β-環(huán)糊精對丹酚酸B腸黏膜透過性的促進(jìn)作用研究*

劉曉雷，張 莉，劉志東，劉 洋，胡利民，張 煒（.天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，天津 009；.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津 009；.武安市第一人民醫(yī)院，武安 05600）

?

β-環(huán)糊精對丹酚酸B腸黏膜透過性的促進(jìn)作用研究*

劉曉雷1，張 莉1，劉志東1，劉 洋2，胡利民1，張 煒3
（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津 300193；3.武安市第一人民醫(yī)院，武安 056300）

摘要：［目的］擬用β-環(huán)糊精為促滲劑提高丹酚酸B透過腸黏膜的能力，以及考察不同質(zhì)量濃度β-環(huán)糊精對丹酚酸B腸黏膜透過性的促進(jìn)作用。［方法］選擇大鼠的十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸為考察腸段，用Ussing chamber技術(shù)考察丹酚酸B溶液及添加β-環(huán)糊精促滲劑的丹酚酸B溶液分別在4個腸段的透過情況。［結(jié)果］β-環(huán)糊精能明顯提高丹酚酸B在十二指腸、空腸、回腸3個腸段的透過性；180 min后β-環(huán)糊精組的腸段的電阻降為初始電阻值的65%；質(zhì)量濃度為0.13%的β-環(huán)糊精促滲效果優(yōu)于質(zhì)量濃度0.65%、1.3%的β-環(huán)糊精的促滲效果。［結(jié)論］β-環(huán)糊精能夠提高丹酚酸B透過腸黏膜的能力，這可能與β-環(huán)糊精能夠打開細(xì)胞間緊密連接有關(guān)系；當(dāng)β-環(huán)糊精的濃度從0.13%升到1.3%，丹酚酸B的表觀滲透系數(shù)隨著濃度升高而減小，其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

關(guān)鍵詞：丹酚酸B；尤斯灌流池；腸吸收；促滲劑

丹參多酚酸是由丹參中提取的各種丹酚酸的混合物。丹酚酸B為丹參多酚酸中主要的有效成分，活性最強(qiáng)，含量最高（約占60%），經(jīng)證實(shí)其具有多方面的藥理活性［1-2］，但其腸道透過性差，是造成其生物利用度低的主要原因［3］。

環(huán)糊精可以通過降低細(xì)胞質(zhì)膜的膽固醇的量，影響細(xì)胞間的緊密連接蛋白，從而打開緊密連接處的緊密連接，來促進(jìn)藥物吸收［4］。故本文擬用β-環(huán)糊精為促滲劑以期提高丹酚酸B透過腸黏膜的能力。

1 實(shí)驗(yàn)儀器、材料和動物

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 尤斯灌流室（美國生理儀器公司，其中數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)為ADInstraments Pty Ltd）；高效液相系統(tǒng)紫外檢測器（島津，型號：SPD-20A）；Milli-Q超純水系統(tǒng)（Milli-pore，美國）；水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，DKB-501A）；Deltta 320 pH計（Mettler Toledo，瑞士）；高速冷凍離心機(jī)（Hettich Mikro 220RS/N）；震動攪拌器（金怡XH-C）；分析天平（METTLER TOLEDO XS 205（max. 81 g/220 g，d= 0.01 mg/0.1 mg））；移液器（eppendorf 1000，100 μL）。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 丹參多酚酸凍干粉針劑（天士力集團(tuán)，批號：20121101）；丹酚酸B對照品（天津一方科技有限公司，98%）；β-環(huán)糊精（安徽山河藥輔）；乙腈、甲醇（天津市康科德科技有限公司，色譜純）；甲酸（色譜純，美國MREDA公司，批號：220120）；無水磷酸二氫鈉（天津化學(xué)制劑公司，分析純）；磷酸二氫鉀、葡萄糖（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）；水合氯化鈣、氯化鈉、氯化鉀、碳酸氫鈉、氯化鎂（天津市化學(xué)試劑批發(fā)公司，分析純）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動物 健康SD大鼠，雄性，大鼠體質(zhì)（250± 10）g，飼養(yǎng)于動物房，動物室溫度：（25±2）℃，相對濕度：（50±2）℃，由北京華阜康生物科技有限公司（質(zhì)量檢測單位：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究所），合格證號：SCXK（京）2014-0004，相關(guān)研究遵照動物實(shí)驗(yàn)原則進(jìn)行。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 溶液配置

