宋洋，胡燕萍，王銳

(杭州市腫瘤醫(yī)院 外科，浙江 杭州 310000)

胃癌組織中NrF-2和Ho-1的表達(dá)及臨床意義

宋洋Δ，胡燕萍，王銳

(杭州市腫瘤醫(yī)院 外科，浙江 杭州 310000)

目的 研究胃癌組織中核因子E-2相關(guān)因子2(nuclear factor E-2 related factor，NrF-2)和血紅素氧合酶-1(heme oxygenase-1，Ho-1)的表達(dá)并探討其臨床意義。方法 選取從2016年2月～2016年6月，杭州市腫瘤醫(yī)院病理科存檔的人胃組織蠟塊176例，其中胃癌78例，正常組織78例。分別采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)2組人胃組織中NrF-2和Ho-1的表達(dá)情況并進(jìn)行分析。結(jié)果 胃癌組NrF-2和Ho-1水平分別為(0.752±0.098)、(0.862±0.081)，均顯著高于正常組的(0.381±0.068)、(0.412±0.083)；NrF-2、Ho-1陽(yáng)性表達(dá)率在胃壁侵犯程度為T(mén)3+T4、伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、NTM分期為Ⅲ、Ⅳ期胃癌組織中顯著增高，上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。結(jié)論 NrF-2和Ho-1在胃癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，且NrF-2、Ho-1在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與胃壁侵犯程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、NTM分期存在密切相關(guān)。提示了臨床診斷中若聯(lián)合檢測(cè)NrF-2和Ho-1，有利于對(duì)胃癌的早期診斷以及預(yù)后。

胃癌組織；核因子E-2相關(guān)因子2；血紅素氧合酶-1

胃癌是臨床上最為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，有研究報(bào)道表明，胃癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，且我國(guó)胃癌患者死亡率位居首位，嚴(yán)重危及人類生命健康安全[1]。由于胃癌在發(fā)病早期臨床癥狀并不典型，從而導(dǎo)致了臨床診斷的難度增加[2]，大部分患者一旦確診已進(jìn)入中晚期，就喪失了最佳的手術(shù)治療時(shí)機(jī)[3]。因此，通過(guò)提高臨床上對(duì)胃癌患者的早期診斷率對(duì)提高胃癌患者臨床治療效果及生活質(zhì)量具有極其重要的意義。鑒于此，本文通過(guò)研究胃癌組織中NrF-2和Ho-1的表達(dá)并探討其臨床意義,旨在為臨床對(duì)胃癌進(jìn)行早期有效的診斷尋找新的指標(biāo)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取從2016年2月～2016年6月，杭州市腫瘤醫(yī)院病理科存檔的人胃組織蠟塊176例，其中胃癌78例，正常組織78例。

1.2 方法 采用免疫組織化學(xué)法對(duì)2組NrF-2和Ho-1表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)：首先行常規(guī)切片，并將其表在免疫組化玻片上，放置在67 ℃的恒溫箱中保存一夜，第2天進(jìn)行脫蠟水化處理，并進(jìn)行抗原修復(fù)。隨后將切片置入80%甲醇溶液中持續(xù)孵育10 min左右，待到其內(nèi)源性過(guò)氧化物酶完全滅活后使用PBS溶液(濃度為0.1M，pH 7.2～7.4)進(jìn)行沖洗，所有切片均滴加適量稀釋(1:100)的兔抗人NrF-2和兔抗人Ho-1，置于4 ℃恒溫箱中過(guò)夜。次日使用PBS溶液進(jìn)行沖洗，3 min/次，共3次，滴加第二代生物素化二抗工作液，置于37 ℃濕漉盒內(nèi)進(jìn)行30 min的孵育，放置于顯微鏡下滴加配置好的顯色液，待顯色充分終止后使用自來(lái)水進(jìn)行沖洗。待上述步驟完成后使用蘇木素進(jìn)行染色，并加入乙醇進(jìn)行脫水，最后浸泡二甲苯透明，以PBS液替代一抗作陰性對(duì)照組，在顯微鏡(OLYMPUS BX51 日本)下進(jìn)行觀察、記錄。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織中NrF-2和Ho-1的表達(dá) 胃癌組織中NrF-2和Ho-1表達(dá)的免疫組化結(jié)果見(jiàn)圖1。胃癌組NrF-2和Ho-1水平均顯著高于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見(jiàn)表1。

圖1 正常胃組織與胃癌組織中NrF-2及Ho-1的表達(dá)(×200)Fig.1 Expressions of NrF-2 and Ho-1 protein in normal gastric tissue and gastric carcinoma(×200)

組別例數(shù)NrF?2Ho?1正常組780 381±0 0680 412±0 083胃癌組780 752±0 098?0 862±0 081?

*P<0.05，與正常組比較，compared with normal group

2.2 NrF-2在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)情況 NrF-2陽(yáng)性表達(dá)率在胃壁侵犯程度為T(mén)3+T4、伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、NTM分期為Ⅲ、Ⅳ期胃癌組織中中顯著增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 NrF-2在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)情況[n(%)]

2.3 Ho-1在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)情況 Ho-1陽(yáng)性表達(dá)率在胃壁侵犯程度為T(mén)3+T4、伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、NTM分期為Ⅲ、Ⅳ期胃癌組織中中顯著增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 Ho-1在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)情況[n(%)]

