馬慧麗

石藥集團中諾藥業(yè)（石家莊）有限公司

肺動脈高壓藥物Selexipag含量及有關(guān)物的測定

馬慧麗

石藥集團中諾藥業(yè)（石家莊）有限公司

采用HPLC法測定Selexipag含量和有關(guān)物質(zhì)。色譜條件如下：色譜柱：Welchrom-C18色譜柱，檢測波長為251nm。結(jié)果表明：Selexipag在5～150.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為100.2%，RSD為0.61%。該法簡便、精密、專屬、靈敏，可用于測定Selexipag原料藥含量和有關(guān)物。

HPLC；Selexipag；有關(guān)物；含量

肺動脈高壓（pulmonary arterial hypertension，PAH）是一種罕見的慢性進(jìn)行性肺部疾病，預(yù)后不佳，患者通常身體衰弱，其后果是需進(jìn)行肺移植或者導(dǎo)致死亡［1］。2015年12月21日，Actelion公司的Selexipag（Uptravi）片劑獲美國FDA批準(zhǔn)上市，適用于肺動脈高壓的治療，并授予孤兒藥地位。Selexipag最初是由日本新藥株式會社發(fā)現(xiàn)并合成，Selexipag被羧酸酯酶1水解產(chǎn)生其活性代謝物，其活性強度約為selexipag的37倍［2，3］。本文作者采用高效液相色譜法（HPLC）測定Selexipag的含量及其有關(guān)物含量。

1　實驗

1.1試劑與儀器

Selexipag標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)口；Selexipag樣品，自制；乙腈，色譜純；水為自制純凈水；其它試劑均為分析純。

Agilent 1200高效液相色譜儀（美國Agilent公司）。

1.2方法

1.2.1色譜條件

色譜柱：Welchrom-C18色譜柱（4.6mm×200mm，5μm）；流動相：0.1mol/L磷酸氫二鈉溶液（磷酸調(diào)節(jié)pH至7.2）一乙腈（75：25）；流速為1.0mL/min；檢測波長為251nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣量為10μL。

1.2.2對照品溶液的配制

取Selexipag對照品約15mg，精密稱定，置50mL量瓶中，稀釋搖勻，作為對照品溶液。

1.2.3供試品溶液的配制

取Selexipag樣品約15mg，精密稱定，置50mL量瓶中，稀釋搖勻，作為含量測定用供試品溶液；取Selexipag樣品約25mg，精密稱定，同法配制，作為有關(guān)物質(zhì)檢查用供試品溶液。

1.2.4對照溶液的配制

精密量取0.5mL“1.2.3”項下有關(guān)物質(zhì)檢查用供試品溶液，置l00mL量瓶中，稀釋搖勻，作為有關(guān)物質(zhì)檢查對照溶液。

2　結(jié)果與討論

2.1系統(tǒng)適應(yīng)性

分別量取空白溶液、對照品溶液、供試品溶液，按“1.2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，主峰保留時間6.3min，拖尾因子為1.02，與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于2.0，理論塔板數(shù)按Selexipag峰計算不低于3000。

2.2專屬性考察

取10 mL“1.2.2”項下Selexipag對照品溶液分別加入1 mol/L氫氧化鈉溶液、1 mol/L鹽酸溶液、30%過氧化氫溶液各2 mL和100℃水浴加熱1 h。中和后加流動相至20 mL，分別進(jìn)樣10 μL，考察降解物的分離性能。經(jīng)酸、堿、高溫、氧化破壞后的降解物與主峰Selexipag均得到基線分離，表明方法的專屬性好。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密量取“1.2.2”項下Selexipag對照品溶液適量，加流動相稀釋制成濃度（μg/mL）分別為150.0、100.0、50.0、25.0、10.0、5.0系列溶液。按“1.2.1”項下色譜條件，各取10 μL進(jìn)樣測定，以峰面積（y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣濃度（x）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合得回歸方程y= 2596.6x+0.4212，R=1.0000（n=6）。結(jié)果表明：Selexipag在5～150.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，滿足含量測定及有關(guān)物質(zhì)檢查的線性要求。

2.4定量限與檢測限

按“1.2.1”項下色譜條件，配制Selexipag低濃度對照品溶液，逐步稀釋后，取10 μL注入高效液相色譜儀，按照信噪比10：1測得其定量限為0.080μg/mL，按照信噪比3：1測得其檢測限為0.030μg/mL。

2.5精密度

精密量取供試品溶液加流動相稀釋制成濃度為1.0 μg/mL的溶液。按“1.2.1”項下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，主成分峰面積的RSD為0.083%，相關(guān)物質(zhì)峰面積的RSD為1.6%。表明進(jìn)樣精密度良好。

2.6加樣回收率

量取“1.2.3”項下含量測定用供試品溶液9份，每份10 mL，按其濃度的80%、100%、120%分別加入Selexipag對照品各3份，按“1.2.1”項下色譜條件進(jìn)樣，測得平均加樣回收率為100.2%，RSD為0.61%。

2.7含量測定

量取供試品溶液10μL注入液相色譜儀測定；另取對照品溶液，同法測定。按外標(biāo)法計算供試品中Selexipag的含量。按“1.2.1”項下色譜條件對3批次供試品進(jìn)行含量測定，測定結(jié)果分別為99.49%，99.67%和99.56%。

2.8有關(guān)物質(zhì)的測定

調(diào)節(jié)儀器靈敏度，分別量取有關(guān)物質(zhì)檢查用供試品溶液及對照溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分Selexipag峰保留時間的3倍。按“1.2.1”項下色譜條件對3批次供試品進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查，結(jié)果分別為0.12%，0.09%和0.11%。

3　結(jié)論

建立測定Selexipag含量和有關(guān)物質(zhì)的HPLC法。色譜條件如下：色譜柱：C18色譜柱（4.6mm×200mm，5μm）；流動相：0.1mol/L磷酸氫二鈉溶液（磷酸調(diào)節(jié)pH至7.2）一乙腈（75：25）；流速為1.0mL/min；檢測波長為251nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣量為10μL。此法用于檢測Selexipag含量及有關(guān)物操作靈敏、快速、簡便、準(zhǔn)確。

［1］夏訓(xùn)明.美國FDA批準(zhǔn)Uptravi（selexipag）片劑治療肺動脈高壓，廣東藥學(xué)院學(xué)報，2016年01期，35頁

［2］美國FDA批準(zhǔn)治療肺動脈高壓藥物Selexipag上市，中國執(zhí)業(yè)藥師，2016年03期，54頁

［3］劉永貴，趙麗嘉，肖桂芝等.Selexipag，現(xiàn)代藥物與臨床，2010年06期，469-471頁

馬慧麗（1981-），女，河北省石家莊市人，工程師，主要從事醫(yī)藥研發(fā)、知識產(chǎn)權(quán)方面工作。