2.1.1 K-R液配置 K-R液由：117 mmol/L NaCl，4.7 mmol/L KCl，1.2 mmol/L MgCl2，1.2 mmol/L NaH2PO4，25 mmol/L NaHCO3，2.5 mmol/L CaCl2，11 mmol/L葡萄糖組成。配制時，先制作KCl，CaCl2，MgCl2，NaHPO4的20倍濃度的儲備溶液，使用時再稀釋加NaCl，NaHCO3和葡萄糖制備而成。給此溶液通氣（95%O2和5%CO2的混合氣體）15 min，氧氣飽和pH值變?yōu)?.2～7.4［5］。儲備溶液可以在冰箱中保存1個月。

2.1.2 藥物溶液配置 將供試液分為4組，分別為丹酚酸B溶液組和加入低、中、高濃度β-環(huán)糊精的丹酚酸B組。稱取12.17 mg丹參多酚酸溶于30 mL去離子水即得200 μg/mL丹酚酸B供試液；稱取12.17 mg丹參多酚酸和38.4 mg β-環(huán)糊精溶于30 mL去離子水即得低濃度促滲劑供試液（β-環(huán)糊精質(zhì)量濃度為0.13%）組；稱取12.17 mg丹參多酚酸和192 mg β-環(huán)糊精溶于30 mL去離子水即得中濃度促滲劑供試液（β-環(huán)糊精質(zhì)量濃度為0.65%）組；稱取12.17 mg丹參多酚酸和384 mg β-環(huán)糊精溶于30 mL去離子水即得高濃度促滲劑供試液（β-環(huán)糊精質(zhì)量濃度為1.3%）組。

2.2 大鼠腸段的選擇及腸黏膜的剝離 雄性SD大鼠，禁食16～18h后，3%戊巴比妥鈉腹腔注射（12 mL/kg）麻醉，選擇小腸（十二指腸、空腸、回腸）以及結(jié)腸為考察腸段。沿腹中線打開腹腔，自幽門1 cm處往下10 cm止為十二指腸，自幽門15 cm處往下10 cm止為空腸，從盲腸上行20 cm開始往上10 cm止為回腸，盲腸下2 cm去除，接著的6 cm為結(jié)腸。用生理鹽水清洗實(shí)驗(yàn)?zāi)c段，迅速置入K-R緩沖液中冰浴培養(yǎng)5 min，每部分實(shí)驗(yàn)?zāi)c段分別剪取7～9 cm長的部分，迅速剝離并去除漿膜側(cè)的漿膜層，將已剝除漿膜層的同腸段腸黏膜分為兩組固定在樣品夾中，一組夾在丹酚酸B溶液組灌流池中，另一組夾在含β-環(huán)糊精促滲劑的灌流池中，擴(kuò)散室的有效面積為0.5 cm2［6］。

2.3 尤斯灌流室實(shí)驗(yàn)

2.3.1 尤斯灌流室系統(tǒng)組成 尤斯灌流池系統(tǒng)主要由三部分組成：尤斯室、電壓電流鉗、數(shù)據(jù)采集與分析系統(tǒng)。另外有配套系統(tǒng)：包括恒溫水浴箱、5% CO2+95%O2混合氣體循環(huán)系統(tǒng)等［7］。恒溫水浴箱的技術(shù)參數(shù)，功耗為1 kW，水泵流速為6 L/min，恒溫波動小于0.5℃。尤斯室見圖1。