3 討論

胃癌是最為常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一[4]，在所有癌癥疾病中的病死率位居第二，其發(fā)生及發(fā)展主要涉及多種因素的共同作用、多種基因表達(dá)異常、多種因子相互影響的一個(gè)復(fù)雜過(guò)程[5]，這也就導(dǎo)致了臨床上通過(guò)對(duì)單一因子的檢測(cè)來(lái)對(duì)胃癌進(jìn)行早期診斷有很大的局限性[6]。因此，尋找一種有效的檢測(cè)手段不但可提供臨床對(duì)早期胃癌的診斷率，也有利于對(duì)胃癌高危人群的篩選，進(jìn)一步使得患者在疾病發(fā)展至中晚期前得到及時(shí)有效的診治，最終提高患者生活質(zhì)量及延長(zhǎng)生命。NrF-2屬于機(jī)體調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激平衡的一種重要轉(zhuǎn)錄因子，其主要在肝臟、消化道以及代謝性組織中表達(dá)[7]。而Ho-1主要作用機(jī)制是通過(guò)影響各種信號(hào)轉(zhuǎn)到通路、抗凋亡、抑制炎性因子表達(dá)、抗氧化應(yīng)激等一系列細(xì)胞分子，進(jìn)而達(dá)到抗血管重構(gòu)的作用[8]。通過(guò)對(duì)上述2種因子進(jìn)行檢測(cè)，或許可為臨床對(duì)胃癌早期診斷及治療尋找到新的指標(biāo)靶點(diǎn)。

本文通過(guò)研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃癌組NrF-2和Ho-1水平均顯著高于正常組。這提示了通過(guò)檢測(cè)NrF-2和Ho-1，或許能對(duì)胃癌患者進(jìn)行早期診斷及預(yù)后評(píng)估。同時(shí)也說(shuō)明了NrF-2與Ho-1可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要角色，臨床治療中若對(duì)NrF-2的表達(dá)進(jìn)行有效抑制，或許可顯著延緩或組織胃癌的發(fā)生、發(fā)展[9]。此外，NrF-2、Ho-1陽(yáng)性表達(dá)率在胃壁侵犯程度為T(mén)3+T4、伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、NTM分期為Ⅲ、Ⅳ期胃癌組織中顯著增高(均P<0.05)。這說(shuō)明了NrF-2和Ho-1的表達(dá)與胃癌胃壁侵犯程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期存在顯著相關(guān)性，說(shuō)明其可能是影響胃癌預(yù)后的因素之一。究其原因，筆者認(rèn)為HO-1主要分布在人體多種組織細(xì)胞中，且大部分細(xì)胞在生理狀態(tài)下均有少量表達(dá)，但胃腸道細(xì)胞除外。其中健康的胃腸道黏膜細(xì)胞中HO-1表達(dá)極少，只有當(dāng)胃腸黏膜發(fā)生病變是，其才會(huì)被大量誘導(dǎo)產(chǎn)生，從而對(duì)受損的胃腸黏膜進(jìn)行修復(fù)。而NrF-2屬于和轉(zhuǎn)錄因子家族的成員之一，其主要作用是保護(hù)細(xì)胞，避免其遭受應(yīng)激損傷。因此，在患者出現(xiàn)病變時(shí)，其表達(dá)也顯著提高[10]。另有研究報(bào)道表明，Ho-1的表達(dá)可能與癌組織周?chē)l(fā)生的一系列炎性反應(yīng)有關(guān)，其原因是由于癌旁組織產(chǎn)生的炎性細(xì)胞因子以及腫瘤病灶周?chē)眲〉挠坞x鐵離子等對(duì)Ho-1表達(dá)具有一定的刺激作用[11-12]。Ho-1對(duì)腫瘤組織具有明顯的保護(hù)作用，也為胃癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移提供了有利條件，臨床治療中可通過(guò)抑制其活性，提高對(duì)胃癌患者的治療效果。

綜上所述，對(duì)NrF-2和Ho-1進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，有利于臨床檢查中對(duì)胃癌高危人群進(jìn)行篩查，且對(duì)胃癌早期診斷及預(yù)后評(píng)估具有重要意義。

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(編校：王儼儼)

Expression and clinical significance of NrF-2 and Ho-1 in gastric carcinoma

SONG YangΔ, HU Yan-ping, WANG Rui

(Department of Surgery, HangzhouCancer Hospital in Zhejiang, Hangzhou 310000, China)

ObjectiveTo study nuclear factor E-2 related factor 2(NrF-2) and heme oxygenase -1(Ho-1) expression and to explore its clinical significance.MethodsFrom February 2016 to June 2016, 176 cases human gastric tissue paraffin blocks selected in department of pathology in Hangzhou Cancer Hospital, including 78 cases of gastric cancer, 78 cases of normal tissue were analyzed.And the expressions of NrF-2 and Ho-1 were detected by immunohistochemistry in two groups of human gastric tissue.ResultsThe levels of NrF-2 and Ho-1 in gastric cancer group were(0.752±0.098),(0.862±0.081) were significantly higher than those in normal group(0.381±0.068),(0.412±0.083); NrF-2, the positive expression rate of Ho-1 in gastric wall invasion degree of T3+T4 with lymph node metastasis, NTM stage III and IV gastric cancer tissues were significantly increased.The differences were statistically significant(P<0.05).ConclusionNrF-2 and Ho-1 play the important role in the development of gastric cancer and NrF-2, the positive expression rate of Ho-1 in the gastric carcinoma and gastric wall invasion, lymph node metastasis and NTM staging are closely related.The clinical diagnosis if the combined detection of NrF-2 and Ho-1, is conducive to the early diagnosis of gastric cancer and the prognosis of the disease.

gastric cancer tissue; nuclear factor E-2 related factor 2; heme synthase -1

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.09.042

宋洋，通信作者，男，本科，主治醫(yī)師，研究方向：甲狀腺、乳腺及肝膽胃腸外科，E-mail：y137138@139.com。

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