 可由巨噬細胞、內皮細胞等多種細胞分泌，具有多重作用，既可介導炎癥反應過程，亦可誘導內皮細胞增殖和遷移，促進血管生成。腹膜間皮細胞和異位內膜間質細胞可合成IL-8 并大量釋放入腹腔液中；在腹腔炎癥環(huán)境中， 巨噬細胞亦可大量釋放IL-8，IL-8 的高表達可誘導異位內膜基底部毛細血管的形成， 進而誘導異位內膜的增殖和浸潤。IL-8可在EMT 機體子宮內膜中高表達，當經血逆流至腹腔，子宮內膜中的IL-8 可被帶至腹腔，進一步提高腹腔液中IL-8 的含量[9]。TNF-α是一種由中性粒細胞、活化的淋巴細胞、巨噬細胞、NK 細胞分泌的多功能的細胞因子，它參與多種生理和免疫過程，具有抗腫瘤、免疫調節(jié)、炎癥介導、細胞毒性、細胞凋亡等作用。越來越多的證據(jù)表明，免疫功能在子宮內膜異位癥的發(fā)病和發(fā)展中扮演著重要的角色。TNF-α的雙重生物學活性使得它在正常情況下具有抗腫瘤、抗感染等作用，對機體有利，但釋放過多或與其他細胞因子的關系失調時又會引起機體一系列病理損傷，參與疾病的發(fā)病機制[10]。在本研究中，EMT組血清和腹腔液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平均高于對照組，隨著分期的增加，IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平也相應升高，說明IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α參與EMT的發(fā)病過程。

目前，腹腔鏡檢查是診斷EMT的“金標準”，但因其存在的有創(chuàng)傷、價格昂貴、手術并發(fā)癥等缺點，無法普及，同時對一些盆腔重度粘連的患者，腹腔鏡檢查也效果不佳。經陰道超聲僅對卵巢子宮內膜異位囊腫有較高的檢出率，對于盆腔子宮內膜異位癥、盆腔粘連及深度浸潤型子宮內膜異位癥檢出率不高。且目前沒有一種腫瘤標志物可作為早期診斷子宮內膜異位癥的獨立指標，因此尋求更多的聯(lián)合檢測指標成為新的研究方向。所以，探討EMT患者血清及腹腔液中CA125、VEGF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平的變化及意義， 同時參考病史、臨床癥狀、體征及其他輔助檢查方法，可以為早期發(fā)現(xiàn)并診斷EMT提供新的思路。

本研究病例數(shù)較少，一定程度上可能影響研究的結果和精確性。同時，沒有分析各種指標聯(lián)合檢測的靈敏性和特異性，需要將來進一步的深入研究。

[1] Ozkan S, Murk W, Arici A. Endometriosis and infertility: epidemiology and evidence-based treatments[J]. Ann N Y Acad Sci, 2008,1127: 92-100.

[2] Borrelli GM, Abr?o MS, Mechsner S. Can chemo-kines be used as biomarkers for endometriosis? A systematic review[J]. Hum Reprod, 2014,29(2): 253-266.

[3] 王菲菲,龔曄晟,張潔瓊.子宮內膜異位癥患者血清和腹腔液中VEGF、IL-6、IL-8的表達情況及臨床意義[J].北京醫(yī)學,2015,37(2): 138-141.

[4] 馬美紅,王輝.子宮內膜異位癥患者血清和腹腔液中腫瘤壞死因子及血管內皮生長因子水平的變化及意義[J].實用婦產科雜志,2009,25(4): 223-226.

[5] 王志紅,申愛榮.子宮內膜異位癥不孕癥患者血清和腹腔液中CA125和抗轉鐵蛋白抗體水平[J].中國婦幼保健,2013,28(4): 652-654.

[6] Chang KK, Liu LB, Jin LP, et al. NME1 suppression of endometrial stromal cells promotes angiogenesis in the endometriotic milieu via stimulatingthe secretion of IL-8 and VEGF[J] Int J Clin Exp Pathol, 2013,6(10): 2030-2038.

[7] 侯淑萍,韓克.子宮內膜異位癥患者EMAb、TNF-α、IL-8和CA-125水平的相關研究[J].放射免疫學雜志,2006,29(3): 169-171.

[8] 王志紅,申愛榮.子宮內膜異位癥不孕癥患者血清和腹腔液中CA125和抗轉鐵蛋白抗體水平測定[J].鄭州醫(yī)科大學學報: 醫(yī)學版,2011,46(1): 74-76.

[9] 朱琳,顏士杰,沙玉成.血清和腹腔液中CA125、TNF-α與子宮內膜異位癥患者的相關性研究[J].中國婦幼保健,2014,29(8): 1196-1198.

[10] 范玉香.VEGF、IL-6、IL-8在子宮內膜異位癥患者血清和腹腔液的表達及意義[J].海南醫(yī)學院學報,2015,21(11): 1525-1527.

CA125 and cytokines levels in serum and peritoneal fluid of patients with endometriosis

CAOWei-li,CHENHong

(Dept. of Obstetrics and Gynecology, Zhongnan Hospital, Wuhan University, Wuhan 430071, Hubei Province, China)

Objective To investigate the CA125 and cytokines levels in serum and peritoneal fluid of patients with endometriosis (EMT), and their clinical significance. Methods One hundred and nine EMT patients, including 45 cases of stage Ⅰ-Ⅱ and 64 cases of stage Ⅲ-Ⅳ were enrolled from 2011 January to 2015 August; 64 patients with benign gynecological diseases were also enrolled as control group. The levels of CA125, VEGF, IL-1β, IL-6, IL-8 and TNF-α in serum and peritoneal fluid were measured by ELISA method. Results The levels of CA125, VEGF, IL-1β, IL-6, L-8 and TNF-α in serum and peritoneal fluid of EMT patients were significantly higher than those in control group(allP<0.05). The level of CA125, VEGF, IL-1β, IL-6, L-8 and TNF-α in serum and peritoneal fluid of EMT Ⅲ-Ⅳ group were significantly higher than those in EMT Ⅰ-Ⅱ group(allP<0.05). Conclusion The levels of CA125, VEGF, IL-1β, IL-6, L-8 and TNF-α in serum and peritoneal fluid are increased in EMT patients and the levels are increasing with the disease stages.

endometriosis; serum; peritoneal fluid

10.16118/j.1008-0392.2016.01.018

2015-10-15

曹偉麗(1984—),女,主治醫(yī)師,學士.E-mail: 2544944770@qq.com

陳 紅.E-mail: chen.hong888@126.com

R 711.71

A

1008-0392(2016)01-0085-04