圖1 尤斯灌流室示意圖Fig.1 Schematic diagram of Ussing chamber

2.3.2 尤斯灌流室系統(tǒng)操作 K-R溶液電阻調(diào)零后（消除溶液電阻對腸組織的影響）根據(jù)分組情況，黏膜側(cè)為給藥側(cè)，加入5 mL相應(yīng)藥物供試液，漿膜側(cè)為接收側(cè)加入5 mL K-R緩沖液。其中1、3、5、7通道加入丹酚酸B溶液，2、4、6、8通道加入含促滲劑β-環(huán)糊精的丹酚酸B溶液。擴(kuò)散池的兩邊均通入混合氣體（95%O2，5%CO2），并于37.5℃水浴恒溫維持腸黏膜的生物活性。加入藥物溶液和K-R緩沖液后，需要10～15 min使電生理參數(shù)穩(wěn)定下來，電生理參數(shù)穩(wěn)定下來后開始計時［8］，并每隔30 s給腸段一個間隔0.2 s，強(qiáng)度為5 mV的刺激。分別在開始計時后的30、60、90、120、150、180 min時，于接收側(cè)取樣0.5 mL，同時立即補(bǔ)充等溫度等體積的K-R緩沖液。取得的0.5 mL樣品于13 000 r/min離心15 min，取上清液，HPLC測定藥物。

2.4 數(shù)據(jù)處理 單位面積累積透過量Qtn可由下式求算：

其中，ρtn為設(shè)計時間點(diǎn)擴(kuò)散池接收側(cè)的藥物質(zhì)量濃度；0.5和5分別表示取樣體積（mL）和加入的藥物供試液的體積（mL）。

表觀滲透系數(shù)Papp計算公式為：

Papp=（dQ/dt）×（1/A·ρ0），單位：cm/s

其中dQ/dt表示穩(wěn)態(tài)時，時間-累積透過量線性回歸所得的斜率；A為有效滲透面積（0.5 cm2），ρ0為加入給藥側(cè)初始藥物供試液的質(zhì)量濃度。

采用SPSS 18.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用單因素方差和t-檢驗(yàn)的方法來比較。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 分析方法建立

3.1.1 色譜條件 Agilent ZORBAX SB-C18（5 μm，4.6×150 mm）色譜柱，流動相為有機(jī)相為乙腈-甲醇（5∶2），水相為0.2%甲酸水，有機(jī)相與水相比例為35∶65（V∶V），流速為1.0 mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為288 nm，進(jìn)樣量為20 μL。

3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密稱取丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)品（1.64mg）溶于100mL容量瓶，得到濃度為16.4μg/mL的母液，母液吸取5～10 mL容量瓶得到8.2 μg/mL對照品溶液，母液吸取10～100mL容量瓶得到1.64μg/mL，母液吸取2～50 mL容量瓶得到0.656 μg/mL對照品溶液，母液吸取1～100 mL容量瓶得到0.164 μg/mL對照品溶液。按照上述色譜條件，進(jìn)樣20 μL，記錄峰面積，以樣品色譜峰面積A對濃度C（μg/mL）進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為C=1.664 6×104A-7.630 3×102，r=0.999 9，丹酚酸B在0.164～16.4 μg/mL范圍內(nèi)線性良好［9］。

3.1.3 專屬性考察 分別取丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)品溶液、空白腸液、β-環(huán)糊精溶液進(jìn)樣，在上述色譜條件下分別測定，色譜圖見圖2。

圖2 HPLC色譜圖Fig.2 HPLC chromatogram

由圖2可知，空白腸液和β-環(huán)糊精在此色譜條件下對丹酚酸B測定無干擾。

3.1.4 精密度考察 選取8.200、1.640、0.656 μg/mL 3個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，于1天內(nèi)重復(fù)測定5次，計算日內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差；連續(xù)測定3天，計算日間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。實(shí)驗(yàn)結(jié)果，日內(nèi)、日間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于3%，精密度符合方法學(xué)要求。結(jié)果見表1。

表1 丹酚酸B日內(nèi)及日間精密度（±s）Tab.1 The intra-day and inter-day precision of salvianolic acid B（±s）

表1 丹酚酸B日內(nèi)及日間精密度（±s）Tab.1 The intra-day and inter-day precision of salvianolic acid B（±s）

濃度（μg/mL） （μg/mL） RSD% 平均值（μg/mL） RSD%日內(nèi)精密度 日間精密度平均值0.656 1.640 8.200 n 5 5 5 0.656±0.06 1.12 0.656±0.12 2.30 1.640±0.19 1.68 1.640±0.22 1.14 8.200±0.44 1.31 8.200±0.48 1.23

3.1.5 回收率考察 取8.200、1.640、0.656μg/mL 3個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液各1份，用HPLC法測定丹酚酸B的濃度，測定方法回收率。結(jié)果見表2。

表2 丹酚酸B回收率Tab.2 The recovery of salvianolic acid B±s

表2 丹酚酸B回收率Tab.2 The recovery of salvianolic acid B±s

濃度（μg/mL）0.656 1.640 8.200 n 5 5 5回收率% 平均值（±s，%）RSD （%）1 2 3 4 5 100.20 100.15 100.22 100.10 99.98 100.88±1.10 1.11 103.16 103.82 99.98 102.17 102.66 101.82±1.83 1.78 101.36 98.71 101.56 102.11 103.13 100.05±1.25 1.24

3.1.6 丹酚酸B在不同介質(zhì)下的穩(wěn)定性 考察丹酚酸B于12 h內(nèi)在K-R試液中的穩(wěn)定性，結(jié)果見表3。

表3 丹酚酸B在不同介質(zhì)中的穩(wěn)定性Tab.3 The stability of salvianolic acid B in different mediums

結(jié)果顯示，12 h后丹酚酸B僅為初始濃度的55.77%。查文獻(xiàn)可知［10］，丹酚酸B在酸性介質(zhì)中穩(wěn)定，加入濃度為1‰的維生素C之后，12 h后的濃度為初始濃度的91.77%，丹酚酸B比較穩(wěn)定，滿足實(shí)驗(yàn)要求。

3.2 β-環(huán)糊精對丹酚酸B促滲作用

3.2.1 累積透過量比較 灌流池的1、3、5、7通道加入200 μg/mL丹酚酸B溶液，2、4、6、8通道加入β-環(huán)糊精濃度為0.13%的丹酚酸B溶液。兩組溶液在十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸的累積透過量結(jié)果如圖3所示。

如圖3所示，添加促滲劑β-環(huán)糊精（β-環(huán)糊精濃度為0.13%）的丹酚酸B溶液組與丹酚酸B溶液組（丹酚酸B濃度為200 μg/mL）比較，在十二指腸、空腸、回腸3個腸段的累積透過量（n=4）都有明顯提高。但是，添加β-環(huán)糊精組在結(jié)腸的累積透過量比正常丹酚酸B溶液組低。

3.2.2 表觀滲透系數(shù)（Papp）比較 丹酚酸B溶液組與添加β-環(huán)糊精的丹酚酸B溶液組在十二指腸、空腸、回腸的表觀滲透系數(shù)見圖4。

由圖4可知，添加β-環(huán)糊精（質(zhì)量濃度0.13%）的丹酚酸B組在十二指腸、空腸、回腸的表觀滲透系數(shù)均比丹酚酸B溶液組高，而結(jié)腸的結(jié)果相反。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丹酚酸B在4個腸段的透過情況為，以Papp值表示（cm/s）：Papp十二指腸（1.46±1.60）×10-6＜Papp空腸（1.74±1.30）×10-6＜Papp回腸（2.28±0.97）×10-6＜Papp結(jié)腸（3.50±2.00）×10-6，結(jié)果與文獻(xiàn)［11］報道相一致。

圖3 丹酚酸B累積透過量曲線（±s，n=4）Fig.3 The cumulated amount curve of salvianolic acid B （±s，n=4）

3.2.3 電阻變化率比較 緊密排列的上皮細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)組成上皮組織，其具有極性和緊密連接［7］。其中，緊密連接的形狀和滲透性能夠決定上皮組織的完整性及對物質(zhì)的跨細(xì)胞電阻（TEER）［12］。初始電阻值為沒加供試液之前腸段穩(wěn)定下來的電阻值，丹酚酸B溶液組與添加β-環(huán)糊精的丹酚酸B溶液組的電阻變化率見圖5。

圖4 丹酚酸B在不同腸段的表觀滲透系數(shù)（±s，n=4）Fig.4 The apparent permeability coefficient of salvianolic acid B in different intestine segments（±s，n=4）

圖5 腸段電阻變化率（±s，n=4）Fig.5 The resistance change rates of intestinal segments （±s，n=4）

如圖5所示，180 min后加丹酚酸B溶液組的腸段的電阻基本上沒變化，為初始電阻值的90%去。而加β-環(huán)糊精組的腸段的電阻降為初始電阻值的65%。組織阻抗的降低可能與β-環(huán)糊精能作用于緊密連接蛋白，打開細(xì)胞旁路有關(guān)系［4］。

3.2.4 不同濃度促滲劑對丹酚酸B促滲作用比較

丹酚酸B溶液組與低（0.13%）、中（0.65%）、高（1.3%）濃度β-環(huán)糊精促滲劑組的表觀滲透系數(shù)比較，結(jié)果見圖6。

比較丹酚酸B溶液組與低（0.13%）、中（0.65%）、高（1.3%）濃度β-環(huán)糊精促滲劑組的表觀滲透系數(shù)發(fā)現(xiàn)［13］，β-環(huán)糊精促滲劑的質(zhì)量濃度與促滲效果并非呈正比關(guān)系，當(dāng)β-環(huán)糊精的濃度從0.13%升到1.3%，丹酚酸B的表觀滲透系數(shù)隨著β-環(huán)糊精濃度升高而降低。質(zhì)量濃度為0.13%的β-環(huán)糊精促滲效果優(yōu)于質(zhì)量濃度0.65%、1.3%的β-環(huán)糊精的促滲效果，甚至當(dāng)β-環(huán)糊精濃度到1.3%時對于丹酚酸B溶液基本上沒有促滲作用，機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

圖6 不同濃度促滲劑對丹酚酸B促滲作用（±s，n=4）Fig.6 Penetration effects of different concentrations of penetration enhancers on Salvianolic acid B（±s，n=4）

4 討論

4.1 丹酚酸B在K-R液中的穩(wěn)定性 用恒溫加速法考察了丹酚酸B在不同pH緩沖液下的穩(wěn)定性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)丹酚酸B在pH=1～7范圍內(nèi)，酸性越強(qiáng)，穩(wěn)定性越好［10］。本實(shí)驗(yàn)采用K-R試液，pH在7～8之間，在此實(shí)驗(yàn)條件下丹酚酸B的含量會下降，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成干擾。據(jù)報道，維生素C是一種水溶性維生素，水溶液呈酸性，而且是一類強(qiáng)抗氧化劑，具有保護(hù)其它抗氧化劑的作用［14］。因此，在K-R溶液中加入濃度為1‰的維生素C，使丹酚酸B在K-R中相對穩(wěn)定，滿足實(shí)驗(yàn)要求。

4.2 促滲方法的選擇 使用以打開緊密連接為機(jī)理的促滲劑時必須謹(jǐn)慎，由于促滲劑在體內(nèi)的濃度和釋放時間目前不可完全控制，因此可能在胃腸道某個部位中形成點(diǎn)狀腐蝕；另外，促滲劑加入體系中后，TJ處于松弛狀態(tài)，通道變寬至0.5～3 nm，在此情況下，細(xì)菌、病毒或內(nèi)源性毒素可能透過防御體系進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)。據(jù)報道，利用幾種促滲劑的聯(lián)合使用，或具有穩(wěn)定增溶或復(fù)合作用的輔料與促滲劑聯(lián)合應(yīng)用的方法，通過各自不同的作用特點(diǎn)的兼顧，發(fā)生協(xié)同作用，這樣既有利于減少藥品用量或者降低毒副作用，也有利于制劑的設(shè)計［15］。后期研究中可考慮兩種促滲劑聯(lián)用以期促進(jìn)丹酚酸B在腸黏膜的透過性。

4.3 考察藥物腸吸收機(jī)制的方法選擇 近年來研究藥物腸吸收機(jī)制的方法主要有擴(kuò)散池法、單向灌流法、單層細(xì)胞模型法和翻轉(zhuǎn)腸囊法［16］。尤期室灌流技術(shù)是研究藥物在胃腸道吸收情況，常用的體外研究方法之一。此方法通過與循環(huán)水浴鍋相連的恒溫裝置來保持灌流室溫度，并且通過氣體通道向灌流室通入混合氣，從而最大程度的達(dá)到保持灌流室中離體組織的活性和完整性的作用。尤期室灌流方法彌補(bǔ)了以往研究中的一些缺陷，例如：使用Caco-2單層細(xì)胞模型法缺乏黏膜層的透過研究，而黏膜層為藥物主要吸收屏障之一；另外，翻轉(zhuǎn)腸囊法容易影響通透性，在翻轉(zhuǎn)腸囊后較易造成細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變［17］。此外，尤期室灌流方法可以分別考察藥物在不同特定腸段的吸收和透過情況，并且通過對腸段的漿膜層進(jìn)行剝離，與藥物在腸部的吸收情況更接近，因此該模型常用于考察促滲劑作用的部位差異及篩選促滲劑種類［18］。

4.4 電生理參數(shù)測量結(jié)果討論 尤期室灌流對電生理參數(shù)測量結(jié)果表明，以未加供試液之前腸段的穩(wěn)定電阻值為初始電阻值，180 min后，加丹酚酸B溶液組的腸段的電阻基本上沒變化，為初始電阻值的90%。而加β-環(huán)糊精組的腸段的電阻值降為初始電阻值的65%。此種組織阻抗降低的現(xiàn)象產(chǎn)生的原因可能與β-環(huán)糊精能作用于緊密連接蛋白，打開細(xì)胞旁路有關(guān)系。據(jù)報道，細(xì)胞間緊密連接在小腸中分布面積較小，只占整個小腸面積的0.1%，因此實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，組織阻抗的降低幅度并不是很大［15］。

4.5 不同質(zhì)量濃度促滲劑的促滲作用考察 在本實(shí)驗(yàn)中，促滲劑的質(zhì)量濃度與促滲效果并非呈簡單的正比關(guān)系，丹酚酸B的表觀滲透系數(shù)隨著β-環(huán)糊精濃度升高而降低，當(dāng)促滲劑濃度超過一定值時，促滲效果反而差，目前此機(jī)制尚不明確。分析其原因可能是當(dāng)β-環(huán)糊精的質(zhì)量濃度較低時，促滲作用占主導(dǎo)作用；當(dāng)β-環(huán)糊精質(zhì)量濃度增加到一定程度時，由于β-環(huán)糊精自身能作用于緊密連接蛋白，打開細(xì)胞旁路，因此，β-環(huán)糊精通過細(xì)胞旁路吸收，與藥物吸收形成競爭，當(dāng)這種競爭作用占主導(dǎo)作用時，反而使藥物透過量降低［19］，此推論仍需進(jìn)一步驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)：

［1］于金玲.丹酚酸B藥理作用研究進(jìn)展［J］.天津藥學(xué)，2012，24（3）：64-68.

［2］劉嘉，李俊松，狄留慶，等.丹酚酸B及其磷脂復(fù)合物在SD大鼠的生物利用度研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2010，45（18）：1408-1401.

［3］朱金墻，閆晨，康立源.丹酚酸B的穩(wěn)定性及其降解機(jī)理研究進(jìn)展［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2010，17（12）：113-115.

［4］徐曉琰，惲菲，狄留慶，等.環(huán)糊精包合藥物胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)過程及機(jī)制研究進(jìn)展［J］.中草藥，2012，43（10）：2062-2065.

［5］Cardinali A，Rotondo F，Minervini F，et al. Assessment of verbascoside absorption in human colonic tissues using the Ussing chamber model［J］. Food Research International，2013，54（1）：132-138.

［6］趙博欣，孫亞彬，段 煉，等.應(yīng)用Ussing Chamber技術(shù)評價芹菜素與柚皮素經(jīng)大鼠腸黏膜透過特征［J］.中國藥學(xué)雜志，2011，46 （20）：1581-1586.

［7］孫志洪，賀志雄，張慶麗，等.尤斯灌流系統(tǒng)在動物胃腸道屏障及營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)中的應(yīng)用［J］.動物營養(yǎng)學(xué)報，2010，22（3）：511-518.

［8］黎國富，楊勁，華小懿，等. Ussing Chamber模型研究甘草酸二銨經(jīng)大鼠腸黏膜的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝［J］.中國中藥雜志，2010，35（17）：2261-2266.

［9］郭秀君，劉志東，黃瑜，等.丹酚酸B立方液晶納米粒的制備及大鼠在體腸吸收［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2014，33（4）：177-180.

［10］張春光，崔翰明，張秋燕，等.丹參提取物中的丹酚酸B在不同pH條件下的穩(wěn)定性研究［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，15（1）：3-5.

［11］劉睿，劉志東，張伯禮，等.丹酚酸B大鼠在體腸吸收研究［J］.中國新藥雜志，2008，17（10）：852-854+860.

［12］劉曉雷，張莉，顧星，等. Ussing chamber技術(shù)在藥物腸吸收方面的應(yīng)用進(jìn)展［J］.中國新藥雜志，2015，24（6）：644-648.

［13］蔡文賀，林德貴.不同濃度氮酮、薄荷醇對鹽酸特比萘芬體外經(jīng)皮滲透作用的影響［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2009，40（8）：1249-1252.

［14］莫鳳奎，朱澄云，黃松鶴，等.維生素E和維生素C對大豆磷脂脂質(zhì)體的抗氧化作用［J］.中國藥物化學(xué)雜志，1997，7（2）：46-49.

［15］陳水娟.二甲基-β-環(huán)糊精和殼聚糖提高難溶性藥物BMCP25口服生物利用度研究［D］.上海：華東理工大學(xué)，2012.

［16］段煉.辣椒素的腸道轉(zhuǎn)運(yùn)特性與TRPV1通道及多藥耐藥蛋白間的關(guān)系［D］.廣州：南方醫(yī)科大學(xué)，2013.

［17］單進(jìn)軍，狄留慶，吳皓.口服吸收模型在中藥研究中的應(yīng)用進(jìn)展［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2007，23（4）：270-272.

［18］李光華.口服藥物吸收的研究進(jìn)展［J］.天津藥學(xué)，2014，26（2）：69-71.

［19］賈立華，付聰，丁橋蘭，等. DM-β-CD對鹽酸二氫埃托啡離體鼻黏膜滲透的影響［J］.中國新藥雜志，2007，16（7）：551-553.

（本文編輯：高 杉，張震之）

·國際交流·

Study on the effects of beta cyclodextrin on improving the permeability of salvianolic acid B passing through intestinal mucosa

LIU-Xiao lei1，ZHANG Li1，LIU-Zhi dong1，LIU Yang2，HU-Li min1，ZHANG-Wei3
（1.Institute of Chinese Medicine，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2. College of Traditional Chinese Medicine，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；3. First People’s Hospital in Wu’an，Wu’an 056300，China）

Abstract:［Objective］β-cyclodextrin was acted as enhancers to improve the permeability ability of salvianolic acid B passing through the intestinal mucosa. The study also discussed that the penetration enhancing effect of different concentrations of β-cyclodextrin on intestinal mucosal permeability of salvianolic acid B.［Methods］By Ussing chamber technology，duodenum，jejunum，ileum and colon of rats were selected for studying the permeability of salvianolic acid B solution and the addition of β-cyclodextrin in salvianolic acid B solution.［Results］The results showed that：β-cyclodextrin could improve the permeability of salvianolic acid B in duodenum，jejunum and ileum significantly. In 180 min，the resistance of intestine in β-cyclodextrin group was reduced to 65%of the initial resistance value. The promoting effect of 0.13%mass concentration of β-cyclodextrin was better than that of 0.65%and 1.3%mass concentration of βcyclodextrin.［Conclusion］β-cyclodextrin could improve the permeability of salvianolic acid B passing through the intestinal mucosa，which might be associated with the effect of β-cyclodextrin on opening of the intercellular tight junction proteins. When the concentration of β-cyclodextrin increased from 0.13%to 1.3%，the apparent permeability coefficient of salvianolic acid B decreased along with the increasing of β-cyclodextrin concentration. The mechanism would have to be further studied.

Key words:salvianolic acid B；ussing chamber；intestinal absorption；penetration enhancer

中圖分類號：R223.11

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1672-1519（2016）01-0047-06

DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2016.01.12

*基金項目：新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計劃（NCET-12-1068）。

作者簡介：劉曉雷（1989-），男，碩士研究生，主要從事緩控釋制劑研究。

通訊作者：劉志東，E-mail：lonerliuzd@163.com。

收稿日期：（2015-10-07）